大麻素受体1、FAK mRNA在小鼠肝纤维化形成过程中肝组织中的表达及相互关系

目的研究大麻素受体1(CB1)mRNA在肝纤维化形成过程中表达的变化,从基因转录水平探讨其与黏着斑激酶(FAK)的关系。方法采用10%四氯化碳腹腔注射制备肝纤维化模型,分别于造模第2、4、6、8周留取小鼠的肝组织及血清。通过肝组织病理对肝纤维化程度进行评分,荧光定量PCR检测CB1 mRNA和FAK mRNA水平,ELISA方法检测血清中转化生长因子(TGF)β1的含量。结果与正常对照组相比,各模型组小鼠肝组织中CB1 mRNA和FAK mRNA含量显著升高(P<0.05),而且随造模时间的延长,CB1 mRNA和FAK mRNA含量亦逐渐增高,各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。CB1 mRNA的含量不但与肝纤维化评分呈显著正相关(r=0.747),而且与肝组织中FAK mRNA含量也呈显著正相关(r=0.907),P值均<0.01。各模型组小鼠血清中TGFβ1的水平随造模时间延长而不断升高,各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。肝组织中CB1 mRNA的含量与血清TGFβ1水平呈显著正相关(r=0.542,P<0.01)。结论 CB1可能通过激活FAK,以磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)通路诱导肝星状细胞(HSC)增殖并分泌大量TGFβ1,从而促进肝纤维化的形成。

ROS/SRC/FAK信号通路在膀胱癌疾病进展中的作用机制研究

目的观察活性氧(ROS)/类固醇受体共激活因子(SRC)/黏着斑激酶(FAK)信号通路对膀胱癌疾病进展的影响。方法收集2019年6月—2020年12月同济大学附属同济医院泌尿外科经膀胱镜活检、膀胱部分切除的膀胱癌组织标本69份,同时取癌旁组织作为对照,免疫组化检测组织中SRC、FAK蛋白阳性表达,并比较其在不同病理分化程度、浸润程度中的差异。以膀胱癌T24细胞为研究对象,分为对照组(细胞正常培养)、ROS清除剂N,N’-二甲基硫脲(DMTU)干预组(DMTU浓度20μmol/L)、DMTU+SRC激酶抑制剂(PP2)干预组(DMTU浓度20μmol/L,PP2浓度5μmol/L)。ROS检测试剂盒检测细胞中ROS水平;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭情况;蛋白免疫印迹(WB)检测细胞中SRC、磷酸化SRC(p-SRC)、FAK、磷酸化FAK(p-FAK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、钙蛋白酶2(calpain2)蛋白表达情况。结果SRC阳性表达于细胞膜上,FAK阳性表达于细胞浆中,与癌旁组织比较,膀胱癌组织中SRC、FAK阳性比例升高(χ^(2)/P=44.357/0.000、15.019/0.030)。浸润性膀胱癌组织中SRC、FAK表达阳性率高于非浸润性膀胱癌(χ^(2)/P=18.200/0.000、4.681/0.030)。与对照组比较,DMTU干预组ROS相对含量降低(P<0.05),细胞迁移、侵袭数量及细胞中p-SRC/SRC、p-FAK/FAK、MMP-9、calpain2蛋白水平升高(P<0.05);与DMTU干预组比较,DMTU+PP2干预组ROS相对含量升高(P<0.05),细胞迁移、侵袭数量及细胞中SRC、p-SRC/SRC、p-FAK/FAK、MMP-9、calpain2蛋白水平降低(P<0.05)。结论抑制ROS可激活SRC/FAK信号通路,从而增强膀胱癌细胞迁移、侵袭,加重疾病进展。

胃泌素干预影响人结肠癌细胞P190RhoGAP磷酸化的机制

目的:研究胃泌素对人结肠癌细胞P190RhoGAP的酪氨酸磷酸化水平的影响。方法:使用胆囊收缩素2受体(CCK2R)的真核表达载体pCR3.1/CCK2R转染人结肠癌细胞株Colo320,上调胃泌素表达;使用胃泌素拮抗剂下调胃泌素表达。使用相同浓度的胃泌素(1×10-7mol/L)按时间梯度刺激细胞;采用蛋白质印迹法检测总FAK、酪氨酸磷酸化的FAK的表达情况,并确定FAK最大磷酸化时间点;以免疫沉淀和蛋白质印迹法检测FAK最大磷酸化时间点的P190RhoGAP的酪氨酸磷酸化水平。结果:胃泌素引起FAK最大酪氨酸磷酸化作用时间点为12 h,胃泌素刺激12 h较0 h、胃泌素拮抗剂+胃泌素刺激12 h后P190RhoGAP的酪氨酸磷酸化水平明显增加。结论:P190RhoGAP为FAK的下游信号分子,酪氨酸磷酸化的P190RhoGAP在胃泌素-CCK2R-FAK信号通路引起肿瘤细胞的侵袭、浸润、转移过程中发挥重要作用。

