肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物耐药机制的研究

目的调查烟台地区肺炎链球菌对抗菌药物的敏感性,研究烟台地区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物耐药机制。方法收集社区和临床分离的肺炎链球菌,根据美国临床实验室标准化研究所/美国临床实验室标准化委员会(CLSI/NCCLS)的推荐,用K-B法、Etest法检测肺炎链球菌对青霉素等11种抗菌药物的耐药性及对大环内酯类抗菌药物的耐药表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因ermB和mefE基因。结果42株肺炎链球菌中25株对青霉素低度耐药(65.0%),无对青霉素高度耐药株;肺炎链球菌对大环内酯类和克林霉素表现出极高的耐药率,对红霉素和克林霉素耐药率为98.0%和93.0%;42株肺炎链球菌中40株检测到ermB基因、1株检测到mefE基因,其中9株菌同时检测到ermB和mefE基因。结论烟台地区对青霉素不敏感肺炎链球菌检出率高;对红霉素和克林霉素近乎全部耐药,ermB基因介导的靶位改变是烟台地区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物的主要耐药机制。

广州地区ermB和mefE基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌及其耐药性分析

目的 了解广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌中ermB及mefE基因分布 ,比较ermB基因与mefE基因对红霉素耐药的肺炎链球菌的耐药性。方法 用克林霉素纸片法检测 199株对红霉素耐药的肺炎链球菌 ,并用浓度梯度法检测其耐药性。结果 199株对红霉素耐药的肺炎链球菌中 ,ermB、mefE基因介导的耐药率分别为 70 9% (14 1/199)和 2 9 1% (5 8/199)。 14 1株ermB基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌 ,对青霉素 (MIC50 0 19μg/ml、MIC90 1 5 μg/ml)、阿莫西林 /克拉维酸 (MIC500 19μg/ml、MIC90 1 0 μg /ml)、头孢曲松 (MIC50 0 19μg/ml、MIC90 0 75 μg/ml)、头孢呋辛 (MIC50 0 38μg/ml、MIC90 2 0 μg/ml)、头孢克洛 (MIC50 2 0 μg/ml、MIC90 32 0 μg/ml)的不敏感率分别为 5 8 2 %、0 7%、2 1 3%、4 6 1%和 5 1 1%。5 8株mefE基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌 ,对青霉素 (MIC50 0 5 μg/ml、MIC901 5 μg/ml)、阿莫西林 /克拉维酸 (MIC50 0 38μg/ml、MIC90 1 0 μg/ml)、头孢曲松 (MIC50 0 38μg/ml、MIC900 75 μg/ml)、头孢呋辛 (MIC50 1 0 μg/ml、MIC90 3 0 μg/ml)、头孢克洛 (MIC50 6 0 μg/ml、MIC90 4 8 0 μg/ml)的不敏感率分别为 6 7 2 %、0、19 0 %、5 8 6 %和 6 2 1%。?

肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药情况及耐药基因研究

目的调查上海地区肺炎链球菌对红霉素的敏感度,研究肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制。方法对中山医院57株临床分离肺炎链球菌进行红霉素药敏试验;应用聚合酶链反应(PCR)技术对上海4所医院中分离的53株红霉素耐药肺炎链球菌检测耐药基因(ermB,mefA,mefE)。结果57株肺炎链球菌中12株(21.0%)敏感,3株(5.3%)中介,42株(73.7%)耐药。53株红霉素耐药肺炎链球菌中,ermB基因、mefE基因、mefA基因分别在51株(96.2%)、22株(41.5%)和1株(1.9%)中检测到。其中21株(39.6%)同时检测到ermB基因和mefE基因,1株(1.9%)同时检测到ermB基因和mefA基因,1株(1.9%)未检测到ermB基因、mefE基因或mefA基因。结论上海地区肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药率较高。ErmB介导的靶位改变是最常见的耐药机制,mef(特别是mefE)介导外排机制引起者也较常见。

