乌蕨(Stenoloma chusanum)水部位的体内抗氧化作用研究

目的:研究乌蕨水部位的体内抗氧化作用.方法:采用小鼠CCl4损伤模型,观察乌蕨水部位的抗氧化作用,测定乌蕨对小鼠血液中SOD、GSH-PX酶活性、MDA含量的影响.结果:乌蕨可降低血清中MDA含量(P<0.01),提高小鼠的血清SOD酶(P<0.01)、全血GSH-PX酶的活力(P<0.05).结论:表明乌蕨水部位具有体内抗氧化活性.

乌韭的化学成分研究

目的研究乌韭Stenoloma chusanum全草的化学成分。方法用硅胶、聚酰胺、Lichroprep RP-18、Sephadex LH20等对乌韭的乙醇提取物进行分离,根据化学方法和波谱数据(ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC)对分离所得的化合物进行结构鉴定。结果分离并鉴定了7个化合物,分别为荭草苷(orientin,Ⅰ)、荭草苷-2″-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(orientin-2″-O-β-D-glucopyranoside,Ⅱ)、牡荆素(vitexin,Ⅲ)、芹菜素(apigenin,Ⅳ)、丁香酸(syringic acid,Ⅴ)、香草酸(vanillic acid,Ⅵ)和龙胆酸(gentisic acid,Ⅶ)。结论化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ为首次从该植物中分离得到。

HPLC法测定乌韭的荭草苷和牡荆素含量

建立乌韭地上部分荭草苷和牡荆素含量的测定方法，检测不同产地乌韭中两种黄酮苷的含量，对乌韭资源进行评价。用超声波提取法提取，反相高效液相色谱法（RP—HPLC）测定，Gemini C18色谱柱，乙腈／1％磷酸溶液（体积比15：85）为流动相，流速1mL／min，检测波长340nm。荭草苷在0．025～0．148μg范围内有良好的线性关系，加样回收率为100.61％，相对标准偏差（RSD）2．18％；牡荆素在0．035—0．207μg范围内有良好的线性关系，加样回收率为99．77％，RSD2．37％。云南丘北所产乌韭的荭草苷和牡荆素质量分数都是最高，分别达到0．1166％和0．1457％，移栽到南京地区1年后荭草苷含量下降，牡荆素含量增高。以荭草苷和牡荆素含量为指标，云南丘北所产乌韭是较好的种源。

大叶金花草多糖的提取、分离纯化及结构分析

采用热水提取法从大叶金花草中提取大叶金花草多糖,用酶法和Seveg法去除蛋白质,H2O2脱色,经DEAE-纤维素(Cl-)柱层析纯化后,纸层析和Sephadex G-100凝胶柱层析证实为单一组分,并用凝胶色谱法、薄层层析、乙酰化GC-MS、紫外光谱和红外光谱等对其组成和结构进行了研究。大叶金花草多糖平均分子质量为8.6×104u,由阿拉伯糖、葡萄糖和糖醛酸组成,在260和280nm处有多糖无核酸和蛋白质的吸收峰。大叶金花草多糖是含有β-吡喃葡萄糖的非蛋白类单一多糖。

乌蕨总黄酮提取工艺研究

目的筛选乌蕨中总黄酮的最佳提取工艺。方法采用正交试验设计,考察乙醇浓度、溶剂倍数、提取时间对总黄酮提取率的影响。采用分光光度法测定总黄酮的含量,并与水煎法、乙醇温浸法比较。结果乌蕨的乙醇回流提取法效果最好。结论乌蕨中总黄酮提取的最佳工艺条件为加15倍量65%的乙醇,回流提取2次,每次1h。

乌蕨总黄酮体外抗氧化活性的研究

目的研究乌蕨总黄酮体外抗氧化活性。方法采用分光光度法,测定乌蕨总黄酮对羟自由基、脂质过氧化的清除能力、总还原力和总抗氧化作用,并通过多元线性回归分析,考察了乌蕨总黄酮含量及其体外抗氧化活性的相关性。结果乌蕨总黄酮具有较强的抗氧化性能、自由基清除能力和一定的还原力,可有效抑制脂质过氧化,且抗氧化作用与乌蕨总黄酮含量呈正相关。结论乌蕨总黄酮具有显著的抗氧化活性,黄酮类化合物可能是其抗氧化作用的主要物质基础。

