SS2人源分离株ZYH24EF的表达纯化及其单克隆抗体的制备

目的建立猪链球菌2型(SS2)胞外因子(EF)的免疫学检测方法。方法将SS2四川人源分离株ZYH24EF抗原性强的区域进行克隆、原核表达,对表达的融合蛋白(rEF-GST)采用亲和层析法纯化、经凝血酶作用去除标签蛋白获得纯化的EF目的蛋白。以纯化的EF免疫BALB/c小鼠,间接ELISA方法筛选阳性克隆,对获得的抗EF单克隆抗体(McAbs)进行特异性分析,并建立猪链球菌EF检测方法。结果得到rEF-GST和EF相对分子量分别为62000和35000;建立了4株稳定分泌抗EFMcAbs的杂交瘤细胞系2G1、5H7、3H4和1F2;腹水的特异性鉴定结果表明4株McAbs能特异性的识别EF;以2G1单抗腹水和抗EF多克隆抗血清建立的夹心ELISA可特异地检测EF。结论4株抗EFMcAbs的制备对猪链球菌检测试剂盒的研制以及该病的防治有重要意义。

A族链球菌表面蛋白FbaA单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能研究

目的通过侵袭抑制及攻毒试验检测A族链球菌表面蛋白FbaA的单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能，为进一步探索A族链球菌的致病机制和感染后的治疗策略奠定基础。方法通过亚克隆、全菌ELISA方法筛选稳定分泌高效价FbaAmAb2的杂交瘤细胞，并将其接种于小鼠腹腔制备腹水。通过侵袭试验对FbaAmAb2能否阻止H因子与A族链球菌的结合进行研究。而后将获得的腹水倍比稀释为1：1、1：2、1：4、1：8、1：16行试管凝集试验，选定合适的稀释度被动免疫动物后用致死量A族链球菌（FbaA’）标准菌株（7．5×10’个）攻击，连续观察15d计算保护率。结果侵袭试验中FbaAmAb2能够竞争性抑制H因子与A族链球菌表面蛋白FbaA的结合，减少了H因子介导的A族链球菌侵入上皮细胞的数量。与全菌结合的ELISA效价为1：1600，试管凝集效价为1：8。在单抗被动免疫试验中，腹水原液、1：2稀释组的动物保护率高达66．67％，1：4稀释组保护率为50％，经SPSSl0．0统计软件分析各实验组与PBS组保护率差异有统计学意义（P〈0．05）。结论FbaAmAb2有望用于紧急预防及治疗A族链球菌感染，并为深入研究A族链球菌的致病机制、治疗策略及疫苗预防方面提供新的靶标。

肿瘤坏死因子单克隆抗体对小鼠肺炎链球菌感染的影响

给小鼠吸人肺炎链球菌同时在尾静脉注射肿瘤坏死因子单克隆抗体，动态检测感染后２１小时内血浆、气管肺泡灌洗液肿瘤坏死因子含量和肺病理的变化，发现肿瘤坏死因子单克隆抗体显著抑制血浆、气管肺泡灌洗液肿瘤坏死因子的升高，抑制白细胞聚集、附壁，减轻白细胞对肺组织的浸润，阻止肺实变的发生。肺炎链球菌及其产物可诱发肿瘤坏死因子释放，肿瘤坏死因子可能是肺炎链球菌感染组织损伤的主要介质。