FAK、FAKpY397和Src在肝细胞癌中的表达和意义

目的:探讨黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)、磷酸化黏着斑激酶(phospho-FAK Y397,FAKpY397)和类固醇激素受体共活化因子(sceroid recptor coactivator,Src)在不同分化程度肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况以及三者的相关性。方法:通过免疫组织化学法和人工计数法检测44例HCC组织及8例癌旁正常肝脏组织中FAK、FAKpY397和Src的表达。结果:FAK、FAKpY397和Src在HCC组织中表达均高于正常肝脏组织(P=0.027、P=0.041、P=0.030)且三者均与HCC分化程度有关(P=0.026、P=0.045、P=0.005),FAK和Src低分化组阳性率高于高分化组(P=0.015、P=0.002)。HCC组织中三者表达两两之间呈正相关(P=0.000、P=0.000、P=0.000)。结论:HCC组织中FAK、FAKpY397和Src表达与HCC分化程度有关;FAK和Src低分化组阳性率高于高分化组且三者相互之间存在一定相关性。

软肝化坚颗粒药物血清对肝星状细胞信号传导通路的调节作用

目的:研究软肝化坚颗粒药物血清对活化的肝星状细胞(HSC)信号传导通路的调节作用。方法:通过灌胃制备小鼠软肝化坚颗粒及秋水仙碱药物血清。将HSC-T6细胞分为5组,分别加入含5%、10%、20%软肝化坚颗粒血清,10%秋水仙碱血清和10%正常小鼠血清的培养基,培养24小时后,收集各组细胞。采用荧光定量RT-PCR检测Ⅰ型大麻素受体mRNA(CB1 mRNA)、黏着斑激酶mRNA(FAK mRNA)和细胞外信号调节激酶mRNA(ERKmRNA)水平。结果:与正常血清组相比,秋水仙碱组、5%、10%及20%软肝化坚颗粒血清组细胞中CB1 mRNA的含量均明显降低(P值均为0.000;与秋水仙碱组相比,10%、20%软肝化坚颗粒血清组细胞中CB1 mRNA的含量均明显降低(P值均为0.000)。与5%软肝化坚颗粒血清组相比,10%、20%软肝化坚颗粒血清组细胞中CB1 mRNA的含量均明显降低(P值均为0.000);与10%软肝化坚颗粒血清组相比,20%软肝化坚颗粒血清组细胞中CB1 mRNA的含量均明显降低(P值为0.000)。与正常血清组相比,秋水仙碱组、5%、10%及20%软肝化坚颗粒血清组细胞中ERK mRNA的含量均明显降低(P值分别为0.000、0.002、0.000和0.000);与5%软肝化坚颗粒血清组相比,20%软肝化坚颗粒血清组细胞中ERK mRNA的含量明显降低(P值为0.014)。与正常血清组相比,秋水仙碱组、5%、10%及20%软肝化坚颗粒血清组细胞中FAK mRNA的含量均明显降低(P值分别为0.001、0.000、0.000和0.000)。结论:软肝化坚颗粒可能通过ERK通路和PI3K-Akt通路抑制HSC-T6细胞活化,发挥防治肝纤维化的作用。

川芎含药血清对大鼠肝星状细胞大麻素受体1相关信号通路的影响

目的观察川芎含药血清对血小板源生长因子(PDGF-BB)活化的大鼠肝星状细胞(HSCs)大麻素受体1(CB1)、黏着斑激酶(FAK)及磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法制备川芎含药血清,MTT法检测川芎含药血清对肝星状细胞增殖情况,Western blot法分析肝星状细胞CB1、FAK、p-Akt蛋白的表达。结果与正常对照组相比,PDGF-BB作用24 h能刺激HSCs增殖,上调CB1、FAK、p-Akt蛋白的表达;川芎含药血清、秋水仙碱及大麻素受体1抑制剂AM251均能明显抑制上述效应;且加入AM251后,川芎含药血清对上述效应的抑制效果增强,且作用呈剂量依赖性。结论川芎含药血清可能通过大麻素相关信号通路抑制HSCs增殖,从而发挥防治肝纤维化的作用。