乌蕨醇提取物对1型糖尿病大鼠的降血糖作用及其机制初探

为探讨乌蕨醇提取物对1型糖尿病大鼠的降血糖作用及其机制,本研究以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导建立1型糖尿病大鼠模型,并将大鼠分为空白对照组、1型糖尿病模型组、乌蕨醇提取物低剂量组(30 mg/kg)和高剂量组(60 mg/kg)。分别用生理盐水及乌蕨醇提取物每天灌胃1次,连续28 d,灌胃容积为20 m L/kg。结果证明,乌蕨醇提取物可减缓STZ致1型糖尿病大鼠体重的负增长,降低空腹血糖水平(P <0. 05);升高胰岛素及葡萄糖激酶(GCK)含量;降低醛糖还原酶(AR)含量(P <0. 05)。同时,胰腺组织HE染色结果显示:乌蕨提取物高、低剂量组糖尿病大鼠的胰岛数目较1型糖尿病模型组显著增多,胰岛及外分泌腺萎缩均有不同程度减轻。提示乌蕨提取物可显著降低STZ致1型糖尿病模型大鼠空腹血糖水平,其降糖作用可能与升高糖尿病大鼠血清葡萄糖激酶含量和降低AR含量、改善糖尿病大鼠胰岛损伤、促进胰岛β细胞分泌胰岛素有关。

不同产地乌韭地上部分总黄酮含量的比较分析

Contents of total flavonoids in above-ground part of Stenoloma chusanum(L.) Ching collected from different production regions were analyzed.The results showed that total flavonoid content in above-ground part of S.chusanum collected from Qiubei of Yunnan Province was the highest,reached to 127.461 mg·g-1,and could keep the high content after transplanted to Nanjing of Jiangsu Province.The total flavonoid content in leaf blade was obviously higher than that in leaf stalk.It is suggested that S.chusanum from Qiubei is an excellent resources and the leaf blade of S.chusanum should be used mainly.

乌蕨不同部位总黄酮和元素的分析

[目的]比较乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位总黄酮和元素的含量差异。[方法]采用可见分光光度法测定不同部位总黄酮的含量;采用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES法)测定不同部位元素的含量。[结果]乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位总黄酮含量分别11.89%、4.47%、3.46%和11.75%,不同药用部位元素的含量存在一定的差异。[结论]乌蕨含有丰富的黄酮类化合物和多种元素,具开发价值。

乌蕨不同提取物体外抑菌作用比较研究

目的:比较乌蕨不同提取物的体外抑菌作用。方法:采用二倍稀释法测定提取物的最小抑菌浓度。结果:乌蕨醇提物、水提物抑菌作用明显强于其乙酸乙酯提物、丙酮提物、正丁醇提物。结论:各提取物均有一定抑菌作用,乌蕨可进一步开发利用。

高效液相色谱法测定乌蕨中牡荆苷的含量

目的建立测定乌蕨中牡荆苷含量的高效液相色谱方法。方法采用DIONEX-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈∶甲醇∶0.2%冰醋酸水溶液(23∶77)为流动相,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长270nm。结果牡荆苷在0.009-0.180mg/mL浓度范围内有良好线性关系(r=0.9995),平均加样回收率为98.0%,RSD小于2.0%。结论本方法简便、快速、准确、重复性好,可用于乌蕨中牡荆苷的含量测定。

