异钩藤碱对急性脑梗死大鼠认知障碍的影响及机制研究

目的探讨异钩藤碱对急性脑梗死大鼠认知障碍的影响及相应机制。方法将144只SD大鼠按照随机数字表法随机分为假手术组、急性脑梗死组、异钩藤碱低剂量组、异钩藤碱高剂量组、尼莫地平组、异钩藤碱高剂量+干扰素基因刺激蛋白(STING)激动剂(ADU-S100)组,每组24只。除假手术组外,其他各组大鼠均采用线栓闭塞大脑中动脉法构建急性脑梗死大鼠模型,假手术组仅游离右侧颈外动脉、颈总动脉和颈内动脉,不做插入线栓处理。建模成功后立即给药,异钩藤碱低剂量组和异钩藤碱高剂量组大鼠分别灌胃5 mg/kg、20 mg/kg异钩藤碱,且均需腹腔注射等量的等渗盐水;尼莫地平组大鼠需灌胃30 mg/kg尼莫地平,且还需腹腔注射等量的等渗盐水;异钩藤碱高剂量+ADU-S100组大鼠需灌胃20 mg/kg异钩藤碱且腹腔注射20 mg/kg ADU-S100;假手术组、急性脑梗死组大鼠均需灌胃10 ml/kg与腹腔注射10 ml/kg的等渗盐水。给药1次/d,持续2周。末次给药处理24 h后,采用Zela-Longa法对所有大鼠进行神经功能评分,并进行Morris水迷宫实验,记录大鼠的逃避潜伏期及原平台象限停留次数。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;检测各组大鼠脑组织含水量;采用2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定各组大鼠脑梗死体积;采用伊文思蓝检测各组大鼠血-脑屏障通透性;采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测大鼠脑组织中闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)信使核糖核酸(mRNA)表达;采用免疫印迹检测大鼠脑组织中STING、磷酸化TANK结合激酶1(p-TBK1)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)蛋白表达,并进行组间比较。结果(1)与假手术组相比,急性脑梗死组末次给药处理24 h后神经功能评分[(2.96±0.32)分比0分]、脑组织含水量[(86.9±3.2)%比(71.8±3.1)%]、血清TNF-α[(86.7±3.5)ng/L比(35.6±1.7)ng/L]、IL-6[(167.8±6.1)ng/L比(50.2±2.2)ng/L]、脑梗死体积[(28.6±1.3)mm 3比0 mm 3]、脑组织中伊文思蓝含量[(1.57±0.13)g/L比(0.96±0.08)g/L]及STING[(1.83±0.16)比(0.86±0.08)]、p-TBK1[(0.89±0.07)比(0.41±0.03)]、p-IRF3[(0.67±0.05)比(0.13±0.01)]蛋白表达均升高,脑组织中ZO-1 mRNA[(0.45±0.04)比(1.00±0.00)]、occludin mRNA[(0.23±0.02)比(1.00±0.00)]表达均降低,逃避潜伏期延长[(33.6±1.6)s比(12.3±0.5)s],原平台象限停留次数减少[(5.9±0.2)次比(15.7±0.4)次],组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)与急性脑梗死组比较,异钩藤碱低剂量组、异钩藤碱高剂量组、尼莫地平组大鼠末次给药处理24 