黏着斑激酶在增生性瘢痕中的作用研究

目的探讨黏着斑激酶(FAK)在整合素与TGFβ受体介导的瘢痕增生和挛缩过程中的作用。方法取10例增生性瘢痕标本进行成纤维细胞原代培养,通过荧光定量PCR法(FQ-PCR),测定经FAK抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞中整合素β1、TGF-β受体Ⅰ(TGF-βRⅠ)以及α平滑肌肌动蛋白(αSMA)mRNA表达量的变化。结果经FAK抗体阻断后培养的成纤维细胞整合素β1、TGFβRⅠ以及αSMA的基因拷贝数均较阴性对照组明显下降(P<0.05)。结论FAK可能是整合素和TGF-βR两条信号传导途径的交汇点,调节整合素、TGF-βR、αSMA的基因表达和蛋白合成,在瘢痕增生和挛缩过程中具有重要作用。

黏着斑激酶siRNA抑制结肠癌细胞株侵袭的机制研究

目的研究胃泌素-胆囊收缩素2受体(CCK2R)-黏着斑激酶(FAK)信号通路在人结肠癌细胞侵袭过程中的作用,探讨通过FAK siRNA降低FAK表达抑制癌细胞侵袭的可行性。方法使用CCK2R的真核表达载体pCR3.1/CCK2R,转染人结肠癌细胞株Colo320,使用RT-PCR检测细胞CCK2R表达情况。设计并合成针对FAK的siRNA,转染细胞,抑制FAK表达;使用胃泌素刺激结肠癌细胞,免疫沉淀和蛋白质印迹法检测不同情况下FAK第397位酪氨酸(tyr-397)磷酸化表达情况;Boyden小室法检测相应细胞侵袭力变化。结果真核表达载体pCR3.1/CCK2R可以有效增加CCK2R表达,增加CCK2R可以增强胃泌素促FAK tyr-397磷酸化和细胞侵袭力作用。使用RNA干扰技术可以明显降低细胞内FAK tyr-397磷酸化,并抑制胃泌素促结肠癌细胞侵袭作用。结论胃泌素-CCK2R-FAK信号通路在结肠癌细胞侵袭和转移过程中发挥关键作用,阻断FAK表达可以有效抑制胃泌素促结肠癌细胞侵袭作用。

PPAR-γ介导FAK在肺动脉平滑肌细胞迁移调控中的机制研究

目的 研究PPAR-γ、PDGF-βR及FAK在肺动脉平滑肌细胞迁移中的分子调控机制。方法 分离大鼠肺动脉平滑肌细胞,培养至3-7代细胞用于实验。分为4组,CON组:常规培养细胞;PDGF-BB组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml),刺激1 h后裂解细胞;Y15组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml)预刺激1 h,再加入FAK抑制剂Y15(10 μmol/L)刺激2 h后裂解细胞;ROSI组:细胞同步化后加入罗格列酮(10 μmol/L)刺激1 h,再加入PDGF-BB刺激1 h后裂解细胞。裂解各组处理细胞,Western blot检测各组p-PDGF-βR、p-FAK(Tyr397)水平;划痕实验及Transwell方法比较细胞迁移能力。结果 PDGF-BB组细胞迁移能力较CON组明显增强(77.3%± 4.2% vs 61.3%± 3.5%, P <0.05),p-PDGF-βR、p-FAK(Tyr397)水平提高(2.2 ± 0.12 vs 0.93 ± 0.11;1.07 ± 0.08 vs 0.39 ± 0.02, P <0.05)。Y15组细胞迁移能力较PDGF-BB组明显降低(72.7%± 4.7% vs 77.3%± 4.2%, P <0.05),p-PDGF-βR无明显变化(2.0 ± 0.10 vs 2.2 ± 0.12, P >0.05),p-FAK(Tyr397)水平降低(0.48 ± 0.09 vs 1.07 ± 0.08, P <0.05)。ROSI组细胞迁移能力较Y15组差异无统计学意义(75.3%± 4.04% vs 72.7%± 4.70%, P >0.05),p-PDGF-βR水平降低(1.25 ± 0.10 vs 2.0 ± 0.10, P <0.05);p-FAK(Tyr397)水平提高(0.52 ± 0.07 vs 0.48 ± 0.09, P <0.05);而与PDGF-BB组比较,ROSI组细胞迁移能力(77.3%± 4.2% vs 75.3%± 4.04%)及p-PDGF-βR(2.2 ± 0.12 vs 1.25 ± 0.10)、p-FAK(Tyr397)水平(1.07 ± 0.08 vs 0.52 ± 0.07)均显著降低( P <0.05)。Transwell迁移小室实验结果同划痕实验结果。结论 PPAR-γ/PDGF-βR/FAK(Tyr397)通路,可能是抑制肺动脉平滑肌细胞迁移机制之一。

