以丹参茎叶总酚酸为底物的丹酚酸A化学转化研究及其抗氧化活性

目的:优选丹参茎叶总酚酸为底物转化丹酚酸A的工艺参数,并进一步评价其转化前后的抗氧化活性。方法:以丹酚酸A转化率为指标,考察不同酸、pH值、反应时间、反应温度、底物浓度(以丹酚酸B计)等因素对转化率的影响,结合正交试验结果,优选丹参茎叶酚酸部位化学转化工艺,对转化前后总酚酸的抗氧化活性进行评价。结果:优选的转化工艺为:盐酸调节pH值为3,底物浓度(以丹酚酸B计)15 mg/mL,反应温度135℃,反应时间2 h,转化率可达89%,转化后其化学构成发生改变,丹酚酸A、丹参素、原儿茶醛含量显著提高。丹参茎叶总酚酸转化后对DPPH·和ABTS自由基的IC_(50)值分别为(3.00±0.16)mg/mL、(16.88±0.32)mg/mL,FRAP法为(1.15±0.03)mmol FeSO_(4),较转化前表现出更优的抗氧化能力。结论:采用化学转化方法可有效实现丹参茎叶总酚酸高效转化为高附加值的丹酚酸A,提升其资源利用价值。

HPLC测定丹参茎叶花中迷迭香酸和丹酚酸B的含量

目的:建立高效液相法测定丹参茎、叶、花中迷迭香酸和丹酚酸B的定量分析方法。方法:采用Gemini C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸水作为流动相进行梯度洗脱,流速:0.8 mL·min^(-1),检测波长:286 nm。结果:迷迭香酸和丹酚酸B分别在0.08~2.09μg(r=1.000 0)、0.11~2.67μg(r=0.999 9)线性关系良好,回收率分别为97.4%、98.3%。结论:该方法专属性强,结果准确可靠,重现性好,可用于丹参茎、叶、花中迷迭香酸和丹酚酸B的含量测定,以便更好地开发和利用丹参茎、叶、花资源。

白花丹参根与茎叶水提物对脑缺血再灌注小鼠耐缺氧能力的影响

目的观察白花丹参根与茎叶水提物对脑缺血再灌注小鼠耐缺氧能力的影响,分析白花丹参茎叶的药用价值。方法建立小鼠脑缺血再灌注模型,分别采用断头法和失血性休克法,观察白花丹参根和茎叶水提物灌胃给药对脑缺血再灌注小鼠张口呼吸时间和心脏搏动时间的影响。结果白花丹参根与茎叶水提物20和30 g.kg-1,能明显延长断头鼠头的张口呼吸时间,缩短失血性休克小鼠的心脏搏动时间。白花丹参根水提物对心脏搏动的影响作用较强,白花丹参茎叶水提物对脑缺血保护作用较强。结论白花丹参根和茎叶水提物能明显增强脑缺血再灌注小鼠的耐缺氧能力。

白花丹参茎叶水提取物对博莱霉素致肺纤维化小鼠的保护作用

目的:探讨白花丹参茎叶水提取物对博莱霉素致肺纤维化小鼠的治疗作用。方法:建立博莱霉素致小鼠肺纤维化模型,给予白花丹参茎叶水提取物ig治疗后,比较各组肺指数、肺组织病理形态、羟脯氨酸(Hyp)及超氧化物歧化酶(SOD)水平的测定,观察白花丹参茎叶水提取物对小鼠肺纤维化形成的影响。结果:白花丹参茎叶水提取物和对照组的肺指数、肺泡炎、肺纤维化的程度、Hyp及SOD均明显低于模型组(P<0.05或0.01),且白花丹参茎叶水提取物的高、低组接近对照组。结论:白花丹参茎叶水提取物能减轻博莱霉素致小鼠肺纤维化程度并有一定的治疗作用。

丹参茎叶质量标准研究

为建立丹参茎叶质量标准,按照2010年版《中国药典》相关要求,分别建立丹参茎叶总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、薄层色谱等项目的检查方法并规定限度,采用HPLC法建立丹参茎叶的迷迭香酸和丹酚酸B含量测定方法并规定了限度.结果表明：丹参茎叶的总灰分不应超过7.22%,酸不溶性灰分不应超过0.67%,浸出物不得少于14.54%,迷迭香酸和丹酚酸B含量分别0.34%-0.94%、0.68%-0.14%之间.本研究建立的质量标准可以控制丹参茎叶的质量.