肺炎链球菌ciaH/R基因重组表达及CiaH/R与β-内酰胺类耐药相关性

目的:构建肺炎链球菌ciaH和ciaR基因的原核表达系统,探讨CiaH和CiaR封闭后细菌耐药性变化。方法:采用PCR扩增全长ciaH和ciaR基因,以常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rCiaH和rCiaR表达量。制备rCiaH和rCiaR兔抗血清及其IgG。检测IgG胞外或胞内封闭肺炎链球菌菌株CiaH和CiaR后,细菌对青霉素和头孢噻肟耐药性的变化。结果:与报道序列比较,所克隆的ciaH和ciaR基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.9%～100%和100%。所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-ciaH和E.coli BL21DE3pET42a-ciaR能高效表达目的重组蛋白rCiaH和rCiaR,其产量分别高达细菌总蛋白的33%和45%。rCiaH、rCiaR抗血清及其IgG免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶1、1∶1。CiaH-IgG胞外或胞内封闭CiaH、CiaR-IgG胞内封闭CiaR后,青霉素及头孢噻肟敏感菌株可出现对两种抗生素的耐药性,但对耐药菌株耐药性无明显影响。结论:成功地构建了肺炎链球菌ciaH/ciaR基因原核表达系统,为深入研究该TCS与耐药性关系奠定了基础。CiaH和CiaR均与肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟耐药性有关。

肺炎链球菌comD/E/C基因重组表达及ComD/C与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性

目的：构建肺炎链球菌调控感受态形成的二元信号传导系统（TCS）基因comD/comE/comC的原核表达系统,探讨ComD和ComC封闭后细菌耐药性变化。方法：采用PCR扩增全长comD、comE和comC基因,并用常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组蛋白rComD、rComE和rComC表达量。免疫家兔制备rComD、rComE和rComC抗血清。检测肺炎链球菌菌株ComD和ComC被抗血清封闭后对青霉素和头孢胺噻耐药性的变化。结果：与报道序列比较,所克隆的comD、comE和comC基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.4%-99.3%和99.1%-100%。所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-comD、E.coliBL21DE3pET42a-comE和E.coli BL21DE3pET32a-comC能有效表达目的重组蛋白rComD、rComE和rComC,其产量分别为细菌总蛋白的28%、25%和35%。rComD、rComE和rComC抗血清免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶8。ComD和/或ComC被抗血清封闭后,头孢胺噻敏感菌株可出现耐药性,但耐药菌株耐药性无明显改变,也不影响各菌株对青霉素的耐药性。结论：本研究成功地构建了肺炎链球菌comD/come/comC基因原核表达系统,为深入研究感受态形成相关TCS与耐药性关系奠定了基础。ComD和ComC与肺炎链球菌对头孢胺噻耐药性有关。

某地区部分医院肺炎链球菌对红霉素的耐药性与基因分析

目的了解某地区临床分离的肺炎链球菌(SPN)对红霉素的耐药基因流行情况及与耐药表型的关系。方法采用微量琼脂稀释法,对2008年1月至2009年12月某地区部分医院临床分离到的98株SPN对红霉素的耐药状况进行分析,并用PCR法检测与红霉素耐药基因的关系。结果 98株SPN对红霉素的药敏结果显示,耐药87株,中敏2株,敏感9株;在红霉素耐药菌株中,含有ermB基因70株,含有Mef基因18株,含有ermA基因9株。9株红霉素敏感SPN均未检出ermB基因。结论 ermB基因表达是SPN对红霉素耐药的主要原因,并同时使克林霉素耐药。红霉素已不是治疗SPN的有效药物。

