过表达HDAC1通过诱导SP1去乙酰化改善类固醇诱导的小鼠 骨细胞凋亡

目的探究组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)通过特异性蛋白1(SP1)调控激素性股骨头坏死(SONFH)的作用机制。方法将小鼠骨样细胞MLY-O4分为对照组、曲古抑菌素(TSA)组、类固醇组、类固醇+oe-NC组、类固醇+oe-HDAC1组、oe-NC组、oe-HDAC1组。对照组细胞正常培养,不接受试剂诱导及细胞转染;TSA组细胞接受400 nmol/L TSA处理24 h;类固醇组接受1μmol/L地塞米松诱导24 h;类固醇+oe-NC组或类固醇+oe-HDAC1组接受oe-NC或oe-HDAC1转染,通过LipoHigh脂质体高效转染试剂行细胞转染,转染48 h后进行类固醇诱导。oe-NC组或oe-HDAC1组接受oe-NC或oe-HDAC1转染。观察各组细胞在HDAC、HDAC1蛋白、SP1蛋白、凋亡相关蛋白(裂解capase-3及Bax)、乙酰化水平、细胞增殖、细胞凋亡方面的差异,采用通过免疫共沉淀验证HDAC1与SP1的相互作用。结果类固醇组与对照组相比细胞凋亡率升高,HDAC1下调,裂解caspase-3及Bax上调,细胞增殖显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。TSA组、类固醇组与对照组相比,乙酰化水平显著升高,SP1蛋白显著上调,类固醇+oc-HDAC1组与类固醇+oe-NC组相比,乙酰化水平降低,HDAC1上调,SP1、裂解caspase-3、Bax下调,细胞增殖增强,细胞凋亡降低(P<0.05)。oe-NC组及oe-HDAC1组Input样本存在HDAC1蛋白条带,表明两组样本均可表达HDAC1,两组IgG抗体上并未检测出HDAC1蛋白,而两组SP1抗体上均存在HDAC1,表明HDAC1可与SP1相互作用。结论HDAC1通过介导去乙酰化修饰抑制SP1表达,从而抑制类固醇诱导的骨细胞凋亡,并促进骨细胞增殖。

柽柳根际土壤链霉菌Streptomyces sp.TRM76323基因簇分析及代谢产物分离

目的利用链霉菌Streptomyces sp.TRM76323的基因组序列信息,分析其次级代谢产物生物合成基因簇并预测其代谢产物,为发现潜在新抗生素奠定基础。方法采用Illumina Novaseq对TRM76323菌株进行全基因组测序,结合antiSMASH、CARD、OrthoFinder、Peppan软件进行基因组分析,进行代谢潜力、抗性基因和基因组差异预测,为指导新的微生物来源的天然产物的发现提供重要的理论指导,并利用现代分离技术获得代谢产物。结果TRM76323菌株的基因组序列由7,338,911 bp组成,G+C含量为72.1%,共31个生物合成基因簇,有糖肽类耐药等抗性基因、分离获得化合物β-羰基-1H-吲哚-3-丙醛、环二肽和邻苯二甲酸二丁酯。结论柽柳根际土壤链霉菌Streptomyces sp.TRM76323有丰富的次级代谢产物生物合成基因簇,能产生多种次级代谢产物,具有进一步发掘新抗生素的价值。

链霉菌Streptomyces sp.P325的化学成分研究

对Streptomyces sp.P325的化学成分进行研究。采用正相硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱、凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱等分离技术对Streptomyces sp.P325发酵产物的乙酸乙酯萃取部分进行分离纯化。从中共分离得到6个化合物,通过波谱数据分析和文献比对鉴定其结构,其中包括2个新化合物:四羟基十八碳二酸I(1)和四羟基十六碳二酸I(2),以及4个已知化合物:iso-frenolicin B(3)、(R)-7-acetyl-3,6-dihydroxy-8-propyl-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one(4)、对羟基苯甲酸甲酯(5)和isonicotinaldehyde(6)。对分离得到的化合物1~6进行细胞毒活性评价。结果显示,化合物3对HepG2细胞系表现出显著的抑制活性(IC50为13.11μmol/L),对HeLa细胞的抑制活性为中等(IC50为25.04μmol/L)。

金枪鱼共附生菌Streptomyces sp.TUN21的次级代谢产物研究

海洋动物共附生微生物次级代谢产物是海洋药物的重要来源。该文从金枪鱼共附生菌Streptomyces sp.TUN21的次级代谢产物中分离得到3个化合物,分别为campechic acid B(1),5-(3’-aminophenyl)-2,4-pentadienoic acid(2)和benzenemethanol(3)。其中化合物1对PC-3和HCT-116的抑制活性的IC_(50)值分别为(1.3±0.2)μmol和(0.64±0.1)μmol,而化合物2是首次从该属中分离得到的天然产物。化合物1~3在50μg/mL的浓度下对耐甲氧金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌无抑制活性。

