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PCR-SSP快速检测胰腺癌石蜡切片中K-ras基因点突变 被引量:4
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作者 戴存才 刘训良 +4 位作者 苗毅 杜竞辉 王祥 张兆松 陈淑贞 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1996年第4期330-333,共4页
胰腺癌第12位点K-ras基因点突变检出率达72%~100%,检测其点突变方法有数种。我们采用针对K-ras基因点突变方式设计的引物,对胰腺癌石蜡包埋组织进行多聚酶链反应(PCR),产物借助常规电泳即可判定有无K-r... 胰腺癌第12位点K-ras基因点突变检出率达72%~100%,检测其点突变方法有数种。我们采用针对K-ras基因点突变方式设计的引物,对胰腺癌石蜡包埋组织进行多聚酶链反应(PCR),产物借助常规电泳即可判定有无K-ras基因突变及突变方式,无需酶切、杂交、放射性及非放射性显影等技术。研究发现:31例胰腺癌标本有23例存在K-ras基因点突变,方式分别为CGT、GAT、GTT,而9例正常胰腺组织、19例胰腺良性疾病、7例胆管癌及4例十二指肠乳头癌均未见K-ras基因突变。该法简便、快速、特异、灵敏,易临床推广应用,可以作为胰腺病变良恶性鉴别的一种新方法。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 聚合酶链反应 k-ras基因 点突变
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PCR-SSP法和基因测序检测人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因第12位密码子点突变及其方式 被引量:6
2
作者 宋妙丽 杨晓春 +3 位作者 申咏梅 张梅花 孙亦晖 沈钧康 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2008年第4期545-548,共4页
目的检测人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因点突变及其突变方式,明确基因治疗靶点的碱基序列。方法针对K-ras基因第12位密码子点突变方式(CGT、GTT、GAT)设计顺序特异性引物(SSP),对人胰腺癌细胞株Patu 8988进行聚合酶链反应(PCR),扩... 目的检测人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因点突变及其突变方式,明确基因治疗靶点的碱基序列。方法针对K-ras基因第12位密码子点突变方式(CGT、GTT、GAT)设计顺序特异性引物(SSP),对人胰腺癌细胞株Patu 8988进行聚合酶链反应(PCR),扩增产物经12%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后判断该细胞株有无K-ras基因点突变及其突变方式。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因,扩增产物直接进行基因序列测定。结果PCR-SSP法检测人胰腺癌细胞株Patu 8988存在K-ras基因点突变,突变方式为GGT→GTT,其结果与基因序列测定完全相符。结论明确了人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因第12位密码子点突变方式(GGT→GTT),为胰腺癌的下一步基因治疗研究打下了坚实的基础;PCR-SSP方法检测K-ras基因点突变简便、快速、经济且特异性高,有望在临床上成为早期诊断和鉴别诊断胰腺癌的实用检测方法。 展开更多
关键词 胰腺癌 kras基因 点突变 聚合酶链反应
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PCR-SSCP检测大肠癌组织中p53、K-ras基因的突变 被引量:1
3
作者 钟世顺 张振书 +2 位作者 邓海军 李淑梅 马强 《实用癌症杂志》 2002年第5期487-489,共3页
目的 探讨p5 3、K -ras基因突变与大肠癌发生、发展的关系。方法 应用PCR -SSCP方法检测 68例大肠癌和癌旁组织以及 2 0例正常组织中 p5 3、K -ras基因突变情况。 结果 大肠癌组织中 p5 3、K -ras基因突变率分别为 47.1% (3 2 68)和... 目的 探讨p5 3、K -ras基因突变与大肠癌发生、发展的关系。方法 应用PCR -SSCP方法检测 68例大肠癌和癌旁组织以及 2 0例正常组织中 p5 3、K -ras基因突变情况。 结果 大肠癌组织中 p5 3、K -ras基因突变率分别为 47.1% (3 2 68)和44 .1% (3 0 68) ,明显高于癌旁组织 (13 .2 % ,9 68;7.4% ,5 68) ,2 0例正常组织中未检出 p5 3、K -ras基因突变。伴有淋巴结及远处转移的大肠癌者 ,其 p5 3、K -ras基因突变率明显高于无淋巴结及远处转移者 ;p5 3、K -ras基因突变与大肠癌组织学类型无关。结论 p5 3、K -ras基因突变与大肠癌发生、发展有密切关系 ,其在细胞癌变中起重要作用 ,可作为评估大肠癌转移的分子生物学指标之一。 展开更多