肺炎链球菌耐药性和TEM基因的研究

目的 :分析肺炎链球菌感染的耐药及其机制 ,以有效的指导临床进行合理的治疗与用药。方法 :对 2 0 0 3年 7月 1日至 2 0 0 3年 12月 31日就诊于儿童医院的上呼吸道感染儿童 ,进行的咽拭子培养 ,对分离出的肺炎链球菌 ,再进行耐药性方面的检测 ,用套式 PCR对 TEM基因进行检测。结果 :32例标本中对青霉素敏感的为 16 6 % ,安灭菌31% ,头孢呋肟 91% ,头孢噻肟 88% ,菌必治 94 % ,红霉素 34% ,复方新诺明 4 4 % ,氯霉素 97% ,万古霉素 10 0 % ,环丙沙星 91% ,克林霉素 2 5 % ,阿奇霉素 31% ,同时对其中 2 0例标本的 TEM基因进行检测 ,其阳性率为 5 0 %。含有 TEM基因的肺炎链球菌 ,其对β-内酰胺类药物中的青霉素耐药性较强 ,耐药率达到 90 % (9/ 10 ) ;TEM基因阴性的标本 ,其对β-内酰胺类药物的青霉素耐药性就比较弱 ,敏感率为 90 % (9/ 10 ) ,中介率 10 % (1/ 10 )

儿童肺炎链球菌对三种抗菌药物的耐药性及相关耐药基因的研究

目的了解南昌地区儿童肺炎链球菌(streptococus pnenurmoniae,SP)对青霉素、红霉素、四环素耐药状况。方法对呼吸道、血液标本、脑脊液标本中分离的31株SP进行青霉素、头孢噻肟E-test药敏试验及青霉素、红霉素和四环素耐药相关的PBP2B、ermB、ermA/B/C、mefA和Term基因PCR检测。结果①PBP2B基因突变30株,均为点突变,PBP2B同源性在80～85%之间。另有1株对青霉素敏感无突变;②含ermA/B/C耐药基因24株,含mefA耐药基因26株,含有erm或mefA耐药基因30株。结论PBP2B基因突变在对青霉素耐药的同时也对三代头孢表现为不同程度的耐药,SP的耐药性已严重影响青霉素,红霉素,四环素的疗效。

肺炎链球菌耐药性检测及其对大环内酯类抗生素耐药机制的研究

目的了解浙江地区肺炎链球菌临床菌株对临床常用抗生素耐药性以及肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制。方法从浙江省不同地区病人临床标本中分离并鉴定肺炎链球菌138株。采用K-B纸片法和E-test检测上述肺炎链球菌临床菌株对9种抗生素的敏感性。采用PCR检测上述菌株中与大环内酯类抗生素耐药性密切相关的ermB和mefE基因携带情况。分析ermB和mefE基因携带、分布状况与红霉素耐药性关系。结果138株肺炎链球菌临床菌株中,对红霉素耐药率高达93.5%（129/138）,对头孢噻肟、头孢呋辛、阿莫西林和左氧氟沙星的耐药率较低（2.9%-4.3%）。上述菌株er-mB基因检测阳性率（91.3%,126/138）明显高于mefE基因（33.3%,46/138）（P〈0.05）,其中27.5%菌株（38/138）同时携带。不携带ermB和mefE基因菌株均对红霉素敏感,仅携带mefE基因菌株对红霉素耐药率（62.5%）明显低于同时携带两种基因菌株耐药率（100%）及仅携带ermB基因菌株耐药率（97.7%）（P〈0.05）。结论红霉素已不适合作为治疗肺炎链球菌感染性疾病的药物。ermB基因是肺炎链球菌临床菌株携带的红霉素耐药相关优势基因。ermB基因可使肺炎链球菌产生较mefE基因更强的红霉素耐药性。

