siRNA沉默STMN1基因抑制肺癌细胞增殖与侵袭的机制探讨

目的:观察下调肺癌细胞中STMN1基因的表达对癌细胞增殖、侵袭及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:以人正常肺细胞MRC-5作为对照,通过Western bloting检测人肺癌A549、SPC-A1和H322细胞中STMN1的蛋白表达;STMN1的siRNA转染A549细胞为实验组,另设空白组和阴性组,转染48 h后,Western bloting检测转染效果;CCK8法及Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力;Western bloting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达。结果:STMN1在肺癌A549、SPC-A1和H322细胞中的蛋白表达均显著高于在MRC-5细胞中的表达(P<0.05),选择A549细胞为研究对象。转染STMN1 siRNA的A549细胞STMN1的蛋白表达显著低于空白组(P<0.05)。与空白组比较,实验组细胞增殖及侵袭能力均显著降低,PCNA、MMP-2、PI3K、p-AKT蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论:siRNA沉默STMN1的表达通过下调PI3K/AKT信号通路降低肺癌细胞增殖及侵袭能力。

基于生物信息学分析STMN1基因在肝细胞癌中预后及免疫浸润的临床意义

背景STMN1(stathmin 1)是一种属于微管失稳蛋白家族的基因,被功能性肿瘤抑制蛋白p53转录抑制.STMN1首次被鉴定为一种细胞磷酸化蛋白,并于1983年在白血病中过度表达.STMN1在多种癌症中被发现上调,如非小细胞肺癌、乳腺癌和胃癌,其可以在实体肿瘤中诱导细胞分化、增殖和迁移,并与不良的临床预后相关.然而,STMN1在肝细胞癌中的作用和机制仍不清楚.目的研究STMN1基因在肝细胞癌中的表达情况以及其表达与患者临床特征和预后的关系,探究STMN1基因在肝细胞癌中作用的分子机制.方法从癌症基因图谱(https://portal.gdc.cancer.gov,TCGA)数据库下载肝细胞癌患者的临床信息和高通量RNA测序数据.利用R(v3.6.2)软件分析STMN1基因在肝细胞癌组织的表达情况,并分析其与患者临床特征的关系;用单因素和多因素Cox回归模型分析研究STMN1在肝细胞癌中的预后价值;基因富集分析用于分析STMN1表达相关通路机制;使用单样本基因集富集分析(single sample gene set enrichment analysis,ssGSEA)方法分析了肿瘤中24种免疫细胞类型的浸润,并探讨STMN1与免疫细胞的关系.结果对肝细胞癌和正常组织中的STMN1表达进行了分析,揭示了STMN1在肿瘤组织中高表达(P<0.001);采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析STMN1的诊断价值,ROC曲线下面积(AUC)为0.971,结果表明STMN1的预测能力有较高准确性;采用卡方检验或Fisher精确检验分析STMN1基因低表达组和高表达组在总体生存率(P=0.013)、T分期(P=0.002)、TNM分期(P=0.008)、年龄(P=0.006)和肿瘤分级(P<0.001)方面比较,差异具有统计学意义;STMN1基因高表达组的总生存率、无进展生存率以及疾病特异性生存率均低于低表达组(P<0.01);Cox回归分析显示STMN1的高表达是肝细胞癌患者预后的独立危险因素[HR=1.808(1.288-2.234),P=0.014];GSEA分析结果表明,STMN1基因在肝细胞癌中主要参与细胞周期、卵母细胞减数分裂、T细胞受体信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性及剪接体等;免疫浸润分析显示:STMN1表达与辅助T细胞2、滤泡辅助T细胞和辅助性T细胞密切正相关,与中性粒细胞、辅助T细胞17、树突状细胞等密切负相关.结论STMN1基因在肝细胞癌中表达上调,并与患者的不良预后相关,为肝细胞癌患者的独立预后因素,有望成为肝细胞癌的潜在分子标志物.