丹参茎叶酚酸组分对溃疡性结肠炎模型小鼠的干预作用

目的研究丹参茎叶总酚酸及其主要效应成分丹酚酸B和迷迭香酸组分单独或混合使用对溃疡性结肠炎(ulcera-tive colitis,UC)模型小鼠的保护作用,以期为丹参茎叶酚酸类成分的资源化利用提供科学依据。方法小鼠自由饮用2%葡聚糖硫酸钠7 d建立UC模型,再连续灌胃给药7 d,给药期间记录小鼠体重变化及疾病活动指数(DAI)评分。实验结束后,取结肠分别进行长度测量,HE染色,ELISA法测TNF-α、IL-6和IL-4含量,实时荧光PCR测IL-6、COX2和IL-17A mRNA水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠体重明显减轻,结肠明显短缩,结肠组织TNF-α、IL-6和IL-4水平及IL-6、COX2和IL-17A mRNA表达明显升高,丹参茎叶总酚酸及其主要效应成分丹酚酸B和迷迭香酸单独或混合给药干预后上述指标得到改善。结论丹参茎叶总酚酸及丹酚酸B和迷迭香酸单独或混合给药均能够改善UC模型小鼠肠道症状和减轻炎症反应,为丹参茎叶抗UC研究与开发利用提供了科学依据。

干燥方式对丹参茎叶中酚酸类成分及其抗氧化活性的影响

目的探究干燥方式对丹参茎叶中酚酸类成分及其抗氧化活性的影响。方法采用福林-酚比色法测定丹参茎叶中总酚酸含有量,HPLC法测定丹酚酸B、迷迭香酸、丹参素、咖啡酸的含有量;采用铁氰化钾还原法、DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除法测定其抗氧化活性。结果经真空冷冻干燥的丹参茎叶中总酚酸、迷迭香酸、丹参素和咖啡酸的含有量均最高,分别为112.12、25.94、0.70、0.69 mg/g,干燥方式对丹酚酸B含有量无显著影响。3种干燥方式处理抗氧化活性强弱依次为真空冷冻干燥、自然阴干、恒温鼓风干燥。结论真空冷冻干燥为丹参茎叶的最佳干燥方式。

丹参非药用部位药用价值及开发利用研究进展

丹参为传统大宗药材,种植区域广、面积大,生产过程中产生大量的花、茎叶及须根等非传统药用部位。为充分开发利用丹参植物资源,促进产业发展,本文对丹参非传统药用部位的化学成分、药理活性及开发利用研究进行系统的归纳总结。

功能型丹参香菇袋料高产栽培技术

丹参是我国一种重要的中药材,利用丹参根挖出后废弃的茎叶生产具有保健功能的丹参香菇,变废为宝,提高了种植丹参的栽培效益,又增添了袋料香菇的新品系。

正交试验优选丹参茎叶中丹参素和丹酚酸B的提取工艺研究

目的:探讨丹参茎叶中丹参素和丹酚酸B的提取工艺优化。方法:以丹参素和丹酚酸B含量作为研究指标,考察了提取次数、提取时间、溶剂量、浸泡时间对丹参茎叶中水溶性成分提取率的影响,并通过正交试验设计确定了其最佳提取工艺。结果:取丹参茎叶中粉加入10倍量的水,浸泡1.0h,提取0.5h/次,100℃下提取3次,是其最佳提取工艺。结论:该工艺稳定可靠,可为丹参茎叶中的水溶性成分的工业化提取提供科学依据。