h后神经功能评分[(2.37±0.21)、(1.14±0.17)、(1.18±0.13)分比(2.96±0.32)分]、脑组织含水量[(81.8±3.0)%、(74.9±3.0)%、(74.3±2.9)%比(86.9±3.2)%]、血清TNF-α[(71.1±1.4)、(43.4±2.0)、(41.5±1.9)ng/L比(86.7±3.5)ng/L]、IL-6[(129.8±5.4)、(81.2±3.8)、(80.0±3.6)ng/L比(167.8±6.1)ng/L]、脑梗死体积[(21.7±1.0)、(10.5±0.5)、(10.7±0.5)mm 3比(28.6±1.3)mm 3]、脑组织中伊文思蓝含量[(1.39±0.12)、(1.16±0.10)、(1.18±0.19)g/L比(1.57±0.13)g/L]及STING[(1.50±0.14)、(1.02±0.11)、(1.01±0.09)比(1.83±0.16)]、p-TBK1[(0.75±0.05)、(0.54±0.04)、(0.52±0.05)比(0.89±0.07)]、p-IRF3[(0.51±0.05)、(0.25±0.02)、(0.27±0.02)比(0.67±0.05)]蛋白表达均降低,脑组织中ZO-1 mRNA[(0.58±0.05)、(0.87±0.07)、(0.89±0.09)比(0.45±0.04)]、occludin mRNA[(0.36±0.03)、(0.71±0.06)、(0.69±0.05)比(0.23±0.02)]表达均升高,逃避潜伏期缩短[(28.6±1.0)、(16.5±0.7)、(16.4±0.7)s比(33.6±1.6)s],原平台象限停留次数增加[(8.2±0.3)、(12.8±0.5)、(12.9±0.5)次比(5.9±0.2)次],组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。(3)与异钩藤碱高剂量组比较,异钩藤碱高剂量+ADU-S100组末次给药处理24 h后神经功能评分[(2.12±0.14)分比(1.14±0.17)分]、脑组织含水量[(78.7±3.2)%比(74.9±3.0)%]、血清TNF-α[(59.7±2.1)ng/L比(43.4±2.0)ng/L]、IL-6[(118.9±4.6)ng/L比(81.2±3.8)ng/L]、脑梗死体积[(16.6±0.4)mm 3比(10.5±0.5)mm 3]、脑组织中伊文思蓝含量[(1.36±0.10)g/L比(1.16±0.10)g/L]及STING[(1.37±0.12)比(1.02±0.11)]、p-TBK1[(0.67±0.05)比(0.54±0.04)]、p-IRF3[(0.39±0.03)比(0.25±0.02)]蛋白表达均升高,脑组织中ZO-1 mRNA[(0.63±0.05)比(0.87±0.07)]、occludin mRNA[(0.46±0.05)比(0.71±0.06)]表达均降低,逃避潜伏期延长[(23.4±1.0)s比(16.5±0.7)s],原平台象限停留次数减少[(9.6±0.3)次比(12.8±0.5)次],组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论异钩藤碱可抑制急性脑梗死大鼠炎症、减少血-脑屏障损伤、降低脑水肿程度,改善认知障碍,其机制可能与抑制STING/TBK1/IRF3通路有关。