学龄前儿童肺炎链球菌耐药性及大环内酯类耐药基因分析

目的:了解学龄前儿童肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)的耐药性及大环内酯类耐药基因分布。方法:选取60株Sp,采用E-test法检测菌株对青霉素、阿莫西林、头孢噻肟、头孢曲松的最低抑菌浓度;纸片扩散法检测Sp对红霉素、克林霉素、复方新诺明、四环素、氯霉素、左氧氟沙星、万古霉素、利奈唑胺的药物敏感性;PCR检测大环内酯类耐药基因ermB、mefA和mefE的检出率。患儿按年龄分为0~12个月组、13~36个月组和37~60个月组,比较各组抗菌药物不敏感率和耐药基因检出率。结果:药敏试验结果显示,60株Sp对红霉素、四环素和复方新诺明的耐药率较高,分别为95.00%,93.30%,61.07%;Sp对万古霉素、厄他培南、利耐唑胺和泰利霉素均敏感,敏感率为100.00%。0~12个月组儿童对头孢噻肟、头孢曲松、青霉素G、阿莫西林、红霉素、美洛培南不敏感率均高于13~36个月组和37~60个月组,其中3组头孢噻肟、头孢曲松不敏感率差异有统计学意义(P<0.05),36~60个月组儿童对复方新诺明、氧氟沙星、四环素不敏感率最高。PCR结果显示,大环内酯类耐药基因ermB检出率最高(98.33%),mefA和ermB+mefA测出率均为78.33%,mefE和ermB+mefE检出率均为60.00%,ermB+mefA+mefE检出率最低(46.67%)。mefE和ermB+mefE在0~12个月组、13~36个月组、37~60个月组检出率逐渐降低(P<0.05)。结论:学龄前儿童Sp对大环内酯类耐药率较高,ermB耐药基因为Sp对大环内酯类抗生素耐药的主要基因型。

肺炎链球菌对大环内酯类耐药性分析

目的探索郯城县区肺炎链球菌分离株对大环内酯类耐药性及其治疗情况。方法收集郯城县社区和临床分离的肺炎链球菌,根据CLSI标准,用K-B法、Etest法检测肺炎链球菌对红霉素和克林霉素的耐药性及对红霉素的耐药表型。结果 493株肺炎链球菌中红霉素不敏感菌株489株,对克林霉素不敏感菌株482株,其中ermB基因介导的红霉素耐药菌株482株,占98.6%,mefE基因介导的红霉素耐药菌株7株,占1.4%。结论郯城县区对红霉素和克林霉素近乎全部耐药,ermB基因介导的靶位改变是郯城县区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物的主要耐药机制。

儿童肺炎链球菌分离株青霉素、红霉素耐药性与耐药相关基因研究

目的了解苏州地区儿童肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,Sp)临床分离株青霉素、红霉素耐药的状况。方法对呼吸道感染患儿痰标本中分离到的26株Sp进行青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、红霉素E test药敏试验,和与青霉素、红霉素耐药相关的pbp2B、ermB、ermA/B、mefA基因PCR检测,测得pbp2B基因产物进行测序并与SpR6株(青霉素敏感株,登录号:NC003098)序列比较。结果(1)pbp2B基因突变15株(58%),均为点突变,突变类型有A型11株(73%)、B型2株(13%)、C型1株(7%)、D型1株(7%);(2)11株无突变菌中青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟敏感株分别为9株(82%)、10株(91%)、11株(100%)、11株(100%);15株突变菌中青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟不敏感株分别为13株(87%)、11株(73%)、1株(7%)、1株(7%);11株A型突变株对青霉素均不敏感,10株对二代头孢不敏感;(3)ermB基因阳性9株(35%)、ermA/B基因阳性16株(62%)、mefA基因阳性7株(27%)、erm或(和)mef基因阳性21株(81%);(4)erm或(和)mef基因阳性株红霉素最低抑菌浓度为2～>256mg/L。结论pbp2B基因突变是本地区Sp青霉素耐药机制的主要遗传学基础之一;突变株中,A类突变率最高,表现对青霉素、二代头孢不敏感;ermA、ermB和mefA3种红霉素耐药基因单独或共同表达?