BMSCs诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1表达对Stmn1和Sept9基因的影响

目的:通过检测体外培养的骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)定向诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1基因对Stmn1和Sept9基因的表达变化情况,探讨骨髓基质细胞定向分化为胆碱能神经元的机制。方法:采用全骨髓培养法体外分离培养获得BMSCs,将第三代培养的BMSCs进行诱导分化,实时定量PCR技术分析干扰Hes1基因后,在骨髓基质细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中Stmn1和Sept9基因的表达变化情况。结果:BMSCs诱导分化为胆碱能神经元后,经免疫荧光检测有乙酰胆碱转移酶阳性细胞表达;Hes1基因表达在诱导组和干扰后诱导组中均较对照组高(P<0.05);Stmn1基因表达水平在干扰后诱导组、干扰组、诱导组均较对照组高(P<0.05);Sept9基因在干扰后诱导组和干扰组中表达水平均较对照组高(P<0.05),诱导组和对照组间无统计学意义。结论:在BMSCs向胆碱能神经元分化过程中,干扰Hes1基因可调控Sept9,Stmn1的表达,Hes1基因的表达变化导致与分化和增殖相关基因的表达改变。

STMN1基因在卵巢上皮癌中表达及临床意义

目的：分析重组人微管解聚蛋白-1（STMN1）基因在卵巢上皮癌中的表达及临床的关系。方法选取2010年8月至2014年2月厦门第三医院病理诊断为卵巢上皮癌的患者卵巢组织及血清标本共33例，应用荧光定量PCR技术对其STMN1基因进行分析。结果在33例卵巢上皮癌有14例STMN1表达，占42.4％，STMN1的表达与肿瘤大小、存活期（术后1年）、分化程度差异有统计学意义（P〈0.05）,与CA125表达差异无统计学意义（P〉0.05）；STMN1基因在卵巢上皮癌表达与B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）基因有相关性（r=0.66）。结论 STMN1基因与Bcl-2基因都促进卵巢上皮癌的生长和抑制细胞分化，STMN1表达与卵巢没有器官相关性，可作为卵巢上皮癌的预后指标和靶向治疗证据。

STMN1 mRNA在非小细胞肺癌中的表达与紫杉醇类药物化疗效果和患者生存率的关系

目的:RT-PCR法检测STMN1 mRNA在非小细胞肺癌石蜡组织中的表达与患者紫杉醇治疗疗效以及生存率的关系。方法:RT-PCR法检测135例非小细胞肺癌及20例正常肺组织中STMN1 mRNA的表达,探讨STMN1 mRNA表达水平与紫杉醇类药物化疗效果的关系。通过随访STMN1 mRNA不同表达水平的患者,探讨STMN1 mRNA表达水平与患者生存率的关系。结果:STMN1 mRNA表达水平在肺癌组织中显著高于正常肺组织(P=0.021)。STMN1 mRNA低表达患者无进展生存期为13.0个月,而高表达者为8.0个月(P=0.037)。紫杉醇类化疗方案在STMN1 mRNA高表达组中的疗效显著低于STMN1 mRNA低表达组(P=0.028),而在无紫杉醇类化疗患者中,两组之间疗效评价差异没有显著性(P=0.912)。结论:STMN1 mRNA在肺癌组织中高表达。STMN1 mRNA高表达与较短的生存期相关,STMN1 mRNA表达水平与紫杉醇类药物化疗效果有关。mRNA高表达组的患者化疗疗效较差,提示STMN1 mRNA高表达对紫杉醇耐药。

脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中Aldoc和Stmn1表达的研究

目的探讨脊髓源神经干细胞在诱导分化为胆碱能神经元过程中Aldoc和Stmn1的表达变化情况。方法从孕17天Wistar胚胎大鼠取出脊髓组织,制成细胞悬液,采用含EGF和bFGF的无血清限定性培养基培养,然后进行诱导分化,观察脊髓源神经干细胞向胆碱能神经元分化的情况,应用荧光定量PCR方法分析Aldoc和Stmn1基因在脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元的过程中的表达变化情况。结果神经干细胞在诱导分化为胆碱能神经元后,经免疫荧光检测有ChAT阳性细胞表达;Aldoc基因的表达量在胆碱能神经元较神经干细胞低(P<0.05);Stmn1基因的表达量则在诱导分化后较神经干细胞升高(P<0.05)。结论 Aldoc对神经干细胞的干性维持有重要作用,Stmn1在胆碱能神经元的成熟过程中起作用。