β2GPⅠ/抗β2GPⅠ抗体复合物抑制oxLDL介导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和FAK活化

目的探讨β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ抗体复合物(β2/aβ2)对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)介导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和黏着斑激酶(FAK)活化的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在该过程中的作用。方法用PMA(100 ng/mL)将THP-1细胞诱导为THP-1巨噬细胞。用RPMI 1640培养液、oxLDL、oxLDL+β2/aβ2和oxLDL+脂多糖(LPS)处理THP-1巨噬细胞,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脂质转运相关分子ACAT1、ABCA1和ABCG1的mRNA水平;利用Trinder法检测THP-1巨噬细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)含量,并计算胆固醇酯(CE)含量和其占TC的比例;利用免疫荧光和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FAK的蛋白质和mRNA表达并采用western blot检测其磷酸化;最后,利用TLR4阻断剂TAK-242(1μg/mL)预处理的方式,观察TLR4对上述过程的影响。结果β2/aβ2复合物能够抑制oxLDL引起的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和FAK表达与磷酸化,阻断TLR4可以部分逆转这一现象。结论β2/aβ2可以抑制oxLDL引起的巨噬细胞的脂质蓄积和FAK活化,该过程与TLR4有关。

胃泌素在胃肠道肿瘤中的作用及其信号转导途径的研究进展

胃泌素对于胃肠道肿瘤的促进作用已经被很多研究所证实。胃泌素与细胞表面受体结合后,通过一定的信号转导途径来调节某些基因转录与表达,从而促进肿瘤发生与发展。通过对胃泌素在胃肠道肿瘤中作用机制及其信号转导途径研究,有望找到更有效的胃肠道肿瘤治疗方法。

GPR30在雌激素促乳腺癌细胞迁移和侵袭中的作用机制研究

目的探讨G蛋白耦联受体30(GPR30)介导的雌激素非基因效应促乳腺癌细胞侵袭的作用及其机制。方法体外培养乳腺癌细胞株SK-BR-3(GPR30+,ERα-/ERβ-),分别给予不同浓度的17β-雌二醇(E2)和GPR30特异性激动剂(G1)处理不同时间,应用免疫印迹法观察黏着斑激酶(FAK)的磷酸化;转染GPR30 si RNA抑制GPR30表达后,采用Transwell侵袭小室法观察E2和G1对细胞迁移和侵袭的影响。结果与对照组比较,不同浓度的E2(10-10、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L)或G1(10-8、10-7、10-6 mol/L)处理SK-BR-3细胞20 min,均能促进FAK的磷酸化。转染GPR30 si RNA 48h抑制GPR30表达后,E2、G1促进FAK磷酸化的效果均明显减弱。E2、G1均可明显促进SK-BR-3细胞的侵袭。而转染si RNA GPR30抑制GPR30表达后,E2、和G1促进细胞侵袭的能力明显减弱。结论雌激素可通过作用于GPR30激活非基因效应诱导FAK的磷酸化,增加乳腺癌细胞的侵袭能力。

乳头状甲状腺癌中表皮生长因子受体和黏附斑激酶表达及其临床意义

目的探讨乳头状甲状腺癌(PTC)中表皮生长因子受体(EGFR)与黏附斑激酶(FAK)表达及其与临床病理参数的关系。方法研究对象为52例行手术治疗的PTC患者。采用免疫组化方法分析PTC组织中EGFR和FAK表达。此外,对10例原发性PTC及其对应淋巴结转移组织进行免疫组化分析。结果55.8%和57.7%PTC患者EGFR和FAK高表达,两者之间有强正相关(r=0.805,P<0.001)。EGFR、FAK单独表达或共表达与患者淋巴结转移(LNM)、甲状腺外浸润和pT分期显著相关。与原发性PTC相比,淋巴结转移组织中EGFR和FAK蛋白表达水平较高,表明它们在淋巴扩散过程中一致表达。结论高水平EGFR及其下游效应器FAK与PTC进展过程中淋巴扩散和肿瘤浸润相关。

