Effects of Storage Temperature on the Effective Activity of Straw Frozen Semen after Thawing

The aim was to discuss the optimal storage environment and proper insemination time after thawing of 0.25 mL straw frozen semen. Straw frozen semen was thawed at 40 ℃ for 20 s, and then stored at 0 -4 ℃, 14 - 16 ℃, 25 -27 ℃ for 2, 4, 6, 8 and 10 h, respectively. The sperm motility was detected. After thawing, semen was stored at 0 - 4 ℃ and 14 - 16 ℃ for 10 h. Their sperm motilities （0.434 ±0. 016 7 and 0.423 ±0.019 6） had no significant differences （P 〉 0.05） with initial thawing motility （0.441 ± 0.030）. Sperm motility reduced as the storage time prolonged at 25 -27 ℃. Sperm motility after 6 h had signifi- cant differences with that of initial thawing motility （P 〈 O. 05 ）, and sperm motilities after 8 and 10 h showed extremely significant differences （P 〈 0.01 ）. Thus, sperm motility after thawing was still very high after stored at 0 -4 ℃ and 14 - 16 ℃ within 10 h, which met the requirements for insemination. Under this temperature and time ranges, sperm could be carried over long distances, which had small effects on sperm quality and reached the expected insemination effects. However, under the temperature of 25 - 27 ℃, semen should be used for insemination within 6 h after thawing.

绒山羊细管冻精保存时间对使用效果的影响

为了比较绒山羊细管冻精不同保存时间的品质变化和使用效果,笔者将辽宁绒山羊公羊的细管冻精从2005年分别保存0,5,10,18年,并分别进行抽检,选用成年母羊进行冻精输精,比较了细管冻精解冻后的活力、畸形率、冻精输配受胎率及冻精后代的产羔率、羔羊初生重和120 d断奶重。结果表明:2005年生产的辽宁绒山羊细管冻精经过0,5,10,18年的冷冻保存,解冻后的活力和畸形率没有显著变化(P>0.05),细管冻精的配种受胎效果与后代生产性能也没有显著差异(P>0.05),冻精后代的产羔率、羔羊平均初生重和120 d断奶重都没有显著差异(P>0.05)。说明细管冻精的保存时间在一定期限内对细管冻精的质量和使有效果没有不利影响。

不同解冻方法对邓川牛细管冻精品质的影响

为探讨不同解冻方法对纯种邓川牛公牛细管冻精品质的影响,本试验采用13℃、38℃、75℃三个不同的解冻温度对邓川牛细管精液解冻不同的时间,探索解冻后精子活力、有效生存时间以及顶体完整率变化,以期找到最合适的解冻方法。结果显示,在13℃解冻条件下解冻,精子的活率均低于0.3,38℃环境中解冻20s的精子活力较高,为0.43,75℃条件下解冻3s的精子活力最高,能达到0.45;不同温度解冻精子活率差异性显著(P<0.05)。38℃和75℃解冻后精子存活时间随解冻温度的升高而降低,不同解冻温度解冻不同时间精子存活时间差异显著(P<0.05)。75℃环境中解冻3s精子顶体完整率最高,在57%左右。在兼顾解冻效果与输精环境的基础上,可选用75℃3s解冻或38℃20s解冻。

添加VB12、VE、VC对无角道塞特绵羊精液冷冻效果的影响

探讨在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加VB12、VE、VC对精子冷冻品质的影响。在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加不同质量浓度的VB12、VE、VC制作细管冻精,解冻后观察精子的成活率和顶体完整率等指标。结果显示,VB12添加0.003 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P<0.05)和精子顶体完整率(P<0.05);VE添加2.5 g/L时,能够极显著提高解冻后的精子活率(P<0.01)和顶体完整率(P<0.01);VC的添加4.4 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P<0.05),但对冷冻后精子的顶体完整率无影响。在稀释液中添加VB12、VE和VC能使解冻后精子品质得到提高。VE添加后能够极显著提高冷冻精子的顶体完整率,应该优先考虑添加。