大孔树脂吸附乌蕨总黄酮的热力学研究

目的:研究乌蕨总黄酮在大孔树脂上的吸附特性及热力学性质。方法:采用静态法,考察HPD系列和XAD系列共12种大孔吸附树脂对乌蕨总黄酮的吸附及解析特性,确定最佳吸附树脂。根据不同等温吸附模型Langmuir及Freundlich方程分别对实验数据进行线性回归,通过相关系数的分析评价模型的适用性,并计算吸附过程热力学参数。结果:HPD300的吸附效果最好。其吸附焓变ΔH>0,吸附熵变ΔS和吸附自由能ΔG均小于零。结论:HPD300吸附乌蕨总黄酮的过程为放热过程,低温有利于吸附;同时,吸附过程为非自发过程,范德华力克服放热过程吸附主动进行。

乌蕨孢子繁殖技术的研究

研究了乌蕨(Stenoloma chusanum(L.)Ching)孢子无菌繁殖和常规繁殖方法。结果表明,乌蕨孢子在1/4MS培养基培养时的萌发率最高,达85.3%;在1/2MS培养基中的配子体成苗率最高,达85.9%;1/2MS培养基是培养优质孢子体苗的最佳培养基;河沙与草炭土体积比为1∶1的混合基质是播种孢子的理想基质,孢子萌发率和配子体成苗率分别达到82.6%和73.4%;无菌繁殖和常规繁殖所得的幼孢子体苗移栽成活率均达90%以上。

药用植物乌蕨配子体发育的观察

药用植物乌蕨（Stenoloma chusanum（L.）Ching）配子体发育周期短而迅速,是一种研究蕨类配子体世代的生理生态和分子生物学等特征的理想试验材料。本文采用原生境腐殖土培养方法对乌蕨的孢子进行人工培养,观察并记录其孢子萌发和配子体发育的过程。结果表明：乌蕨孢子呈黄色,单裂缝,二面体形;孢子萌发为书带蕨型（Vittaria-type）。丝状体4~6个细胞,有时具二叉分枝。片状体为长楔形,达6-8个细胞宽。成熟的原叶体为对称心形,裸露,发育为槲蕨型（Drynaria-type）,并且具备一定的营养繁殖能力。原叶体上的假根为单细胞且不含叶绿体。精子器为盖裂开放,颈卵器短而直立。利用孢子培养的方法对乌蕨种苗进行人工繁殖,将为保护性开发利用这一重要药用资源奠定基础。

苗药乌蕨提取物抗炎作用及其机制研究

目的:探讨乌蕨提取物抗炎作用及其机制。方法 :采用小鼠耳肿胀实验及腹腔毛细血管通透性实验方法观察乌蕨提取物的抗炎作用,并检测小鼠血清中环氧化酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及一氧化氮(NO)含量。结果:乌蕨提取物能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀;显著抑制冰醋酸导致的小鼠腹腔毛细血管通透性增高;能显著降低实验小鼠血清COX-2、PGE2、TNF-α、NO水平。结论:乌蕨提取物具有一定的抗炎作用,其作用机制可能与抑制炎症因子合成及释放有关。

双波长高效液相色谱法同时测定乌蕨中6种主要活性成分含量

目的建立同时测定乌蕨中原儿茶酸、原儿茶醛、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、木犀草苷等6种主要活性成分含量的双波长高效液相色谱法。方法选用赛默飞(Thermo)A型C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.4%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,原儿茶酸、原儿茶醛检测波长为280 nm,荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、木犀草苷检测波长为350 nm。柱温:30℃,流速:1 mL·min-1;进样量:5μL。结果乌蕨中原儿茶酸、原儿茶醛、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、木犀草苷六种活性成分分离度良好,质量分别在0.1619~1.2144,0.0637~0.4779,0.0835~0.6265,0.2385~1.7885,0.0778~0.5837,0.0263~0.1970μg呈良好的线性关系,均r≥0.9999,平均回收率分别为100.42%,101.78%,99.17%,105.12%,97.86%,101.54%;RSD分别为2.38%,2.53%,2.31%,3.06%,2.13%,3.87%。结论该方法简单,结果准确,重复性、稳定性好,可为制订乌蕨的质量控制标准提供参考依据。