α1 and β1 integrins enhance the homing and differentiation of cultured prostate cancer stem cells

CD133＋ prostate cancer stem cells （PCSCs） have recently been identified in human prostate cancer tissues. The present study reports the integrin profile of prostate cancer progenitor cells and the role of α1 and β1 integrins in the homing and differentiation of PCSCs in vitro. PCSCs were isolated from the tissue specimens of patients with prostate cancer and the expression of surface integrins and adhesion patterns were determined. Our analysis of the expression of surface integrins and their adhesion patterns of prostate cancer stem cells derived from prostate cancer tissues revealed that the levels of β1 and α2β1 integrins were significantly higher （P 〈 0.05） than those of the other integrins. By contrast, peripheral blood-derived CD 133＋ cells from prostate cancer patients showed a high level of expression （P 〈 0.01） of α2β1,αvβ3, αvβ5, β1 and α1 integrins and a minimal expression of α4β1 integrins. Moreover, CD 133＋ cells derived from both prostate cancer tissues and peripheral blood exhibited an increased degree of attachment to extraceUular matrix proteins （P 〈 0.001） and a high expression level of α2β1 integrin. In vitro experiments using blocking antibodies indicated that α1 and β1 integrins have a role in the homing and differentiation of PCSCs. This is the first report to suggest the importance of integrins in mediating the homing and differentiation of PCSCs.

丹参素对膀胱癌5637细胞Src/FAK信号通路及上皮间质转化的影响

目的:探讨丹参素(Dss)对膀胱癌5637细胞类固醇受体共激活因子/黏着斑激酶(Src/FAK)信号通路及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:用不同浓度的Dss(0、40、60和80μg/mL)处理膀胱癌5637细胞24 h后,分别命名为Dss-0组、Dss-40组、Dss-60组和Dss-80组;采用实时荧光定量聚合酶链反应检测膀胱癌5637细胞中EMT标志基因[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的信使核糖核酸(mRNA)]表达水平,采用蛋白质印迹法检测膀胱癌5637细胞中Src/FAK信号通路相关蛋白表达水平,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测膀胱癌5637细胞增殖情况,采用划痕实验检测膀胱癌5637细胞的迁移能力。结果:Dss-0组、Dss-40组、Dss-60组和Dss-80组膀胱癌5637细胞E-cadherin mRNA表达水平依次升高,N-cadherin mRNA、Vimentin mRNA、磷酸化Src(p-Src)/Src蛋白、磷酸化FAK(p-FAK)/FAK蛋白表达水平以及吸光度、迁移率依次降低,呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:Dss可能通过抑制Src/FAK信号通路来阻碍膀胱癌5637细胞EMT过程,进而抑制膀胱癌5637细胞增殖和迁移。

姜黄素调节Na/K-ATPase/Src信号通路保护LLC-PK1细胞缺氧复氧损伤

目的:阐明姜黄素作为Na/K-ATPase(NKA)不完全促进剂,通过影响NKA/类固醇受体辅助活化因子(steroid receptor coactivator,Src)受体复合物的活化保护细胞免于缺氧复氧损伤。方法:通过酶筛选实验明确姜黄素对NKA活性和构型的影响,利用缺氧复氧模型模拟细胞氧化应激损伤。姜黄素预保护猪肾上皮LLC-PK1细胞1 h后进行缺氧1 h复氧3 h处理,检测胞外乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力、细胞活力以及Src、p-Src、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinases,Erk)、p-Erk蛋白表达情况。结果:姜黄素能够抑制NKA活性,通过促进Src和Erk1/2磷酸化激活NKA/Src信号通路,但乌本苷存在时姜黄素会增加NKA活性,抑制NKA/Src信号通路过度激活。姜黄素预保护能减轻LLC-PK1细胞氧化应激损伤,降低LDH活力,增加细胞活力,并减少Src、Erk磷酸化蛋白表达。结论:姜黄素对NKA/Src信号通路具有双向调节作用,姜黄素可以通过对NKA/Src信号通路的调节保护细胞免于缺氧复氧损伤。