关键词 大肠癌 P53基因 k-ras基因 基因突变 分子生物学 pcr-SSCP
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应用PCR及寡核苷酸探针研究人原发性肺癌中Ki-ras点突变
4
作者 覃扬 孙芝琳 +3 位作者 赵建升 孙宁 步宏 刘开凤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1992年第4期277-281,共5页
应用PCR及寡核苷酸探针杂交方法研究了50例人原发性肺癌石蜡切片标本 中Ki-ras 12(Val),Ki-ras 13(Cys)点突变,发现13例为点突变阳性,突变率为26%,其中3例同时兼有二种点突变(Val/Cys);Ki-ras 12位的点突变率(20%)比Ki-ras 13位的点... 应用PCR及寡核苷酸探针杂交方法研究了50例人原发性肺癌石蜡切片标本 中Ki-ras 12(Val),Ki-ras 13(Cys)点突变,发现13例为点突变阳性,突变率为26%,其中3例同时兼有二种点突变(Val/Cys);Ki-ras 12位的点突变率(20%)比Ki-ras 13位的点突变率(12%)高。同时还发现Ki-ras基因的点突变存在于腺癌、鳞癌、小细胞肺癌以及各种分化程度的肺癌中。 展开更多
关键词 肺肿瘤 癌基因 点突变 pcr
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PCR-MASA检测胰腺癌十二指肠液中K-ras基因点突变
5
作者 戴存才 苗毅 +2 位作者 刘训良 张兆松 苏川 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期33-35,共3页
目的 了解胰腺癌十二指肠液中K-ras基因点突变检测的临床价值。方法 采用PCR-MASA(突变特异性等位基因扩增法)检测胰腺癌患者十二指肠液中K-ras基因点突变。结果胰腺癌患者十二指肠液标本中K-ras基因点突变率为17.4%(4/23),而被检测... 目的 了解胰腺癌十二指肠液中K-ras基因点突变检测的临床价值。方法 采用PCR-MASA(突变特异性等位基因扩增法)检测胰腺癌患者十二指肠液中K-ras基因点突变。结果胰腺癌患者十二指肠液标本中K-ras基因点突变率为17.4%(4/23),而被检测的急慢性胰腺炎、胰岛素瘤、壶腹癌、胆管癌、十二指肠乳头癌及胃癌病人十二指肠液标本均无K-ras基因突变。结论(1)PCR-MASA法简便、特异、敏感,扩增产物只需常规电泳、染色即可观察结果,元需酶切、杂交、放射性和非放射性显影。(2)对十二指肠液检测K-ras基因第12位密码子有无突变,可有助于判断胰腺病变良恶性及胰腺癌的诊断,但其实用价值尚有待进一步验证。 展开更多
关键词 pcr-MASA检测 胰腺癌 十二指肠液 k-ras基因 点突变
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K-Ras、BRAF、PIK3CA基因突变与直肠癌新辅助放化疗疗效及预后的关系 被引量:2
6
作者 张馨元 付永峰 +3 位作者 白立立 杨森 毛羽 董立新 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第16期3051-3055,共5页
目的:探讨K-Ras、BRAF、PIK3CA基因突变与直肠癌新辅助放化疗(nCRT)疗效及预后的关系。方法:选取2015年03月至2020年03月于医院接受nCRT并行根治手术的直肠癌患者182例作为研究对象。所有患者术前接受卡培他滨化疗,同时采用长程分割疗... 目的:探讨K-Ras、BRAF、PIK3CA基因突变与直肠癌新辅助放化疗(nCRT)疗效及预后的关系。方法:选取2015年03月至2020年03月于医院接受nCRT并行根治手术的直肠癌患者182例作为研究对象。所有患者术前接受卡培他滨化疗,同时采用长程分割疗法进行放疗,共治疗5周,nCRT结束后5~12周,根据肿瘤位置及nCRT情况行手术治疗,出院后进行为期1年的随访。以肿瘤退缩分级(TRG)评价直肠癌nCRT疗效,TRG 1-3级纳入nCRT有效组,TRG 4-5级纳入nCRT无效组。nCRT前经肠镜取肿瘤组织,检测K-Ras、BRAF、PIK3CA基因突变状态,分析K-Ras、BRAF、PIK3CA基因突变与直肠癌nCRT疗效及预后的关系。结果:在182例直肠癌患者中,K-Ras、BRAF、PIK3CA基因突变率分别为34.07%、6.59%、13.19%,nCRT治疗有效率为60.44%。nCRT有效组K-Ras、BRAF及PIK3CA基因突变率显著低于nCRT无效组(P<0.05)。K-Ras、BRAF、PIK3CA基因突变状态预测直肠癌nCRT疗效的敏感度分别为68.45%、65.38%、57.76%,特异度分别为72.39%、69.23%、63.12%,AUC分别为0.626、0.573、0.532。Logistic回归分析结果显示K-Ras、BRAF、PIK3CA基因突变与直肠癌nCRT疗效显著相关(P<0.05)。K-Ras、BRAF、PIK3CA基因突变患者平均生存时间均分别短于K-Ras、BRAF、PIK3CA无突变者,差异有统计学意义(P<0.05)。多变量COX回归分析结果显示K-Ras、BRAF及PIK3CA基因突变患者死亡风险分别是K-Ras、BRAF、PIK3CA无突变者的1.639倍、1.811倍、1.432倍(P<0.05)。结论:K-Ras、BRAF、PIK3CA基因突变与直肠癌患者nCRT疗效和预后相关,可作为nCRT疗效和预后的预测指标。 展开更多