不同生长期丹参茎叶及花序中丹酚酸类化学成分的分布与积累动态分析评价

目的对丹参地上茎叶、花序中7种丹酚酸类化学成分进行分析与评价,并探讨其在丹参植物生长过程中的动态积累规律,以期挖掘丹参地上部分的资源化利用价值与产业化开发前景。方法采用UPLC-TQ/MS联用技术,以Acquity UPLC BEH C18为色谱柱;乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.4 m L/min,柱温35℃,质谱采用正、负离子模式电离,多反应检测（MRM）方式,对7种丹参酚酸类化学成分进行分析与检测。结果丹参茎叶中含有丰富的水溶性丹酚酸类化学成分,但未检测到脂溶性的丹参酮类成分;不同生长期丹参茎叶中酚酸类化学成分的量差异较大,除丹酚酸A外,各酚酸类成分量均在7～8月积累量达到最高值,以后逐渐降低。丹参花序中的丹参酚酸类成分总量在花盛期达到峰值,其在达到花盛期前动态变化趋势不明显,但当花冠进入凋萎期时,丹酚酸类成分量急剧下降。结论丹参非传统药用部位茎叶及花序中含有丰富的水溶性丹酚酸类资源性化学成分,尤其是迷迭香酸和丹酚酸B量较高,生长茂盛期其酚酸类成分的总量明显高于丹参根及根茎中的量。因此,丹参茎叶、花序可作为获取丹酚酸类化学物质的重要原料资源。

丹参茎叶提取物抗氧化活性物质基础与量效关系研究

目的以7月份和12月份采收丹参茎叶的水提物和醇提物为研究对象,评价丹参茎叶提取物的抗氧化效应,并探讨丹参茎叶提取物抗氧化活性的物质基础。方法采用超高效液相-三重四级杆质谱联用技术(UPLC-TQ/MS)对各提取物中化学成分进行定性定量分析,明确丹参茎叶提取物中主要丹酚酸类化合物(丹参素、咖啡酸、迷迭香酸和丹酚酸B),基于1,1-二苯基-2-三硝基苦肼(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除法和铁还原/抗氧化能力(FRAP)法对丹参茎叶提取物进行抗氧化活性评价,同时以市售丹参(根及根茎)样品作对照。结果 7月份采收丹参茎叶水提物(SY-7)抗氧化活性最强,且总酚酸的量最高(75.663 mg/g),其次为7月份采收丹参茎叶醇提物(CY-7),市售丹参提取物抗氧化活性及总酚酸的量均低于7月份采收丹参茎叶提取物。丹酚酸单体化合物丹参素、咖啡酸、迷迭香酸和丹酚酸B均具有明显抗氧化、清除自由基能力,且表现出明显的量效关系。结论丹参茎叶水提物和醇提物具有较强的体外抗氧化活性,且含有丰富的丹酚酸类化合物,其中含有的丹参素、咖啡酸、迷迭香酸和丹酚酸B具有明显抗氧化活性。

不同产地丹参茎叶UPLC指纹图谱与化学模式识别研究

目的研究并建立不同产地丹参茎叶UPLC指纹图谱,采用电喷雾离子源-四极杆-飞行时间质谱(ESI-QTOF/MS)对其特征峰进行定性研究,为丹参地上茎叶资源的综合开发利用提供科学依据。方法采用UPLC法构建丹参茎叶的指纹图谱,色谱条件为ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱,体积流量0.4 m L/min,检测波长280 nm,柱温35℃。质谱检测采用负离子模式;电压3.0 k V;离子源温度120℃;雾化温度400℃;雾化气800 L/h。同时应用相似度评价、聚类分析和主成分分析(PCA)对实验数据进行处理,以分析5个不同产地12批丹参茎叶样品间的相似性及差异性,并通过UPLC/Q-TOF/MS对丹参茎叶共有峰进行了定性分析。结果获得丹参茎叶UPLC特征图谱,共有峰13个。12批丹参茎叶的相似度为0.823~0.997,聚类分析、PCA结果与相似度分析结果一致。结论丹参茎叶UPLC指纹图谱的构建和化学模式的识别为其质量控制和丹参非药用部位利用价值的挖掘提供科学依据。