PPAR-γ/FAK信号通路在C57BL/6小鼠肺成纤维细胞中的抗纤维化作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPAR-γ)配体和粘着斑激酶(FAK)在C57BL/6小鼠肺成纤维细胞中的抗纤维化作用。方法培养C57BL/6小鼠肺成纤维细胞,用TGF-β2 10ng/mL刺激转换为肌纤维母细胞,加入不同浓度PPAR-γ配体罗格列酮(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L及40μmol/L),采用细胞生长计数实验检测罗格列酮对小鼠肺成纤维细胞C57BL/6生长的影响;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐实验(MTT)检测罗格列酮对小鼠肺成纤维细胞C57BL/6增殖的影响;聚合酶链式反应实验(PCR)检测PPAR-γmRNA、FAK mRNA的转录水平。结果生长计数实验发现罗格列酮抑制肌纤维母细胞生长,在72 h罗格列酮浓度40μmol/L时抑制最明显;MTT实验发现罗格列酮抑制肌纤维母细胞增殖,在72 h罗格列酮浓度40μmol/L时抑制最明显;PPAR-γmRNA转录水平随罗格列酮浓度增加而增加,FAK mRNA的转录水平随罗格列酮浓度增加而减少。结论 PPAR-γ配体罗格列酮可能通过抑制FAK表达进而抑制TGF-β2诱导的肺成纤维细胞纤维化形成。

Ⅹ型胶原蛋白α1通过激活黏着斑激酶通路影响前列腺癌的进展

目的探讨Ⅹ型胶原蛋白α1(COL10A1)对前列腺癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。方法分析TCGA数据库中497例前列腺癌组织和52例前列腺正常组织中基因COL10A1的表达差异。将人源前列腺癌细胞系22RV1和DU145作为研究对象, 分别转染空载质粒和COL10A1过表达质粒, 转染2 d后, 使用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色实验、平板克隆形成实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证细胞的增殖能力;使用Transwell实验、划痕愈合实验和蛋白质印迹实验验证细胞的迁移能力, 采用蛋白质印迹实验探索COL10A1与p-DDR2之间的关系, 并验证其对黏着斑激酶(FAK)通路的影响。两实验组间比较采用独立样本t检验, 多实验组间比较采用方差分析。结果对照组细胞EdU着色细胞比例低于实验组[22RV1:(14.760±2.255)%比(53.850±4.463)%, t=7.816, P<0.05;DU145:(20.560±3.198)%比(65.470±2.857)%, t=10.470, P<0.05]、培养96 h后吸光度低于实验组(22RV1:2.076±0.090比2.538±0.075, F=27.820, P<0.05;DU145:2.194±0.078比2.856±0.087, F=190.700, P<0.05)、克隆形成数低于实验组(22RV1:48.330±5.364比162.700±13.120, t=8.067, P<0.05;DU145:132.000±12.100比297.300±17.320, t=7.825, P<0.05)、划痕愈合率低于实验组[22RV1:(21.330±1.202)%比(31.330±1.453)%, t=5.303, P<0.05;DU145:(25.330±0.882)%比(48.670±2.906)%, t=7.683, P<0.05]、迁移细胞数低于实验组(22RV1:55.670±4.910比154.000±6.557, t=12.000, P<0.05;DU145:28.330±5.608比90.330±11.050, t=5.003, P<0.05)。同时, COL10A1能显著增加p-DDR2蛋白的表达(22RV1:0.621±0.010比0.690±0.017, t=3.417, P<0.05;DU145:0.557±0.010比0.734±0.010, t=12.580, P<0.05)、升高FAK蛋白的表达(22RV1:0.487±0.008比0.608±0.005, t=13.530, P<0.05;DU145:0.441±0.010比0.511±0.011, t=4.658, P<0.05)。结论 COL10A1能够通过DDR2/FAK轴促进前列腺癌细胞的增殖和迁移。