关键词 直肠癌 新辅助放化疗 k-ras BRAF PIk3CA 基因突变 疗效评估 预后
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电化学发光PCR方法检测结肠癌中K-ras癌基因点突变(英文)
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作者 朱德斌 邢达 +1 位作者 唐亚兵 周小明 《激光生物学报》 CAS CSCD 2008年第2期155-157,共3页
发展了一种可用于快速检测K-ras癌基因点突变的电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法,该法采用三联吡啶钌标记的上游引物和生物素标记的下游引物对目的片段进行PCR扩增;随后,采用限制性内切酶MvaI对扩增产物进行酶切,由于突变导致酶切位点的... 发展了一种可用于快速检测K-ras癌基因点突变的电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法,该法采用三联吡啶钌标记的上游引物和生物素标记的下游引物对目的片段进行PCR扩增;随后,采用限制性内切酶MvaI对扩增产物进行酶切,由于突变导致酶切位点的丢失,所以只有野生型样品能被切断;通过生物素与链霉亲和素包被的磁珠连接,将生物素标记的DNA片段收集到反应池中进行电化学发光检测。采用该法对20例结肠癌组织中的K-ras癌基因第12位密码子进行点突变分析,得出其中有9例存在点突变,点突变率为45%。该方法操作简便、安全、快速、灵敏,可用于快速检测K-ras癌基因点突变。 展开更多
关键词 电化学发光pcr 结肠癌 k-ras癌基因 点突变
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PCR-MASA检测胰腺癌十二指肠液及腹水中K-ras基因点突变的研究
8
作者 戴存才 苗毅 +2 位作者 刘训良 张兆松 苏川 《外科理论与实践》 2004年第5期411-413,共3页
目的:了解胰腺癌病人十二指肠液和腹水中K-ras基因点突变检测的临床价值。方法:采用PCR-MASA(突变特异性等位基因扩增法)分别检测胰腺癌十二指肠液和腹水中K-ras基因点突变。结果:胰腺癌十二指肠液及腹水标本中K-ras基因突变率分别为17.... 目的:了解胰腺癌病人十二指肠液和腹水中K-ras基因点突变检测的临床价值。方法:采用PCR-MASA(突变特异性等位基因扩增法)分别检测胰腺癌十二指肠液和腹水中K-ras基因点突变。结果:胰腺癌十二指肠液及腹水标本中K-ras基因突变率分别为17.4%(4/23)和31.6%(6/19),而所有同时被检的急、慢性胰腺炎、胰岛素瘤、壶腹癌、胆管癌、十二指肠乳头癌、胃癌及肝癌病人的十二指肠液及腹水标本中均无K-ras基因突变发现。结论:①PCR-MASA方法简捷、特异、敏感,扩增产物只需常规电泳、染色即可观察到结果,无需酶切、杂交、放射性和非放射性显影等法。②对十二指肠液及腹水标本检测K-ras基因第12位密码子有无突变,有助于判断胰腺良、恶性病变及胰腺癌的诊断。其实用价值还有待进一步验证。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 腺癌 k-ras基因 点突变 pcr-突变特异性等位基因扩增法
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PCR-SSP检测人胰腺癌细胞株PC-2K-ras基因点突变及其方式 被引量:3
9
作者 高亮 王永向 +2 位作者 纪宗正 陈熹 吴涛 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期227-228,269,共3页
目的 检测人胰腺癌细胞株PC 2K ras基因点突变及其突变方式 ,明确基因治疗靶点的碱基序列。方法 针对K ras基因第 1 2位密码子点突变方式 (CGT、CAT、GTT)设计顺序特异性引物 (SSP) ,对人胰腺癌细胞株PC 2进行聚合酶链反应 (PCR) ,扩... 目的 检测人胰腺癌细胞株PC 2K ras基因点突变及其突变方式 ,明确基因治疗靶点的碱基序列。方法 针对K ras基因第 1 2位密码子点突变方式 (CGT、CAT、GTT)设计顺序特异性引物 (SSP) ,对人胰腺癌细胞株PC 2进行聚合酶链反应 (PCR) ,扩增产物借助聚丙烯酰胺凝胶电泳判定该细胞株有无K ras基因点突变及其突变方式。结果 人胰腺癌细胞株PC 2存在K ras基因点突变 ,突变方式为CGT。结论 PCR SSP法简便快速 ,特异性高 。 展开更多
关键词 胰腺癌 胰腺肿瘤 k-ras基因 点突变 聚合酶链反应 突变方式 顺序特异性引物
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ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS进行K-ras基因分型 被引量:1