肺炎链球菌毒力基因检测与临床研究

目的了解肺炎链球菌10种常见毒力基因(pspA、pspC、lytA、lytB、rrgA、nanA、pav、iga、ply、hysA)在临床分离菌株中的分布,为研究其在致病过程中的作用机制、新型疫苗研制提供参考。方法选取2013年1月-2014年12月从南京医科大学附属无锡人民医院临床分离的20株肺炎链球菌为研究菌株,采用PCR法对10种靶基因进行检测,统计并分析各毒力基因表达阳性率及其与细菌耐药性之间的关系,数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果 10种毒力基因在20株肺炎链球菌中表达阳性率分别为0、0、45.0%、60.0%、35.0%、60.0%、75.0%、80.0%、55.0%及55.0%,其中pav、iga阳性率对较高;红霉素耐药菌株中rrgA及pav的阳性率分别为64.5%、100.0%,显著高于非耐药菌株(P<0.05)。结论 10种毒力基因在肺炎链球菌中有不同程度的表达,其中pav、iga阳性率较高,可能成为新型疫苗的候选分子;rrgA及pav可能与肺炎链球菌对红霉素耐药有关。

儿童呼吸道感染肺炎链球菌耐药性及pbp2B与TEM基因的研究

目的了解广州地区儿童呼吸道感染肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,SP）的耐药情况以及SP中青霉素耐药相关基因TEM与pbp2B的流行分布及突变情况。方法采用E-test和K-B纸片法对44株SP分离株进行药敏试验;PCR扩增SP中的TEM基因及pbp2B,并对pbp2B基因进行测序,结果与SP青霉素敏感株R6进行序列比对分析。结果44株SP对青霉素的敏感率仅为11.4%,不敏感率高达88.6%。对红霉素耐药率已达100%,对克林霉素、复方新诺明的耐药性也在90%以上。但对头孢曲松、阿莫西林、亚胺培南仍敏感,耐药率分别为0,2.6%和3.9%。未发现对氧氟沙星、万古霉素耐药菌株。②44株SP的pbp2B基因扩增序列与R6敏感株相比较,5株青霉素敏感株99%以上的核苷酸序列相同,未发生氨基酸的替换。39株青霉素不敏感株均发生核苷酸序列的改变,核苷酸序列突变率为13.2%～23.1%,约6.5%～10.9%的氨基酸发生了替换。根据氨基酸在Ser391-Thr492片段之间的突变情况,可将39株青霉素不敏感株分为四型,其中Ⅰ型突变30株,Ⅱ型突变7株,Ⅲ型和Ⅳ型各1株。44株sP均未检出TEM型β－内酰胺酶耐药基因。结论广州地区儿童呼吸道感染SP多重耐药情况较严重，青霉素、红霉素已不适宜作为SP感染的临床一线用药，阿莫西林及第三代头孢菌素可作为SP感染的经验用药。pbp2B基因突变是广州地区儿童SP对青霉素耐药的主要机制之一。

红霉素耐药肺炎链球菌基因分布及耐药性分析

目的了解广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌中ermB及mefE基因的分布,比较ermB基因与mefE基因对红霉素耐药的肺炎链球菌的耐药性。方法2001—2004于广州市儿童医院用克林霉素纸片法检测239株对红霉素耐药的肺炎链球菌,并用浓度梯度法检测其耐药性。结果239株对红霉素耐药的肺炎链球菌中,ermB、mefE基因介导的耐药率分别为70·3%(168/239)和29·7%(71/239)。168株ermB基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌,对青霉素(MIC500·19μg/mL、MIC901·5μg/mL)、阿莫西林/克拉维酸(MIC500·19μg/mL、MIC901·0μg/mL)、头孢曲松(MIC500·19μg/mL、MIC900·75μg/mL)、头孢呋辛(MIC500·38μg/mL、MIC902·0μg/mL)、头孢克洛(MIC502·0μg/mL、MIC9032·0μg/mL)的不敏感率分别为58·4%、1·2%、20·8%、46·5%和51·7%。71株mefE基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌,对青霉素(MIC500·5μg/mL、MIC901·5μg/mL)、阿莫西林/克拉维酸(MIC500·38μg/mL、MIC901·0μg/mL)、头孢曲松(MIC500·38μg/mL、MIC900·75μg/mL)、头孢呋辛(MIC501·0μg/mL、MIC903·0μg/mL)、头孢克洛(MIC506·0μg/mL、MIC9048·0μg/mL)的不敏感率分别为67·6%、0、19·7%、59·2%和61·9%。结论广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌其耐药机制以ermB基因介导为主;ermB基因介导的红霉素耐药性高于mefE基因介导的耐药性;ermB和mefE基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌对β-内酰胺类药物存在不同程度的耐药。

