esat6基因表达载体的构建及其在戈登链球菌中的表达

为了构建结核分枝杆菌(MTb)esat6基因表达载体并在戈登链球菌GP251中进行分泌表达,以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板扩增esat6基因,将esat6基因TA克隆到pMD18-T,构建pMD18-esat6重组载体。酶切消化pMD18-esat6,将esat6基因亚克隆到质粒PSMB104,生成PSMB104-esat6重组载体,用于转化感受态戈登链球菌表达菌株GP251。用Tricine-SDS-PAGE和Western印迹检测esat6蛋白的表达,并用ELISA技术检测该蛋白的分泌表达量。结果表明,酶切、PCR、测序及蛋白表达测定证实esat6基因表达载体构建成功,转化戈登链球菌表达菌株GP251后可分泌表达出相对分子质量约10kD的esat6蛋白,Western印迹证明蛋白有较好的免疫原性。esat6基因表达载体的成功构建并能在戈登链球菌GP251中进行分泌表达,为研究esat6的免疫原性奠定了一定的基础。