10
作者 刘忠臣 郑薇薇 李庆阁 《中国肿瘤》 CAS 2005年第4期256-260,共5页
[目的]建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[方法]采用ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS两种方法,以自行构建的质粒DNA为模板,建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[结果]在相同的扩增条件下,采用A... [目的]建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[方法]采用ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS两种方法,以自行构建的质粒DNA为模板,建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[结果]在相同的扩增条件下,采用ARMS实时PCR方法,第一个位点的野生型和突变型的ΔCt值至少为,但第8二个位点野生型和突变型的ΔCt值仅为1~2左右。第二个位点改用MALDI鄄TOF-MS分型方法,采用一条公用引物和dATP,ddTTP,ddCTP和ddGTP的混和物,12密码子第二位点基因分型可以准确检测。[结论]ARMS实时PCR方法分析速度快,操作简便,但它需要合适的反应条件及高质量模板。MALDI-TOF-MS分型方法虽然步骤较多,但准确度高,反应体系稳定并具有高通量潜力。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 扩增阻碍突变系统方法 实时pcr 基因分型 k-ras基因 基因突变
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The Role of Ras Gene Mutation in Gastric Cancer and Precancerous Lesions 被引量:1
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作者 郝莹 张锦刊 +3 位作者 吕有勇 易粹琼 钱伟 崔建涛 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 1998年第3期141-144,共4页
Abnormality of ras gene family was studied in a total of 206 cases of gastric cancer and precancerous lesions by PCR-RFLP, PCR-SSCP and DNA sequencing. The results showed that mutation rate of H-ras 12 codon in metapl... Abnormality of ras gene family was studied in a total of 206 cases of gastric cancer and precancerous lesions by PCR-RFLP, PCR-SSCP and DNA sequencing. The results showed that mutation rate of H-ras 12 codon in metaplasia,atypical hyperplasia, early-stage cancer and advanced cancer was 16. 7%, 31. 2 %, 50. 0%, and 32. 2%, respectively. In the groups of superficial gastritis and normal controls, no mutation were detected in codon 12 of ras. Mutations of Hras 61 codon and N-ras 12 codon in various groups were the same as those in normal control. K-ras 12 codon mutation was detected in only 2 cases of gastric cancer by using PCR-SSCP, but it was not detected by DNA sequencing, which may be polymorphism. All H-ras 12 codon mutations were G→T mutation. There were significant difference between the groups of metaplasia, dysplasia, gastric carcinoma and normal control group (P<0.05, P<0.01, P<0.01,respectively). It was concluded that H-ras 12 codon mutation was an early event and may play an important role in gastric carcinogenesis. Although K-ras, N-ras mutation rates are high in colon cancer and leukemia, it seems to bear no relationship with gastric cancer. 展开更多
