嗜麦芽寡养单胞菌(DR-929)纤溶酶的发酵条件优化及其分离纯化

研究了嗜麦芽寡养单胞菌（DR-929）纤溶酶的液体发酵条件及其分离纯化。最佳发酵条件为：可溶性淀粉2．0％，黄豆粉1．0％，酵母膏0．5％，NaCI1．0％，CaCl20．02％，MgS040．05％，种龄36h，发酵时间4d，初始pH8．0或9．0，温度25℃，装样量30ml，接种量5％或6％。采用发酵液离心除菌，25％-70％饱和度的硫酸铵沉淀，Phenyl FF（highsub）疏水层析，Q—SepharoseFF离子交换层析，Superdex 75凝胶过滤层析对活性成分分离纯化。用SDS—PAGE电泳对纯化效果进行检验，结果表明在SDS—PAGE中得到单一条带，分子量28．3kDa。最终纯化倍数和酶活回收率分别为271．5和24．5％。

豆豉溶栓酶工程菌的发酵条件及重组溶栓酶的分离纯化

对豆豉溶栓酶工程菌株WB DFE5进行了摇瓶发酵条件的研究 ,确定了发酵的优化条件为 :可溶性淀粉 2 % ,酪蛋白 2 % ,大豆蛋白胨 0 5 % ,酵母粉 0 15 % ,K2 HPO40 2 5 % ,KH2 PO40 0 5 % ,CaCl2 0 0 2 % ,MgSO40 0 5 % ,pH7 0。通过硫酸铵分段盐析、离子交换和凝胶过滤 ,从 1L工程菌株WB DFE5的发酵液中分离纯化出 12 5mg重组豆豉溶栓酶 ,酶的比活为 5 918 7IU/mg。