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猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定
被引量:
17
1
作者
赵华梅
潘秀珍
+3 位作者
王长军
郭恒彬
李先富
唐家琪
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期22-25,共4页
目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层...
目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层析纯化,获得融合蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性。结果PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;体外构建筛选原核表达质粒pGEX4T-2-gdh,诱导重组体,表达的蛋白经PAGE初步测定其相对分子质量(Mr)约为71×103;用凝血酶酶切去除融合蛋白中的GST标签后得到的蛋白相对分子质量为45×103;GDH活性测定显示猪链球菌GDH利用α-酮戊二酸做底物,用NADPH做辅酶催化氨的同化和谷氨酸的合成。结论克隆并表达出猪链球菌GDH;猪链球菌GDH属于GDH蛋白家族I,是NADP(H)-特异性GDH。
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关键词
猪链球菌2型
谷氨酸脱氢酶
gdh
家族I
NADP(
h
)一特异性
gdh
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职称材料
题名
猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定
被引量:
17
1
作者
赵华梅
潘秀珍
王长军
郭恒彬
李先富
唐家琪
机构
南京师范大学生命科学学院
南京军区军事医学研究所流行病研究室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期22-25,共4页
基金
"十五"国家科技攻关计划"新发传染病的防治技术研究与应用"项目资助(2003BA712A03-05)
文摘
目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层析纯化,获得融合蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性。结果PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;体外构建筛选原核表达质粒pGEX4T-2-gdh,诱导重组体,表达的蛋白经PAGE初步测定其相对分子质量(Mr)约为71×103;用凝血酶酶切去除融合蛋白中的GST标签后得到的蛋白相对分子质量为45×103;GDH活性测定显示猪链球菌GDH利用α-酮戊二酸做底物,用NADPH做辅酶催化氨的同化和谷氨酸的合成。结论克隆并表达出猪链球菌GDH;猪链球菌GDH属于GDH蛋白家族I,是NADP(H)-特异性GDH。
关键词
猪链球菌2型
谷氨酸脱氢酶
gdh
家族I
NADP(
h
)一特异性
gdh
Keywords
streptococcus suis h
,
gdh
,
gdh family i
,
nadp-dependent gdh
分类号
R373.2 [医药卫生—病原生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定
赵华梅
潘秀珍
王长军
郭恒彬
李先富
唐家琪
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
17
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