关键词 ras gene mutation pcr/RFLP pcr/SSCP DNA-sequencing gastric cancer precancerous lesions
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人恶性胸膜间皮瘤组织中K-ras基因点突变的研究
12
作者 刘如爱 杨雪倩 +3 位作者 王播勇 梅雯 周静华 熊伟 《大理大学学报》 2023年第4期43-49,共7页
目的:探究云南省大姚县青石棉污染区恶性胸膜间皮瘤(MPM)患者组织K-ras基因点突变。方法:应用聚合酶链式反应(PCR)-单链构象多态性分析和PCR-DNA测序技术联合检测59例MPM患者和13例非MPM患者胸膜间皮组织中K-ras基因密码子12、13和61的... 目的:探究云南省大姚县青石棉污染区恶性胸膜间皮瘤(MPM)患者组织K-ras基因点突变。方法:应用聚合酶链式反应(PCR)-单链构象多态性分析和PCR-DNA测序技术联合检测59例MPM患者和13例非MPM患者胸膜间皮组织中K-ras基因密码子12、13和61的点突变情况。结果:59例MPM患者和13例非MPM患者胸膜间皮组织中均没有发生K-ras基因点突变,K-ras基因点突变的检出率为0.0%。结论:云南省大姚县青石棉污染区MPM患者组织K-ras基因突变型的比例较低,提示K-ras原癌基因点突变在此地区MPM的诱导发生中并不发挥关键作用。 展开更多
关键词 恶性胸膜间皮瘤 k-ras基因 点突变 聚合酶链式反应-单链构象多态性
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A study of point mutation of ras genes in human gastric cancer
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作者 王俊茹 刘为纹 +2 位作者 邓国仁 吕有勇 王欣 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1994年第3期206-210,共5页
The point mutation at codons 12 and 61 of c-Ha-ras gene,at codon 12 of N-ras gene and at codons 12 and 13 of K-ras gene was observed in formalin-fixed and paraffin-embedded tissue specimens of 42 cases of gastric canc... The point mutation at codons 12 and 61 of c-Ha-ras gene,at codon 12 of N-ras gene and at codons 12 and 13 of K-ras gene was observed in formalin-fixed and paraffin-embedded tissue specimens of 42 cases of gastric cancer with PCR-RFLP method. It was found that the point mutation at codon 12 of c-Ha-ras occurred in 14 cases out of the 42(33. 3%) and that at codon 12 of K-ras in 2 cases(4. 8%). Statistical analysis showed that the point mutation of ras genes plays an itnportant role in the prognosis for the patients with gastric cancer. 展开更多
关键词 GASTRIC cancer ras ONCOGENE point mutation pcr-RFLP
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非同位素PCR-SSCP分析检测结肠腺瘤与腺癌中K-ras基因改变
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作者 邱红明 季晨阳 +2 位作者 董敬朋 张素娟 李春德 《第一军医大学学报》 CSCD 1994年第3期187-189,共3页
运用非同位素PCR-SSCP分析检测结肠腺瘤与腺癌中K-ras基因的改变,探讨该基因改变与结肠腺瘤不典型增生、结肠腺癌分期及分化程度之间的关系。结果显示,与自身正常及癌旁粘膜比较,24例结肠腺场中,5例出现单链带的泳... 运用非同位素PCR-SSCP分析检测结肠腺瘤与腺癌中K-ras基因的改变,探讨该基因改变与结肠腺瘤不典型增生、结肠腺癌分期及分化程度之间的关系。结果显示,与自身正常及癌旁粘膜比较,24例结肠腺场中,5例出现单链带的泳动变位,阳性率为21%;18例腺瘤中检出2例有单链带泳动变位,均为伴局部场变的腺瘤组织,提示当腺瘤发生ras基因改变时,其恶性倾向增大。但结肠癌的分期及分化程度与PCR-SSCP分析阳性率无明显相关性。增生性及幼年性息肉均未检出有改变。该法简便快速,不用同位素,可适用于临床标本检测。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 k-ras基因 聚合酶链反应 单链构象