乌蕨与黄连、黄芩、穿心莲抗菌活性的比较

为研究乌蕨的抗菌活性强度 ,采用二倍平皿稀释法将其与黄连、黄芩、穿心莲等抑菌结果进行比较。结果显示 :乌蕨抗菌作用与黄连、黄芩相近 ,而强于穿心莲。

乌蕨配子体发育及卵发生的显微观察

采用光学显微镜对乌蕨的配子体发育及卵发生的过程进行了研究,以阐明蕨类植物颈卵器发育特征,为揭示蕨类植物有性生殖机制以及鳞始蕨科的演化提供依据。结果表明:(1)乌蕨孢子黄褐色,具单裂缝,表面平滑或呈疣状纹饰;孢子接种12d萌发,萌发类型为书带蕨型,原叶体发育类型为铁线蕨型。(2)半薄切片观察表明,乌蕨颈卵器产生于原叶体生长点下方的表面细胞,即颈卵器原始细胞,该细胞经过两次分裂形成纵向3层细胞,最上层细胞发育为颈卵器的颈部壁细胞,中间层细胞即初生细胞再经过两次不等分裂产生颈沟细胞、腹沟细胞和卵细胞,此三细胞最初紧密贴合,随着颈卵器的发育,卵细胞与腹沟细胞间从两侧向中间产生分离腔,且腹沟细胞与颈沟细胞开始退化;分离腔逐渐向中间扩大,直至出现孔状结构,即受精孔;颈卵器发育后期,在卵细胞上表面形成染色较深的卵膜,颈沟细胞与腹沟细胞退化成絮状物。

乌蕨挥发油成分分析及其抗菌活性

对植物乌蕨(Stenoloma chusanum(L)Ching)中的挥发油成分进行定性和定量分析并开展其抗菌试验.采用水蒸汽蒸馏提取挥发油成分,用气相色谱-质谱(GC/MS)联用仪进行成分分析;采用纸片法扩散法开展其抑菌试验.从乌蕨挥发油中分析出36种成分,鉴定了其中的24种,其主要成分是芳樟醇(24.76%),松油醇(7.24%)和香叶醇(6.06%).抗菌活性研究显示,乌蕨挥发油对枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌有明显的抑制作用,对铜绿假单胞菌大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌抑制活性很低或没有活性.乌蕨挥发油成分检出率为72.0%,其中主要成分为单萜类化合物;挥发油具有一定的抗菌活性.

乌蕨醇提取物对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:观察乌蕨醇提取物对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群、细胞因子水平及核转录因子-κB(NF-κB/P65、NF-κB/P50)蛋白表达的影响,进一步研究其抗肿瘤机制。方法:将60只雄性昆明小鼠随机分为6组,分别为正常对照组、模型组、环磷酰胺组(50mg/kg)、乌蕨低、中、高剂量组(2.5、5.0、10.0 g/kg),制备小鼠S180荷瘤模型,于造模第二天,各组分别给予乌蕨醇提取物灌胃、环磷酰胺腹腔注射,连续给药14 d后,采用流式细胞术分析荷瘤小鼠外周血CD3^+、CD4^+和CD8^+细胞在T淋巴细胞中的百分含量,并计算CD4^+/CD8^+比值;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测荷瘤小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10);蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测肿瘤组织IL-10、IL-17、TNF-α及NF-κB/P65、NF-κB/P50的蛋白表达。结果:与模型组相比,乌蕨10.0、5.0、2.5 g/kg可显著提高荷瘤小鼠CD3^+淋巴细胞和CD4^+T淋巴细胞阳性率,显著降低中性粒细胞率、单核细胞百分比和CD8^+T淋巴细胞阳性率,显著升高CD4^+/CD8^+比值;升高血清IL-6及IL-10水平,显著提高肿瘤组织IL-10、IL-17、TNF-α、NF-κB/P65和NF-κB/P50蛋白的相对表达量。结论:乌蕨具有明显的体内抗肿瘤活性,其机制可能与激活NF-κB信号通路,升高荷瘤小鼠机体细胞因子水平、增强机体免疫功能有关。