抗人纤维蛋白单链抗体-链亲和素融合蛋白的稳定性及对动物纤维蛋白的识别

目的：探索抗人纤维蛋白单链抗体链亲合素融合蛋白的应用前景。方法：构建抗人纤维蛋白单链抗体ｓｃＦｖ８Ｅ５基因与链亲和素基因的重组表达载体ｐＳＴＥ２８Ｅ５ ，表达的融合蛋白可特异性识别人纤维蛋白，同时有生物素的结合位点。转化ＪＭ１０９ 后用ＩＰＴＧ 诱导表达，ＥＬＩＳＡ 观察融合蛋白的稳定性。结果：抗人纤维蛋白单链抗体链亲合素融合蛋白稳定性好，可耐受至少２ ｗ ，４ ℃保存、数次反复冻融或一定时间的３７ ℃孵育。它能与大鼠和豚鼠的纤维蛋白结合，而与猪纤维蛋白反应不明显。结论：抗人纤维蛋白单链抗体链亲和素融合蛋白适用于大鼠或豚鼠血栓病模型，是临床前研究的有用材料。

单链抗体分子与链亲和素融合蛋白的制备<英文>

研究了抗人纤维蛋白单链抗体分子scFV-8E5与链亲和素融合蛋白的制备。链亲和素拼接在scFV-8E5 cDNA的3’端,制备的融合蛋白单体分子量约45kD。表达产物少数为周质间可溶型蛋白,多数为包涵体。无论是可溶型的蛋白产物或从包涵体中回收并复性的蛋白产物均有结合人纤维蛋白和生物素的功能。这个双特异性融合蛋白的成功制备证明了在scFV-8E5的3’端拼接其它效应分子的可行性。

人源化抗人纤维蛋白单链抗体-链亲和素融合蛋白的表达和功能

目的 探索人源化抗人纤维蛋白单链抗体 链亲和素融合蛋白的表达和功能。方法 构建人源化抗人纤维蛋白单链抗体 (ScFv 8E5 )基因与链亲和素基因的重组表达载体 ,制备融合蛋白 ,ELISA观察其稳定性、与人及不同动物纤维蛋白的反应。结果 人源化融合蛋白可特异性识别人、大鼠、豚鼠纤维蛋白 ,同时有生物素的结合位点 ,且稳定性好 ,可耐受至少两周 4℃保存 ,数次反复冻融或一定时间的 37℃孵育。结论 此人源化融合蛋白适用于大鼠及豚鼠血栓病模型 ,是作临床前研究的有用材料。