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非小细胞肺癌中EGFR和K-ras基因突变检测分析与病理特征的关系 被引量:12
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作者 王琼 吕亚莉 +2 位作者 钟梅 董周寰 赵坡 《诊断病理学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第2期144-147,共4页
目的探讨不同分型非小细胞肺癌的EGFR与K-ras基因突变及其相关病理特征的关系。方法基因测序方法检测260例非小细胞肺肿瘤患者肿瘤组织中的EGFR(18,19,20,21外显子)和K-ras(12,13,61密码子)基因的突变。结果 260例样本中,EGFR基因突变... 目的探讨不同分型非小细胞肺癌的EGFR与K-ras基因突变及其相关病理特征的关系。方法基因测序方法检测260例非小细胞肺肿瘤患者肿瘤组织中的EGFR(18,19,20,21外显子)和K-ras(12,13,61密码子)基因的突变。结果 260例样本中,EGFR基因突变检出率为48.8%(127/260),突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变。K-ras基因突变检出率为10%(26/260),其中12、13和61密码子均发现突变。受检的所有样本中没有发现EGFR与K-ras基因同时出现突变的情况。腺癌的EGFR突变检出率明显高于鳞状细胞癌等其他组织类型。在分化程度上,高分化与中分化癌基因突变检出率和中分化与低分化突变检出率比较差异显著(P<0.01)。EGFR突变与有无淋巴结转移无关(P>0.05)。K-ras基因突变与组织类型、患者性别、分化程度、有无淋巴结转移间无相关性。结论非小细胞肺癌EGFR基因突变检出率较高,K-ras基因突变检出率较低,且两种突变并不同时出现。EGFR基因突变与性别、肺癌组织类型、分化程度有关,存在多种突变。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 EGFR k-ras 突变
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K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响 被引量:10
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作者 李景南 李潇 +2 位作者 钱家鸣 路新卿 杨红 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期46-50,141,共6页
目的观察K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响,探讨其促进结肠癌转移的相关机制。方法将培养的结肠癌细胞株Caco-2分别给予空白质粒phr-GFP转染(对照组)、K-ra... 目的观察K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响,探讨其促进结肠癌转移的相关机制。方法将培养的结肠癌细胞株Caco-2分别给予空白质粒phr-GFP转染(对照组)、K-ras基因突变型质粒phr-K-ras(Val12)转染(转染组)、phr-K-ras(Val12)质粒转染+丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径特异性抑制剂PD98059处理(MAPK抑制组)和phr-K-ras(Val12)质粒转染+磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)途径特异性抑制剂LY294002处理(PI-3K抑制组),Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率,细胞免疫荧光检测E-cadherin、β-catenin蛋白表达及其在细胞内定位,Western blot检测细胞内p120蛋白的表达,免疫沉淀检测与E-cadherin结合的β-catenin蛋白水平,Pull-down实验检测RhoA蛋白活性。结果转染组Caco-2细胞的迁移率为(19.8±5.6)%,明显高于对照组的(14.0±4.2)%(P=0.001)和MAPK抑制组的(15.8±1.2)%(P=0.044),但与PI-3K抑制组的(17.5±2.8)%差异无统计学意义(P=0.095)。细胞免疫荧光检测结果显示,转染组细胞膜上的E-cadherin和β-catenin蛋白表达减少。Western blot检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内p120总蛋白表达减少。免疫沉淀检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内与E-cadhenn结合的β-catenin蛋白水平下降。Pulldown实验检测结果显示,转染组细胞内的RhoA蛋白活性增加。结论K-ras基因突变可以促进结肠癌细胞株Caco-2的转移,其可能是通过MAPK途径减少E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成,增强RhoA蛋白活性来实现的。 展开更多