丹参茎叶总酚酸对2型糖尿病肾病小鼠肠道菌群和短链脂肪酸的调节作用

为研究丹参茎叶总酚酸对自发性2型糖尿病肾病小鼠的肠道菌群和短链脂肪酸的调节作用,以db/db小鼠为研究对象,进行丹参总酚酸干预。动物福利和实验过程均遵循南京中医药大学药物安全性评价研究中心动物伦理委员会的规定。采集小鼠新鲜粪便及盲肠内容物进行肠道菌群组成和差异菌群等分析;采用气相色谱法检测短链脂肪酸含量,并与肠道菌群进行相关性分析。结果表明,与空白组相比,模型组小鼠两类样本中下降最显著的差异菌群分别是g_Rikenellaceae_RC9_gut_group和g_Bacteroidales_S24-7_group;上升最显著的分别是g_unclassified_f__Coriobacteriaceae和g_unclassified_p__Firmicutes。模型组小鼠新鲜粪便中的异戊酸和戊酸以及盲肠内容物中6种短链脂肪酸含量显著减少(P<0.01)。药物干预后,肠道菌群紊乱和短链脂肪酸减少情况均有不同程度改善,且丹参茎叶总酚酸组对部分菌群和短链脂肪酸的调节作用略优于丹参根总酚酸组。相关性分析结果显示,g_Rikenellaceae_RC9_gut_group与盲肠内容物中的乙酸和异丁酸均呈中度正相关(r>0.4),提示丹参茎叶总酚酸可改善2型糖尿病肾病小鼠肠道菌群紊乱,并可通过调节部分产短链脂肪酸菌含量回调肠道内短链脂肪酸的含量,从而有助于恢复正常。

丹参及丹参茎叶水提物UPLC指纹图谱研究与丹酚酸类成分定量分析

目的:建立并比较丹参、丹参茎叶水提物UPLC特征指纹图谱,同时分析评价7种丹酚酸类成分(丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸A),以期为丹参资源的综合利用提供科学依据。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0~1 min,5%A;1~3 min;5%A→10%A;3~7 min,10%A→15%A;7~11 min,15%A→21%A;11~15 min,21%A→33%A;15~17 min,33%A→70%A;17~18 min,70%A→80%A;18~20 min,80%A;20~21 min,80%A→5%A),流速0.4 m L·min^(-1);检测波长为280 nm。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"建立对照图谱和进行相似度评价,SPSS 19.0进行主成分分析和聚类分析。结果:丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸A线性范围分别为1.145~229、0.81~162、0.95~190、1.265~253、1.285~257、1.055~211和0.87~174μg·mL^(-1),R^2为0.999 8以上;平均回收率在97.3%~103.5%之间,RSD均小于3%(n=6)。结论:主成分分析将丹参、丹参茎叶各聚为一类,聚类分析和相似度评价表明丹参及其茎叶水提物指纹图谱具有一定相似性,相似度最高可达0.981,共有化学成分主要为丹酚酸类成分。定量分析表明不同批次丹参、丹参茎叶中丹酚酸类成分含量存在一定差异,但丹酚酸类成分的种类组成相一致。

丹参茎叶提取物及其主要成分对人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制研究

目的探讨丹参茎叶提取物及其主要成分对氧化应激和高糖损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用及机制。方法建立HUVECs氧化应激与高糖损伤模型,分别给予不同剂量的丹参茎叶醇提物(CJ)、丹参茎叶水提物(SJ)、丹参根醇提物(CG)、丹参根水提物(SG)及迷迭香酸、丹酚酸B、芦丁、异槲皮苷、隐丹参酮等,MTT法检测细胞活力,检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)、细胞黏附因子(ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果与对照组比较,HUVECs经H2O2处理后,GSH-Px、CAT和NO含量降低(P<0.01),ET-1含量升高(P<0.01);HUVECs经高糖处理后,ICAM-1和TNF-α含量升高(P<0.01),NO含量降低(P<0.01)。与模型组比较,CJ、CG、SJ、SG组GSH-Px、CAT和NO含量升高,ET-1、ICAM-1、TNF-α含量降低(P<0.05、0.01)。迷迭香酸、丹酚酸B、芦丁等的高、中剂量组,异槲皮苷、隐丹参酮高剂量组均能显著提高GSH-Px、CAT和NO含量(P<0.05、0.01),降低ET-1含量(P<0.05、0.01),丹酚酸B、异槲皮苷和芦丁的高剂量组及迷迭香酸的高、中剂量组均可显著降低ICAM-1含量(P<0.01),除氨基胍给药组外,其他给药组TNF-α含量相比模型组明显降低(P<0.05、0.01)。除氨基胍和异槲皮苷低剂量组,其他给药组NO含量均明显升高(P<0.05、0.01)。结论一定质量浓度范围内的丹参茎叶与丹参根醇提物及水提物、迷迭香酸、丹酚酸B、芦丁、异槲皮苷对H2O2和高糖引起的HUVECs细胞损伤具有明显保护作用,其作用机制与抑制细胞间黏附分子的表达,调节NO和TNF-α生成密切相关。本研究将为丹参药材生产过程产生的非药用部位茎叶的资源价值发现及转化利用提供参考。