针灸联合活血祛痰膏方对PCOS患者卵巢早衰颗粒细胞STMN1和DENND1A基因表达的影响

目的探讨针灸联合活血祛痰膏方对PCOS患者卵巢早衰颗粒细胞STMN1和DENND1A基因表达的影响。方法选取2017年8月-2018年8月在襄阳市中医医院接受治疗的PCOS患者90例,按奇偶数字表随机分为两组,每组45例。A组予以活血祛痰膏方治疗,B组予以活血祛痰膏方联合针灸治疗。对比两组患者治疗前后STMN1、DENND1A表达情况,性激素水平,中医症候评分。结果治疗前,两组患者STMN1和DENND1A表达水平,血清卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、黄体酮(P)水平,中医症候评分比较差异均无统计学意义(均P<0.05);治疗后,两组患者STMN1和DENND1A表达水平,血清FSH、E2、LH、P水平,中医症候评分比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。在两组中,治疗后患者STMN1和DENND1A表达水平,血清FSH、E2、LH、P水平,中医症候评分均低于治疗前(均P<0.05)。结论PCOS患者卵巢早衰颗粒细胞中可见STMN1、DENND1A高表达,活血祛痰膏方联合针灸治疗后,STMN1、DENND1A表达水平下降,患者性激素水平及中医症候评分随之改善。

影响肝癌预后独立危险因子的信息学分析

目的:通过生物信息学调研和分析,探讨对肝癌预后产生影响的独立危险因子及其与肝癌靶向药索拉非尼作用靶点的相互关联特征。方法:从TCGA数据库收集的248例肝癌患者中选取79例死亡患者的基因表达量、生存时间、生存状态数据,以中位生存时间360 d为界将这些死亡患者分为2组,用DEseq算法对这2组患者的基因表达量数据进行差异基因筛选。不考虑其他混杂因素,仅考虑差异基因表达单个因素与患者生存时间相关,用Kaplan-Meier法对差异基因进行单因素分析。将分析得到的差异基因表达量和患者生存时间、生存状态整合的矩阵用COX回归模型作生存分析,寻找对肝癌预后产生影响的独立危险因子。以STRING数据库为基础,将得到的差异基因与肝癌靶向药索拉非尼的作用靶点结合构建蛋白互联网络,探寻索拉菲尼作用靶点与差异基因的关系。结果:DEseq算法初筛得到52个有可能对肝癌预后产生影响的差异基因。Kaplan-Meier法分析得到26个与患者生存时间相关的差异基因。COX分析最终确认3个差异基因(SQSTM1、ANXA10和STMN1)为影响肝癌预后的独立危险因子。其中ANXA10为负向影响因素,而STMN1与SQSTM1为肝癌患者预后的正向影响因素。蛋白质相互作用网络显示,肝癌靶向药索拉非尼的作用靶点与多个差异基因密切相关。ANXA10参与钙离子结合和钙依赖性磷脂结合,STMN1和SQSTM1在多种信号通路中起重要作用。结论:ANXA10、STMN1和SQSTM1可能是对肝癌预后产生影响的独立危险因子,可作为未来开发靶向药物的作用靶点或患者预后预测指标。

活血祛痰膏方联合针灸对PCOS卵巢早衰颗粒细胞中STMN1、DENND1A表达影响研究

目的探讨活血祛痰膏方联合针灸对多囊卵巢综合征(polycystic)ovary)syndrome,PCOS)卵巢早衰颗粒细胞中Stathmin 1基因(STMN1)、DENN domain containing基因(DENND1A)表达影响。方法以本院2017年9月至2018年9月收治的90例PCOS患者为对象,按电脑数字表法随机分为两组,每组各45例,对照组予以活血祛痰膏方治疗,实验组予以活血祛痰膏方联合针灸治疗,对比两组疗效及治疗前后STMN1、DENND1A表达情况。结果PCOS患者卵巢各级卵泡颗粒细胞中均可见STMN1、DENND1A表达,治疗后,实验组STMN1表达水平为(0.42±0.05),DENND1A为(0.11±0.01),分别较对照组的STMN1(0.84±0.13)、DENND1A(0.22±0.03)低,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,实验组卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)水平、黄体酮(P)水平均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,实验组中医证候评分较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PCOS卵巢早衰细胞中可见STMN1、DENND1A高表达,通过活血祛痰膏方联合针灸治疗后,STMN1、DENND1A表达水平下降,患者性激素水平、症状随之改善。