肺炎链球菌StkP激酶与β-内酰胺类抗生素结合能力及耐药相关性分析

目的 确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力.方法 采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除（ΔstkP）突变株.采用E-test检测青霉素（PCN）和头孢噻肟（CTX）对Δstkp突变株及其野生株的最低抑菌浓度（MIC）.采用生物信息学软件确定肺炎链球菌ATCC6306株丝氨酸/苏氨酸激酶编码基因（stkP）胞外区（EC-StkP）、构建EC-StkP三维空间结构模型、分析EC-StkP结构与功能关系.采用PCR扩增stkP基因胞外区片段（EC-stkP）,T-A克隆后测序.构建EC-stkP原核表达系统,SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组蛋白（EC-rStkP）表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯EC-rStkP.采用等温滴定量热法（VT-ITC）和表面等离子共振法（Biacore）检测EC-rStkP与PCN和CTX结合能力.结果 肺炎链球菌ATCC6306株对PCN和CTX敏感（MIC=0.06和0.12 μg/ml）,但ΔstkP突变株对PCN和CTX高度耐药（MIC=16和32 μg/ml）.肺炎链球菌ATCC6306株StkP C端295 aa片段为胞外区,该胞外区有4个青霉素结合蛋白和丝氨酸/苏氨酸激酶相关（PASTA）功能结构域.克隆的stkP胞外区序列与GenBank中相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%和100%.构建的EC-stkP原核表达系统可表达可溶性EC-rStkP.PCN和CTX均能与EC-rStkP结合,但后者结合EC-rStkP能力强于前者.结论 肺炎链球菌stkP基因与β-内酰胺类抗生素耐药性密切相关,其表达产物丝氨酸/苏氨酸激酶StkP具有识别并结合β-内酰胺类抗生素的能力.

神经内科住院患者感染肺炎链球菌耐药基因分析

目的了解神经内科患者医院感染病原菌分布情况,检测肺炎链球菌的耐药基因,为临床合理用药提供依据。方法收集本院神经内科住院患者创口无菌棉拭子及创口周围标本,进行肺炎链球菌的培养、分离及鉴定;采用K-B法分析肺炎链球菌的耐药性;采用PCR扩增法检测肺炎链球菌的耐药基因分布情况。结果共分离病原菌377株,主要感染类型为革兰阳性菌(占63.13%),其次为革兰阴性菌(占36.87%)。在238株革兰阳性菌中,肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、酿脓链球菌、屎肠球菌以及其他革兰阳性菌的分离率分别为23.87%、14.06%、10.08%、6.90%和8.22%;在139株革兰阴性菌中,肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌以及其他革兰阴性菌的分离率分别为11.94%、9.02%、6.10%、2.92%和6.90%;分析90株肺炎链球菌的耐药性,其对红霉素耐药率为100.00%,对青霉素、四环素、左氧氟沙星的耐药率分别为32.22%、74.44%、16.67%,对万古霉素耐药率为0。PCR检测肺炎链球菌耐药基因erm、tetM、mefA、gyrA和pbp2b基因大小分别为616、406、346、382和682bp。各耐药基因的检出率分别为62.86%、71.88%、30.77%、10.88%和28.91%。结论神经内科感染病原菌以革兰阳性菌为主,其中又以肺炎链球菌居多。肺炎链球菌的tetM基因和erm基因的检出率较高,治疗肺炎链球菌感染应首选万古霉素。