异钩藤碱调节EGFR/FAK信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和5-FU耐药性的影响

目的探讨异钩藤碱调节表皮生长因子受体(EGFR)/局部黏着斑激酶(FAK)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药性的影响。方法取对数生长期的HepG2细胞,分为对照组,异钩藤碱低、中、高浓度(32.5、65.0、130.0μmol·L^(-1))组,异钩藤碱(130μmol·L^(-1))+EGFR激活剂NSC228155(2μmol·L^(-1))组;对数生长期的5-FU耐药肝癌细胞系HepG2/5-FU分为对照组、异钩藤碱(130μmol·L^(-1))组、5-FU(60μmol·L^(-1))组、异钩藤碱(130μmol·L^(-1))+5-FU(60μmol·L^(-1))组、异钩藤碱(130μmol·L^(-1))+5-FU(60μmol·L^(-1))+NSC228155(2μmol·L^(-1))组。给药处理24 h,对照组不给药。EdU染色、CCK-8检测HepG2或HepG2/5-FU细胞增殖;划痕实验检测HepG2或HepG2/5-FU细胞迁移;Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、迁移侵袭增强子因子1(MIEN1)、P-糖蛋白(P-gp)、p-EGFR、p-FAK蛋白表达。结果与对照组相比,异钩藤碱低、中、高浓度组EdU阳性率、吸光度(A450)值、划痕愈合率、CyclinD1、MIEN1、p-EGFR、p-FAK蛋白表达显著降低,且呈浓度相关性(P<0.05);与异钩藤碱130.0μmol·L^(-1)组相比,异钩藤碱+NSC228155组HepG2细胞EdU阳性率、A450值、划痕愈合率、CyclinD1、MIEN1、p-EGFR、p-FAK蛋白表达显著升高(P<0.05)。与对照组相比,5-FU组HepG2/5-FU细胞EdU阳性率、A450值、划痕愈合率、P-gp、p-EGFR、p-FAK蛋白表达显著降低(P<0.05);与异钩藤碱组、5-FU组相比,异钩藤碱+5-FU组HepG2/5-FU细胞EdU阳性率、A450值、划痕愈合率、P-gp、p-EGFR、p-FAK蛋白表达降低(P<0.05);与异钩藤碱+5-FU组相比,异钩藤碱+5-FU+NSC228155组HepG2/5-FU细胞EdU阳性率、A450值、划痕愈合率、P-gp、p-EGFR、p-FAK蛋白显著上调(P<0.05)。结论异钩藤碱抑制HepG2细胞增殖、迁移及降低5-FU耐药性的机制可能与阻断EGFR/FAK通路有关。

趋化因子受体4、黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-9在非小细胞肺癌组织的表达及其临床意义

目的探讨趋化因子受体4(CXCR4)、黏着斑激酶(FAK)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平与非小细胞肺癌临床病理学特征的关系。方法选取2019年6月至2022年1月新乡医学院第三附属医院收集的79例非小细胞肺癌肺癌和癌旁组织作为研究对象,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肺癌组织和癌旁组织中CXCR4、FAK和MMP-9表达水平,并分析不同年龄段、性别、分化程度、临床分期和淋巴结转移等病理特征患者癌组织中CXCR4、FAK和MMP-9表达水平,分析CXCR4、FAK和MMP-9表达水平与非小细胞肺癌临床病理学特征的相关性。结果非小细胞肺癌组织CXCR4、FAK和MMP-9蛋白表达水平(1.94±0.41、2.23±0.42、2.06±0.44)明显高于癌旁组织表达水平(0.92±0.17、0.80±0.21、0.93±0.21),差异有统计学意义(t=20.590,26.750,20.450,P均<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期患者非小细胞肺癌组织CXCR4、FAK和MMP-9蛋白表达水平(2.09±0.20、2.39±0.22、2.23±0.25)明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者表达水平(1.82±0.50、2.10±0.51、1.92±0.53),差异有统计学意义(t=3.066,3.280,3.292,P均<0.05)。低分化患者非小细胞肺癌组织CXCR4、FAK和MMP-9蛋白表达水平(2.05±0.22、2.35±0.23、2.18±0.27)明显高于中高分化患者表达水平(1.75±0.25、2.09±0.27、1.86±0.30),差异有统计学意义(t=2.693,2.979,2.903,P均<0.05)。淋巴结转移患者非小细胞肺癌组织CXCR4、FAK和MMP-9蛋白表达水平(2.04±0.24、2.34±0.26、2.14±0.26)明显高于无淋巴结转移患者表达水平(1.82±0.27、2.10±0.29、1.97±0.36),差异有统计学意义(t=3.360,3.704,2.183,P均<0.05)。CXCR4、FAK和MMP-9表达水平与非小细胞肺癌患者淋巴结转移、分化程度和临床分期均呈明显正相关(P<0.05),与性别、年龄无相关(P>0.05)。结论非小细胞肺癌组织中CXCR4、FAK和MMP-9表达水平明显高于癌旁组织,且表达水平与分化程度、临床分期和淋巴结转移呈正相关。