关键词 k-ras基因 突变 E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体 RHOA蛋白 结肠癌 转移
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k-ras基因在中国结直肠癌患者中的突变状态 被引量:30
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作者 刘伟 王丽 +5 位作者 余英豪 王旭洲 武一曼 吴在增 欧阳学农 王烈 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2011年第13期1367-1374,共8页
目的:评价中国结直肠癌患者中k-ras基因突变状态及其与临床病理参数的关系.方法:收集2008-01/2009-12在中国人民解放军南京军区福州总医院手术切除的临床资料完整的结直肠癌石蜡包埋组织280例,分别应用实时荧光定量PCR和直接测序法检测... 目的:评价中国结直肠癌患者中k-ras基因突变状态及其与临床病理参数的关系.方法:收集2008-01/2009-12在中国人民解放军南京军区福州总医院手术切除的临床资料完整的结直肠癌石蜡包埋组织280例,分别应用实时荧光定量PCR和直接测序法检测结直肠癌中k-ras基因外显子2中第12、13编码子上最常见的7种突变类型,即第12编码子的35G>A、35G>T、35G>C、34G>A、34G>T、34G>C及第13编码子的38G>A,同时将两种检测结果进行比对分析.结果:(1)经直接基因测序,确认在280例结直肠癌中,k-ras基因测序阳性(基因突变型)94例,阳性率33.57%(94/280),其中第12编码子的35G>A、35G>T、35G>C、34G>A、34G>T及34G>C的突变率分别为14.64%(41/280)、4.29%(12/280)、0.36%(1/280)、2.86%(8/280)、3.57%(10/280)、0.36%(1/280),第13编码子的38G>A的突变率为7.5%(21/280);(2)94例k-ras基因测序阳性(基因突变型)病例中,实时荧光定量PCR阳性91例[灵敏度96.8%(91/94)],阴性3例;186例基因测序阴性(野生型)中,实时荧光定量PCR阴性184例[特异性98.9%(184/186)],阳性2例;实时荧光定量PCR法与直接基因测序法符合率为98.2%[(91+184)/280];(3)k-ras基因突变与患者性别、年龄相关(均P<0.05),而与肿瘤部位、分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移无相关性(均P>0.05).结论:(1)中国结直肠癌患者中存在较大比例的k-ras基因突变(33.57%),在临床选取表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR单抗靶向药物治疗结直肠癌患者之前均应常规检测k-ras基因突变状态,从而为靶向治疗提供可靠的参考依据;(2)实时荧光定量PCR检测结果与基因测序检测结果高度一致,实时荧光定量PCR能够准确、快速、简便的检测出结直肠癌k-ras基因突变位点,可用于结直肠癌k-ras基因突变的检测;(3)k-ras基因突变与结直肠癌的生物学行为无明显相关性,但在≥60岁的女性人群中k-ras基因突变率较高. 展开更多
关键词 结直肠癌 k-ras基因 基因突变 直接基因测序法 实时荧光定量pcr 靶向治疗 临床病理参数
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K RAS蛋白表达及基因状态在胃癌组织中的临床意义 被引量:5
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作者 宗桂娟 尹海兵 +5 位作者 李春笋 陈旭东 蔡南南 杨磊 赵斌 何松 《安徽医药》 CAS 2020年第4期705-708,共4页
目的分析胃癌病人的K RAS蛋白表达及基因状态与临床病理特征的关系,为胃癌病人的个性化治疗提供指导。方法选取2016年1月至2017年12月南通市肿瘤医院314例胃癌病人,分别采用免疫组织化学法及荧光定量PCR的方法分析K RAS蛋白表达水平和... 目的分析胃癌病人的K RAS蛋白表达及基因状态与临床病理特征的关系,为胃癌病人的个性化治疗提供指导。方法选取2016年1月至2017年12月南通市肿瘤医院314例胃癌病人,分别采用免疫组织化学法及荧光定量PCR的方法分析K RAS蛋白表达水平和基因突变状态。结果314例胃癌组织中K RAS蛋白表达与胃癌病人的年龄(P=0.6485)、性别(P=0.5858)、肿瘤大小(P=0.7611)、脉管侵犯(P=0.5524)、淋巴结转移均无明显关系(P=0.5064),与组织学分级密切相关(P=0.0195);K RAS基因突变类型包括G12D、G13D、G12A、G12S、G13S;不同性别(P=0.4566)、年龄(P=0.5242)、组织分化之间(P=0.7474)的K RAS突变率差异无统计学意义;K RAS基因突变率与蛋白表达检出率差异有统计学意义(P=0.0377)。结论K RAS的蛋白表达程度与肿瘤的分化程度有关,K RAS基因在不同性别、年龄、组织分化之间的突变率差异无统计学意义,且K RAS基因突变率与蛋白表达不一致。 展开更多