儿童感染侵袭性肺炎链球菌耐药基因和毒力基因携带分析

目的 了解河北省侵袭性肺炎链球菌耐药基因和毒力基因携带情况,为利用全基因测序手段研究耐药机制及致病机理打下基础。方法 对2017—2018年收集从儿童病例分离并保存河北省疾病预防控制中心的75株侵袭性肺炎链球菌,使用普通PCR方法检测侵袭性肺炎链球菌菌株研究报道较多的耐药基因和毒力基因,并分析携带情况。结果 青霉素耐药相关pbp2b基因携带率为0,红霉素耐药相关ermB、ermA和mefA/E基因携带率分别为96.00%、0和33.33%,四环素耐药相关tetM、tetL、tetK和tetO基因分别为94.67%、84.00%、0和0,左氧氟沙星耐药相关gyrA基因97.33%;主要毒力基因携带率自溶酶和神经氨酸酶表达相关基因lytA、lytB、nanA均为100.00%;与菌体侵入机体过程相关的pav、ply、hysA、iga基因分别为97.33%、98.67%、93.33%、96.00%;与细菌粘附相关的rrgA基因为29.33%;肺炎链球菌表面蛋白相关基因pspA与pspC携带率为0%。血清14、19F、6、23F型菌株mefA/E基因携带率较高,携带rrgA基因的株菌中19F型最多(9/22);不携带tetL基因的菌株中6型占33.3%。结论 河北省侵袭性肺炎链球菌携带ermB、tetM和tetL基因及gyrA基因比例较大,应警惕此类菌株对大环内酯类、四环素类、氟喹诺酮类抗生素的耐药性。lytA、lytB基因携带率高应慎用β-内酰胺类抗生素。菌株毒力基因携带率具有地区差异,建议结合临床表现,深入研究并长期监测。

肺炎链球菌pbp1a基因重组原核表达质粒的构建与鉴定

目的构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)pbp1a基因重组的原核表达质粒,并进行鉴定。方法化学合成S.pneumoniae含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后,与pUC19载体连接,构建重组表达质粒pUC19-pbp1a,转化耐青霉素的pbp1a基因突变的S.pneumoniae,测定青霉素对转化菌的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),以鉴定PBP1a的活性;SDS-PAGE和Western blot分析重组PBP1a蛋白的表达。结果 pbp1a基因扩增产物可见约330 bp的特异条带,大小与预期一致,测序表明重组质粒全长360 bp,无碱基的缺失、插入等突变;青霉素对转化菌的MIC从8μg/ml下降为2μg/ml;表达的重组PBP1a蛋白相对分子质量约为11 000,可与抗S.pneumoniae青霉素敏感株兔血清特异性结合。结论成功构建了S.pneumoniae pbp1a基因重组原核表达质粒,其能在S.pneumoniae中表达有活性的PBP1a蛋白,为进一步研究PBPs在细菌耐药变异中的作用提供了实验材料,也为进一步探讨消除细菌耐药性变异的措施奠定了基础。

成人重症肺炎的肺炎链球菌血清型及耐药性分析

目的探讨ICU内重症肺炎患者痰及支气管灌洗液中肺炎链球菌的常见血清型及耐药性。方法 2019年8月-11月收集本院ICU内机械通气重症肺炎患者的痰液和支气管镜冲洗液,分离培养肺炎链球菌。荚膜肿胀试验确定肺炎链球菌的血清型;纸片扩散法和E-test法检测肺炎链球菌对抗生素的敏感性;PCR检测mef A和erm B基因。结果 164份样本中分离出104株肺炎链球菌,主要血清型为19F(26株,25.0%)、6A(22株,21.2%)。肺炎链球菌对青霉素和头孢菌素的敏感率分别为83.7%、77.9%~85.6%,对亚胺培南、万古霉素和利奈唑胺敏感,分别为93.3%、90.4%和94.2%,对青霉素的耐药率为9.6%,对红霉素和阿奇霉素的耐药率分别高达90.4%、84.4%。mef A和erm B耐药基因携带率分别为65.4%和87.5%。结论 ICU内社区获得性重症肺炎患者肺炎链球菌毒力强,对大环内酯类药物耐药率高。抗性基因主要是erm B。因此,大环内酯类不适合经验性治疗重症肺炎。临床医生应根据药敏试验和患者病情合理使用抗生素。