解冻温度和保存时间对牛细管冻精精子活率的影响

本试验采用4组解冻温度,每组解冻温度设计了2个不同的解冻时间,观察不同解冻温度、解冻时间及解冻后常温保存时间对牛细管冷冻精液精子活率的影响。结果显示,4组解冻温度以80℃(3s)精子活率最高,为48.77%,20℃(80s)精子活率最低,为30.02%,两者差异极显著(P<0.01)。各组精液解冻后保存1h检查精子活率明显高于解冻时镜检活率(P<0.05),80℃解冻后间隔5h精子活率仍达到30%。

重庆板角山羊细管冷冻精液的研究

为了建立重庆板角山羊精液的细管冷冻保存方法,实验进行了不同冷冻稀释液(配方Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)、不同冷冻保存剂(甘油、EG)及不同离心速度(1000、1200、1400r/min)对重庆板角山羊细管精液冷冻保存效果的研究,结果表明:配方Ⅱ对重庆板角山羊精液的冻后活率显著优于配方Ⅰ和Ⅲ(P<0.05)。在配方Ⅱ中添加相同剂量(5%)的EG和甘油,精液冻后活率差异不显著(P>0.05)。以1200r/min的速度对山羊鲜精作离心处理后,冻后活率相对于对照组有所提高,但差异不显著(P>0.05)。

驴精液冷冻保存的研究

试验以解冻后精子的活力、顶体完整率、顶体膨胀率、顶体破损率、尾部畸形率等几个重要评定指标为依据,筛选了几种驴冻精的冷冻稀释液配方,将其中较好的稀释液作为对照组,再分别进行细管冻精、颗粒冻精和添加不同剂量安钠咖的对比试验.结果表明:5号稀释液的冻后精子活力要显著高于其他4种稀释液(P<0.05),精子活力达到0.31,顶体完整率达62.8%;细管冻精的活力要显著高于颗粒冻精(P<0.05);在冷冻液中添加安钠咖2mg·mL-1能显著提高解冻后精子的活力(P<0.05),使顶体的膨胀率降低9%.

猪精液5mL大管冷冻方法的初步研究

以5 mL大管解冻后的精子活力、质膜完整率、顶体完整率以及人工授精结果为判定指标,筛选冷冻液Ⅰ和冷冻液Ⅱ中N-乙酰-D-氨基葡萄糖(N-Acetyl-D-Glucosamine,N-AcGA)、甘油和卵黄的适宜浓度,寻找适宜的平衡时间和冷冻高度。结果显示:(1)在冷冻液Ⅰ中添加0.1%的N-AcGA,解冻后精子的活力和顶体完整率最高,分别为50.00%和56.60%;(2)冷冻液Ⅱ中以4%的甘油浓度最好,解冻后精子的活力、弯尾率和顶体完整率可分别达52.50%、52.08%和77.67%;(3)冷冻液中的卵黄终浓度以10%效果最佳;(4)在4℃中平衡2 h,冻后顶体完整率比对照组(0 h)有显著提高(P<0.05);(5)在冷冻高度方面,距液氮面1 cm处冷冻对精子活力和顶体完整性都有明显的保护作用;(6)在人工授精方面,5 mL大管冷冻精液平均获得了超过80%的受胎率。

绒山羊细管冻精的解冻方法

将6只2周岁的辽宁绒山羊种公羊精液混合后制成0.25mL细管冻精,分别采用37℃12s、39℃8s、70℃4s3种方法进行解冻,通过对精子活力、精子存活时间、顶体完整率、畸形率和精清酶进行分析,并结合升温曲线,研究解冻方法对绒山羊细管冻精品质的影响。结果发现,70℃解冻4s的精子活力显著高于37℃12s(P<0.05),与39℃8s相比差异虽不显著(P>0.05),但亦有增高的趋势;不同解冻方法对解冻后精子存活时间的影响差异不显著(P>0.05);70℃解冻4s的精子顶体完整率显著高于其余两种解冻方法(P<0.05),且精子畸形率显著低于其余两种解冻方法(P<0.05);70℃解冻4s的精清中GOT活性显著低于其余两种解冻方法(P<0.05),且LDH活性和HYD含量均显著低于37℃12s(P<0.05);70℃下解冻4s的精子经过危险温区速率最快。因此,70℃4s解冻方法能有效缓解解冻对精子的损伤,对保持精子的正常形态和活力较为有利,是绒山羊细管冻精适宜的解冻方法。