关键词 胃肿瘤 基因 ras 突变 免疫组织化学 荧光免疫测定 k ras 临床病理特征
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结直肠癌患者组织中K-ras和BRAF基因突变与不同病理特征的相关性分析 被引量:6
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作者 史敏 郭晓波 +2 位作者 李思远 孟婷婷 尚丛珊 《现代检验医学杂志》 CAS 2018年第3期27-30,共4页
目的分析K-ras基因、BRAF基因突变在结直肠癌(CRC)不同病变中的特点,从而探索CRC基因治疗的靶点。方法采用实时荧光定量PCR法检测130例CRC患者肿瘤标本的K-ras基因、BRAF基因突变情况,并按不同的临床特征进行分析。结果 K-ras基因突变... 目的分析K-ras基因、BRAF基因突变在结直肠癌(CRC)不同病变中的特点,从而探索CRC基因治疗的靶点。方法采用实时荧光定量PCR法检测130例CRC患者肿瘤标本的K-ras基因、BRAF基因突变情况,并按不同的临床特征进行分析。结果 K-ras基因突变率在所有CRC患者中为36.15%(47/130),其在直肠癌患者中的突变率明显高于结肠癌患者[47.62%(30/63)vs 25.37%(17/67)],差异有统计学意义(χ~2=6.691,P<0.01),直肠癌患者Gly12ASP位点的突变率显著高于结肠癌患者[46.03%(29/63)vs 26.87%(20/67)],差异有统计学意义(χ~2=5.167,P<0.05);在Ⅰ+Ⅱ期CRC患者中的突变率显著低于Ⅲ+Ⅳ期CRC患者[15.28%(11/72)vs 62.07%(36/58)],差异有统计学意义(χ~2=30.469,P=0.000)。BRAF基因突变率在所有CRC患者中为6.92%(9/130),其在结肠癌患者中的突变率明显高于直肠癌患者[11.94%(8/67)vs 1.59%(1/63),使用Fisher确切概率法P<0.05];BRAF基因突变率在CRC患者术前血清CA199水平升高者明显高于水平正常者[11.59%(8/69)vs 1.64%(1/61),使用Fisher确切概率法P<0.05]。K-ras基因突变率与具体的病理学特征如性别、年龄、组织学分型等无统计学相关性(P>0.05)。结论在CRC患者中,K-ras基因突变较BRAF基因突变更为常见,且直肠癌患者较结肠癌患者更易表现为K-ras基因突变;K-ras基因突变率越高,CRC患者的TNM分期就越高;K-ras基因上Gly12ASP位点的突变与直肠癌的发生发展密切相关,血清CA199水平可作为BRAF基因突变的标志性物质。K-ras和BRAF基因突变靶点的相关研究有望为CRC的分子靶向治疗提供有力的理论支持。 展开更多
关键词 结直肠癌 基因突变 k-ras基因 BRAF基因 基因突变靶点
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胃粘膜组织K-ras、P16基因和EGF表达及意义 被引量:4
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作者 徐晓凤 陈亚宝 +1 位作者 朱炳良 朱亚平 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期17-18,共2页
目的 检测胃粘膜组织K ras、P16基因及表皮生长因子 (EGF) ,探讨其临床意义。方法 K ras、P16基因采用单链构象多态性分析法 (SSCP) ,EGF采用免疫组化法。结果 K ras在早期胃癌和进展期胃癌的阳性表达率分别为 5 0 %、75 % ,突变率... 目的 检测胃粘膜组织K ras、P16基因及表皮生长因子 (EGF) ,探讨其临床意义。方法 K ras、P16基因采用单链构象多态性分析法 (SSCP) ,EGF采用免疫组化法。结果 K ras在早期胃癌和进展期胃癌的阳性表达率分别为 5 0 %、75 % ,突变率分别为 78.6 %、72 .7% ;P16基因在早期胃癌和进展期胃癌的阳性表达率分别为 2 1.4 %、18.2 % ,突变率分别为 6 4 .3%、6 3.6 %。与对照组 (慢性浅表性胃炎 )相比差异均有显著性。EGF在有淋巴结转移和无淋巴结转移的胃癌组织中阳性表达分别为 76 .9%、38.9% ,两者有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 K ras、P16。 展开更多
关键词 胃粘膜组织 k-ras基因 P16基因 EGF 表皮生长因子 基因突变 胃癌
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