乳腺癌改良根治术后感染患者外周血STING、TBK1、STAT6表达及意义

目的探究乳腺癌改良根治术后感染患者外周血干扰素基因刺激蛋白(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)、信号传导及转录激活蛋白6(STAT6)表达及意义.方法选取2020年2月-2021年2月湛江中心人民医院收治的乳腺癌患者90例,根据术后是否出现切口感染分为感染组27例,非感染组63例.分析感染病原菌分布特点,使用聚合酶链式反应(PCR)法检测术前外周血STING、TBK1、STAT6 mRNA相对表达量,比较两组术后5 d炎症因子降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析STING、TBK1及STAT6对术后感染的预测价值.结果27例术后切口感染患者共分离病原菌33株,其中革兰阳性菌21株,占63.64%,革兰阴性菌12株,占36.36%;感染组外周血STING、TBK1、STAT6 mRNA相对表达量及CRP、PCT、IL-6水平均高于非感染组(P<0.05);ROC曲线显示,外周血STING、TBK1及STAT6表达预测术后切口感染的曲线下面积(AUC)分别为0.933、0.909、0.894.结论乳腺癌改良根治术后切口感染患者外周血STING、TBK1及STAT6呈异常表达,且对预测感染有较高的效能.

轮状病毒感染性腹泻患儿外周血STING、TBK1基因表达及肠道微环境变化

目的 探究轮状病毒感染性腹泻(RVID)患儿外周血干扰素基因刺激蛋白(STING)、TANK连接激酶1(TBK1)基因表达情况,分析RVID患儿肠道微环境及免疫功能。方法 选取2018年6月-2021年6月湖南省人民医院收治的RVID患儿117例为RVID组,同期于本院接受体检的健康儿童105名为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测外周血STING、TBK1基因表达情况;采用16S rRNA基因扩增和高通量测序对肠道菌群结构进行分析;比较两组血清1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2VitD3]和免疫指标水平。结果 RVID组STING、TBK1 mRNA表达水平低于对照组(P<0.05);肠道菌群α多样性分析结果显示,RVID组Chao1指数和辛普森指数低于对照组(P<0.05);RVID组门水平上厚壁菌门、拟杆菌门相对丰度高于对照组(P<0.05),RVID组属水平上双歧杆菌属、拟杆菌属和乳酸杆菌属相对丰度低于对照组(P<0.05);RVID组血清1,25-(OH)2VitD3和IgA、IgG、IgM表达水平均低于对照组(P<0.05)。结论 STING、TBK1基因在RVID患儿外周血中呈低表达水平,RVID患儿与健康儿童的肠道微环境存在差异,肠道菌群紊乱可能会加剧RVID患儿机体免疫功能失调。

EBV感染及STING/TBK1信号通路与儿童传染性单核细胞增多症临床表现的关系

目的分析Epstein-Barr病毒(EBV)感染及外周血干扰素基因刺激蛋白/TANK结合激酶1(STING/TBK1)信号通路表达与儿童传染性单核细胞增多症(IM)临床表现的关系。方法选取2019年1月-2021年1月西安市儿童医院收治的EBV感染患儿263例,其中IM患儿143例为研究组,单纯EBV感染患儿120例为对照组。入院检测血浆中EBV DNA载量,分为低载量组、中载量组和高载量组,采用蛋白印迹法检测外周血磷酸化STING(p-STING)和p-TBK1表达,分析EBV DNA载量及STING/TBK1信号通路表达与儿童IM临床表现的关系。结果研究组患儿血浆EBV DNA载量、外周血单个核细胞(PBMCs)中p-STING、p-TBK1的相对表达量均高于对照组(P<0.05);不同EBV DNA载量IM患儿临床表现中肝脏肿大、脾脏肿大及肝功能异常情况的比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中高载量组肝脏肿大、脾脏肿大及肝功能异常检出率最高,中载量组次之,低载量组最低;存在肝脏肿大、脾脏肿大及肝功能异常IM患儿p-STING、p-TBK1相对表达量分别高于无肝脏肿大、脾脏肿大及肝功能异常IM患儿(P<0.05)。结论EBV DNA载量及STING/TBK1信号通路表达与IM患儿肝脏肿大、脾脏肿大及肝功能异常情况密切相关,监测上述指标有助于IM的临床评估。

从CSF1R/STING/TBK1信号调控肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)表型极化探究加味白头翁汤治疗结直肠癌的效应机制