提高牛细管冻精精子活力的试验研究

本文从细管冻精的3个关键技术环节研究了稀释液的种类对精子活力与存活的影响,确定了细管冻精精子在液氮冷冻度过冰晶期对其损伤最小的最佳熏蒸高度（最佳冷冻温度）和最佳熏蒸时间,并且对成品冷冻的细管冻精不同解冻温度及时间进行研究。由柠檬酸钠和果糖组成的稀释液精子存活时间长,Tris稀释液冷冻后精子活力高于其他配方;牛细管冻精最佳熏蒸距离为2cm,时间影响不显著,7~9min均可;用50℃温水15s解冻精子的活力最高。

TCM199对陇东绒山羊细管精液的冷冻效果

目的研究陇东绒山羊细管精液冷冻时,通过在葡萄糖-柠檬酸盐稀释液中添加TCM199,观察其对陇东绒山羊细管冷冻精冷冻效果的影响。方法选用4个试验组和对照组进行对比试验,试验组是在稀释液基础上分别添加TCM199标准液,含量为0.5%、1%、3%、5%(V/V)。结果表明:添加1%的TCM199标准液的试验组(B)效果较好,其冷冻解冻后精子活力高于对照组和其它试验组,但差异不显著(P>0.05),质膜完整率试验组和对照组相比差异不显著(P>0.05),在精子穿卵活力试验中(SPA),试验组和对照组相比差异不显著(P>0.05)。但在细管解冻后不同时间段活力测定试验中,解冻后5h、8h、12h,试验组(B)和对照组活力差异显著(P<0.05),且随着时间延长呈下降趋势。因此制作陇东绒山羊精液细管冷冻时,添加1%TCM199标准液具有比较好的效果。

提高奶牛细管冻精精子活力的试验研究

为了提高奶牛细管冻精精子的活力,试验探索了稀释液种类、最佳熏蒸距离、最佳冷冻温度、最佳熏蒸时间、不同解冻温度及时间对精子活力的影响。结果表明:精子在由柠檬酸钠和果糖组成的稀释液中存活时间长,在三羟甲基氨基甲烷稀释液中冷冻后精子活力高于其他稀释液;牛细管冻精最佳熏蒸距离为2.5 cm,时间影响不显著(5～10 min均可);用50℃温水解冻15 s的精子活力比其他解冻温度和时间时的精子活力要好。

不同冷冻方法对甘肃高山细毛羊精液冷冻效果的研究

为了研究甘肃高山细毛羊种公羊精液冷冻保存的效果。将液氮熏蒸距离按1.5、2.0、2.5cm分为三个组合,每个组合用6.5、7、7.5min三种时间进行熏蒸处理,对细毛羊种公羊冻精进行对比试验。熏蒸距离为2cm,熏蒸时间为6.5min、7min和7.5min处理组精子活率分别为24.91±3.31、42.33±3.96和32.83±2.08,与其它各组精子活率相比较好,组间差异显著(P<0.05)。试验表明,细毛羊种公羊冻精熏蒸距离越近,熏蒸时间应减短,熏蒸距离越远,熏蒸时间应延长。最佳熏蒸距离为2cm和熏蒸时间为7min,精子活率42.33±3.96。液氮熏蒸细管冷冻法的精子活率(42.33±3.96),高于液氮熏蒸颗粒法(33.75±5.32),而二者差异显著(P<0.05)。液氮颗粒法的顶体完整率(33.75%)和细管法的顶体完整率(39.08%)差异不显著(P>0.05)。通过调整细毛羊精液稀释液成分、pH值、渗透压,利用简易的液氮熏蒸方法可以完成甘肃高山细毛羊精液冷冻保存。

绵羊细管冻精推广应用的前景

本文介绍了绵羊细管冻精的优点与应用现状,认为有必要重新审视绵羊细管冻精所具有的独特产品优势,及对绵羊特别是肉羊的品种改良与优质羊肉生产将产生的积极作用,建议在全疆范围内推广应用绵羊细管冻精技术,并就该技术在推广应用中可能面临的主要问题提出了解决方法。