丹参茎叶药材的质量标准研究

目的:丹参花期至初秋地上嫩茎叶部位是制药或制茶的原料,研究制定其质量标准,使其资源化价值不断提升和拓展。方法:运用薄层色谱法分别对芦丁、异槲皮苷、迷迭香酸和丹酚酸B进行定性鉴别,其条件:以醋酸丁酯-甲酸-水(10∶2∶3)为展开剂,紫外灯(365 nm)下检视;参照中国药典2015年版附录相关方法对丹参茎叶药材的总灰分和酸不溶性灰分进行测定;运用高效液相色谱法分别对丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、芦丁、异槲皮苷、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B进行定量测定,其条件:色谱柱为Grace Apollo C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水(B),梯度洗脱(0~5 min,10% A;5~10 min,10% A→12% A;10~20 min,12% A→14% A;20~25 min,14% A→20% A;25~60 min,20% A→30% A;60~65 min,30% A→40% A);流速1 mL·min^(-1),检测波长280 nm和256 nm。结果:薄层色谱鉴别芦丁、异槲皮苷、迷迭香酸和丹酚酸B,色谱斑点清晰,分离度良好;10批样品中总灰分测定结果为7.14%~9.86%,酸不溶性灰分为0.06%~0.38%;HPLC色谱分析结果表明,丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、芦丁、异槲皮苷、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B进样质量分别在0.163~3.26、0.118~2.36、0.117~2.34、0.158~3.16、0.252~5.04、0.100~2.00、0.132~2.64和0.131~2.62μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(R^2=0.999 4~1.000 0),且分离度良好,平均加样回收率分别为102.1%、95.53%、100.8%、99.63%、97.48%、101.4%、98.44%和102.6%;10批样品各指标成分的含量分别在0.05%~0.11%、0.01%~0.02%、0.07%~0.23%、0.04%~0.35%、0.07%~0.20%、1.17%~4.25%、0.03%~0.16%和1.68%~5.10%之间。结论:建立的定性和定量方法可用于客观评价丹参茎叶及其产品的品质评价与质量控制,为制定丹参茎叶药材质量标准和开发利用丹参茎叶资源提供了可靠的方法和科学依据。

基于酶活性的丹参茎叶活血活性谱-效模型

目的:以12批丹参茎叶为研究对象,为究其HPLC指纹图谱中色谱峰和活血活性的相关性,建立其基于酶活性的活血活性谱-效模型并进行验证。方法:采用高效液相色谱法和纤维蛋白原平板法,测定6批丹参茎叶的指纹图谱和体外活血活性值,用对照品对指纹图谱特征峰进行指认,并对指纹图谱特征峰成分与其活血活性进行相关分析;运用SPSS软件,采用主成分分析-相关性分析-多重线性回归的分析方法建立其谱-效模型,采用6批丹参茎叶对该模型进行验证。结果:丹参茎叶指纹图谱中得到7个特征峰,由Kendalls tau-b相关性分析可证明丹参茎叶活血活性与7个色谱峰峰面积有相关性,陡坡图分析得该模型的最优主成分数为5,经指认分别为原儿茶醛,咖啡酸,共有峰5(未指认),迷迭香酸和丹酚酸B。其中原儿茶醛、共有峰5和丹酚酸B对活血作用显正相关,咖啡酸(CA)和迷迭香酸(PCA)对活血作用显负相关,预测值和实测值的平均相对误差较小。结论:该实验建立的基于酶活性的活血活性谱-效模型可较好地预测丹参茎叶的活血活性。