目的:观察加味白头翁汤对结直肠癌MC38细胞荷瘤小鼠瘤体生长及肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润数量的影响,探析加味白头翁汤是否介导TAMs表型重塑以发挥抗肿瘤免疫调节效应。方法:首先构建鼠源MC38细胞株C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型,设立模型组、阳性药奥沙利铂组(3 mg·kg^(-1))及加味白头翁汤高、低剂量组23.43、46.86 g·kg^(-1),每组各10只,另设立10只健康小鼠为空白组,观察各组小鼠体质量、瘤体体积及生存状态变化,摘取肿瘤组织、脾脏及外周血,计算瘤体体积变化、抑瘤率及脾脏质量;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理形态学变化,免疫荧光实验检测荷瘤小鼠肿瘤组织中CD4、CD8、CD206表达水平,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测荷瘤小鼠外周血清中细胞因子转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-6、趋化因子配体2(CCL2)的分泌水平;其次,使用MC38细胞株与鼠源单核巨噬细胞系RAW264.7细胞在体外构建IL-4诱导的共培养模型,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测加味白头翁汤含药血清的细胞增殖抑制作用,Transwell实验检测IL-4诱导的M2型巨噬细胞对MC38细胞侵袭能力的影响,流式细胞术检测加味白头翁汤含药血清对IL-4诱导的M2型巨噬细胞干预后膜上CD86的表达变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测加味白头翁汤含药血清对共培养后M1型巨噬细胞相关极化因子CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-12及M2型巨噬细胞相关极化因子CD206、CD163、IL-10 mRNA表达水平的影响;最后,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测荷瘤小鼠肿瘤组织中集落刺激因子1受体(CSF1R)、干扰素基因刺激蛋白(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)蛋白表达水平。结果:体内实验结果表明,与模型组比较,加味白头翁汤能明显抑制荷瘤小鼠瘤体的生长。免疫荧光实验结果表明加味白头翁汤能增加荷瘤小鼠肿瘤组织中CD8+T细胞浸润数量,降低CD206+TAMs浸润数量,且能下调荷瘤小鼠外周血清中细胞因子IL-6、TGF-β、CCL2的分泌水平;在体外实验结果中,加味白头翁汤含药血清无明显的细胞增殖抑制作用,但与RAW264.7细胞共孵育后的细胞上清液却能抑制MC38细胞的增殖活性,且IL-4诱导的M2型巨噬细胞能增强MC38细胞的侵袭能力,这一效应却能被加味白头翁汤含药血清呈浓度依赖性抑制。同时,Real-time PCR检测结果发现加味白头翁汤含药血清能上调M1型巨噬细胞相关极化因子CD86、iNOS、IL-12 mRNA表达水平,下调M2型巨噬细胞相关极化因子CD206、CD163、IL-10 mRNA表达水平,流式细胞术结果也证实了加味白头翁汤含药血清能增加CD86+M1型巨噬细胞复极化数量,这表明加味白头翁汤能诱导M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞复极化以发挥抗肿瘤生长作用。最后,Western blot检测结果表明加味白头翁汤能下调荷瘤小鼠肿瘤组织中CSF1R蛋白表达,上调STING、TBK1蛋白表达。结论:加味白头翁汤能下调CD206+TAMs浸润数量,增加CD8+T细胞浸润,从而发挥对结直肠癌生长抑制的抗肿瘤免疫调节效应,这可能与其调节CSF1R信号,进而活化STING/TBK1信号通路,诱导TAMs表型重塑有关。

98例儿童细菌性腹泻流行病学特征及STING、TBK1及NF-κB基因表达

目的了解儿童细菌性腹泻流行特征及病原菌分布,并探究干扰素基因刺激因子(STING)、TANK-binding激酶1(TBK1)、核因子κB(NF-κB)基因表达及临床意义。方法选取2019年1月-2021年12月遵义市第一人民医院收治的98例细菌性腹泻患儿为病例组,记录患儿临床特征及病原菌分布;另选取同期60名健康儿童为对照组,比较两组STING、TBK1及NF-κB基因表达情况;采用多因素Logistic回归分析探究疗效影响因素。结果98例细菌性腹泻患儿中年龄3岁及以下共77例(78.57%),发病季节秋季42例(42.86%)、夏季32例(32.65%),病情严重程度轻度51例(21.43%)、中度35例(35.71%)、重度12例(12.24%);病原菌以大肠埃希菌39例(39.80%)、沙门氏菌28例(28.57%)为主。病例组外周血单个核细胞STING mRNA、TBK1 mRNA、NF-κB mRNA表达均较对照组升高(P<0.05),且重度组均较轻度组、中度组高(P<0.05)。病情重度、NF-κB mRNA高表达是治疗无效的危险因素(P<0.05)。结论3岁及以下儿童是细菌性腹泻易感人群,发病集中在夏、秋季,病原菌以大肠埃希菌、沙门氏菌为主;患儿外周血单个核细胞STING、TBK1、NF-κB基因均呈高表达,且与病情严重程度有关,其中NF-κB mRNA高表达与患儿疗效预后有关。

老年COPD合并肺部细菌性感染外周血STING、TBK1、STAT6表达

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺部细菌性感染外周血干扰素基因刺激因子(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)、信号转导和转录激活因子6(STAT6)的表达。方法选取2019年2月-2021年2月聊城大学医院诊治的96例老年COPD合并肺部细菌性感染患者为感染组,同期96例老年COPD未合并肺部细菌性感染患者为非感染组,实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测外周血STING、STAT6、TBK1表达及其诊断COPD合并肺部细菌性感染的临床价值。结果感染组外周血STING、TBK1、STAT6表达分别为(25.21±4.69)、(7.06±3.02)、(2.68±0.85)均高于非感染组(P<0.05);重度感染组患者外周血STING、TBK1、STAT6表达均高于轻中度感染组(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,STING、TBK1、STAT6联合预测COPD合并肺部细菌性感染的曲线下面积为0.902,敏感度为89.66%,特异度为74.63%。结论老年COPD合并肺部细菌性感染患者外周血STING、TBK1、STAT6表达升高,三者联合预测肺部感染的诊断效能较好,对临床诊断和治疗有一定的指导价值。