猪冷冻精液体外受精研究

为简化猪体外受精过程中精液的来源，避免不同公猪精液和不同采精时间对猪体外受精的影响，本研究采用5mL大管冷冻精液进行体外受精（IVF），研究IVF过程中的各项参数。结果表明：精卵共孵2～8h对多精人卵率影响不大（P〉0．05），2-细胞率随着共孵时间的延长而增加，8h时达到72．8％，显著高于2h组（60．5％，P〈0．05），桑椹胚和囊胚发育率以6h组最高，分别达46．1％和3．48％。多精人卵率随精子浓度的增加而增加，且各组之间差异显著（P〈0．05），2-细胞率也以10^8组（81．2％）最高，且显著高于10^5组（63．7％）（P〈0．05），同时10^7组和10^8组分别获得了8．11％和3．13％的囊胚发育率。以NCSU-23作为成熟培养液，并部分去除卵丘细胞的IVF卵裂率和囊胚率最高，达77．1％和7．33％。冻精和新鲜精液的IVF，无论是在卵裂率，还是桑椹胚或囊胚率上均无显著差异（P〉0．05）。

陶赛特羊细管冷冻精液制作保存技术的研究

我们对11组试验配方中冷冻效果较好的5组配方用同样的冷冻程序进行了冷冻稀释液、甘油浓度和解冻温度进行了研究。结果表明，2号稀释液效果最好（P〈0.05）甘油浓度为6％时的冷冻效果最佳（P〈0．01），在40～44℃解冻后其活力可高达0．5。

牛精液新型冷冻保护剂的研究

通过对不同浓度的甘油和乙二醇对牛精液冷冻保存效果的测定,探讨冷冻保护剂乙二醇与传统冷冻保护剂甘油的冷冻效果,并通过对葡萄糖和卵黄及Tris等成分的调整进一步分析了主要营养成分和缓冲体系对牛精液冷冻保存的影响程度。试验表明:1GL和EG对牛精子均有良好的冷冻保护能力,解冻后6h的活力GL组中以GL1.2和GL1.4的活力最高,均为0.50;EG组中以EG0.7的活力最高,达到0.53,高于0.35以上的国标。2其他营养成分的变化对GL和EG保护精子的效果有一定影响,特别是卵黄的作用比较明显;3在同等条件下,GL对精子的冷冻保护效果优于EG,EG组的活力衰竭快于GL组。

陶塞特肉羊细管冻精人工授精受胎率的观察

2007年10—11月应用陶塞特肉羊细管冻精，对97只陶塞特母羊进行人工授精试验，受胎率达68％。

两种新剂型牛细管冻精精子质量评定

对以EG和GL为冷冻保护剂的2种稀释液对牛精液冷冻保存效果进行了质量检测与分析,表明2种剂型细管冻精在总活精子数、精子复苏率、平均路径速率、曲线运动速率、直线运动速率、顶体完整率和畸形率等方面显著优于对照组,EG剂型组的效果优于GL剂型组。

BMY牛细管冷冻精液生产工艺及稀释液的筛选

[目的]为了增加精液数量,提高种公牛的利用率,降低精液能量消耗,补充适当营养和保护物质的活动延长精子的寿命,有利于精子的冷冻和保存。[方法]冷冻精液稀释液的筛选采用正交设计方法并使用L9（3^4）正交表安排试验,优选出冷冻保存效果最佳的稀释液配方,再用较好的稀释液进行比较试验,得出最理想的冷冻稀释液。对要进行试验的稀释液,试验时先将同一头BMY牛精液分成九等分,依次标记为1-9号,然后在精液中分别加入等量的对应编号的冷冻稀释液,进行稀释冷冻效果的比较。[结果]B糖不同水平之间的差异极显著（P〈0.01）,B1与B3的差异极显著,与B2的差异不显著,B2与B3的差异不明显;最佳的组合是A2B1C1。添加不同种氨基酸和水平的稀释液BMY牛精液冻精解冻效果均无明显差异（P〉0.05）,添加不同氨基酸和水平的稀释液稀释BMY牛原精的效果亦无明显差异。