高危型HPV感染宫颈病变患者外周血cGAS/ STING/TBK1信号通路基因表达

目的 探究高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染宫颈病变患者外周血环鸟嘌呤核苷酸腺嘌呤核苷酸合成酶/干扰素激活蛋白/TANK结合激酶1(cGAS/STING/TBK1)信号通路基因相对表达量。方法 选取2015年4月-2021年4月中部战区总医院妇产科收治的高危型HPV感染宫颈病变患者89例为研究组,同期无HPV感染的宫颈病变患者89例为对照组,采用第2代杂交捕获实验检测高危型HPV DNA载量,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测外周血cGAS、STING和TBK1 mRNA表达水平。结果 研究组外周血单个核细胞中cGAS、STING和TBK1 mRNA水平高于对照组(P<0.05);不同高危型HPV DNA载量患者外周血cGAS/STING/TBK1信号通路基因表达的比较差异有统计学意义(P<0.05),其中高载量组cGAS、STING和TBK1 mRNA水平最高,低载量组最低(P<0.05);不同高危型HPV感染类型患者外周血cGAS/STING/TBK1信号通路基因表达的比较差异无统计学意义。结论 高危型HPV感染对宫颈病变患者外周血cGAS/STING/TBK1信号通路基因表达影响较大,高危型HPV DNA载量与其表达水平密切相关。

藁本内酯对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺组织损伤的影响

目的研究藁本内酯调控干扰素基因刺激蛋白(STING)/TANK结合激酶1(TBK1)/核因子-κB(NF-κB)信号对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠模型肺组织损伤的影响。方法将小鼠分成对照组、模型组(LPS肺损伤小鼠模型)、实验低剂量组(LPS肺损伤小鼠模型,20 mg·kg^(-1)藁本内酯)、实验中剂量组(LPS肺损伤小鼠模型,60 mg·kg^(-1)藁本内酯)、实验高剂量组(LPS肺损伤小鼠模型,100 mg·kg^(-1)的藁本内酯)、DMXAA组(LPS肺损伤小鼠模型,100 mg·kg^(-1)的藁本内酯、STING信号激动药DMXAA)。用蛋白质印迹法检测STING、p-TBK1、TBK1、p-p65、p65蛋白的表达水平,用二喹啉甲酸(BCA)法检测肺泡灌洗液总蛋白,用瑞士吉姆萨染色计数肺泡灌洗液中炎性细胞数目,用酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,用硫代巴比妥酸法检测肺组织中丙二醛(MDA)含量。结果对照组、模型组和实验低、中、高剂量组及DMXAA组的STING蛋白相对表达水平分别为0.13±0.03、0.46±0.02、0.36±0.04、0.27±0.02、0.20±0.03和0.38±0.04,p-TBK1/TBK1蛋白比值分别为0.15±0.02、0.56±0.02、0.43±0.01、0.31±0.01、0.20±0.02和0.30±0.02,p-p65/p65蛋白比值分别为0.24±0.01、0.66±0.03、0.41±0.02、0.32±0.04、0.22±0.02和0.42±0.03,肺泡灌洗液中总蛋白含量分别为(173.79±15.44)、(304.21±19.29)、(243.59±17.60)、(212.51±18.24)、(187.11±11.59)和(241.69±30.12)μg·mL^(-1),巨噬细胞数目分别为(0.11±0.02)×10^(8)、(0.94±0.09)×10^(8)、(0.72±0.08)×10^(8)、(0.57±0.04)×10^(8)、(0.41±0.04)×10^(8)和(0.71±0.08)×10^(8)cell·mL^(-1),模型组的上述指标与对照组相比,实验低、中、高剂量组的上述指标与模型组相比,DMXAA组的上述指标与实验高剂量组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论藁本内酯抑制STING/TBK1/NF-κB信号减轻LPS诱导的急性肺损伤小鼠模型肺组织损伤。