海洋链霉菌Streptomyces sporoverrucosus 33510次级代谢产物研究

为获得具有较好抑制植物病原菌活性的化合物,对一株海洋链霉菌Streptomyces sporoverrucosus 33510的化学成分及活性进行了研究。使用高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)、半制备液相色谱(semi-pre HPLC)、柱色谱(colume chromatography, CC)、薄层色谱(thin layer chromatography, TLC)和重结晶等分析及分离技术对该菌株的发酵产物进行了分离纯化。采用核磁共振(nuclear megnetic resonance,NMR)、质谱(mass spectra,MS)、旋光(optical rotatory dispersion,ORD)等波谱学方法对得到的化合物进行结构鉴定。通过滤纸片法对化合物进行抑菌活性检测。从33510菌株的发酵产物中共分离得到10个化合物,分别为:cyclo(D-Pro-D-Leu)(1)、bisphenol A (2)、methylp-hydroxyphenylacetate (3)、N-phenethylacetamide(4)、3-indole-methylethanoate(5)、dibutyl phthalate(6)、cyclo(D-Pro-L-Leu)(7)、cyclo(D-Pro-L-Ile)(8)、cyclo(L-Pro-L-Phe)(9)和cyclo(L-Leu-L-Val)(10)。除化合物5和9外,其他8个化合物均为首次从该菌种中分离得到。抑菌结果表明,抑菌摩尔浓度为0.19mmol·L-1时,化合物2对板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)的抑制效果为高敏(抑菌直径为20mm)。

SP/NK-1R系统在肝纤维化中作用的研究进展

肝纤维化是各种慢性肝病发展为肝硬化甚至肝癌的必经阶段,抑制或逆转肝纤维化对阻止慢性肝病恶化具有重要意义。P物质/神经激肽受体-1(Substance P/Neurokinin-1 receptor, SP/NK-1R)系统在人类许多病理生理过程中发挥重要的作用,包括炎症、氧化应激和细胞凋亡等。近年来研究表明,SP/NK-1R系统参与肝纤维化的生理和病理调节过程,而NK-1R拮抗剂可抑制纤维化进程,因此阻断SP/NK-1R系统可为临床治疗肝纤维化疾病提供解决方案。文章从肝纤维化、SP/NK-1R系统及其在肝纤维化中发挥的作用、SP/NK-1R系统的药物研究进展等方面展开综述,为靶向SP/NK-1R系统治疗肝纤维化相关研究与诊疗提供理论基础。

海洋真菌Aspergillus sp.SWMU-WZ04-3的次生代谢产物及抗菌活性研究

目的研究海洋真菌Aspergillus sp.SWMU-WZ04-3的次生代谢产物及抗菌活性。方法利用硅胶、凝胶柱色谱、半制备高效液相色谱等现代色谱分析手段对菌株的次级代谢产物进行分离纯化,结合核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance,NMR)、质谱(mass spectrom⁃etry,MS)及文献对比鉴定化合物单体结构,利用纸片扩散法测试其抗菌生物活性。结果从Aspergillus sp.SWMU-WZ04-3的发酵产物中分离得到9个化合物:化合物1为3,4-dimethoxyacetophenone;化合物2为ethyl(2E)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)prop-2-enoate;化合物3为4-methyl-5,6-dihydropyren-2-one;化合物4为3,15-dihydroxyl-(22E,24R)-ergosta-5,8(14),22-trien-7-one;化合物5为9,12-octadecadienoic acid(Z,Z)-2,3-dihydroxypropyl ester;化合物6为1'-Hexadecanoic acid-2',3'-dihydroxy-propyleste;化合物7为2-(4-Hydroxyphenyl)ethyl 2,2-dimethylpropanoate;化合物8为(22E,24R)-麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇;化合物9为β-sitosterol。体外生物活性结果显示,化合物4在1 mg/mL的浓度下对大肠杆菌表现出抑制作用,其余化合物无明显抗菌活性。结论化合物2、5和6为首次从海洋真菌Aspergillus sp.中分离得到,且化合物4具有抗大肠杆菌活性,表明该菌株具有进一步研究的价值。

K_(sp)考点在江苏新高考中的全解析

本文全面分析了K_(sp)(难溶电解质溶度积常数)在江苏新高考化学科目中的考查情况.文章首先介绍了K_(sp)的概念及其在化学平衡中的重要性,随后通过例题详细解析了K_(sp)在高考中的不同考查形式,包括表达式书写、离子浓度大小的计算、离子浓度比值的计算、K_(sp)与K_(a)、K_(w)之间的联系以及K_(sp)与Q之间大小关系的应用.这些例题涵盖了K_(sp)在化学平衡定量分析中的应用,并强调了K_(sp)在理解和预测难溶物质溶解行为中的核心地位.文章最后强调了K_(sp)在化学学习中的重要性,并鼓励学生深入理解K_(sp),以提升解决实际化学问题的能力.

iROOT SP单尖充填法在牙髓炎及根尖周炎根管治疗中的效果

目的:探讨iROOT SP单尖充填法在牙髓炎及根尖周炎根管治疗中的应用效果。方法:选取2022年5月~2023年5月在珠海市第五人民医院接受治疗的100例牙髓炎及根尖周炎患者作为研究病例,分为观察组55例(采用iROOT SP单尖充填法进行根管治疗),对照组45例(采用AH Plus冷牙胶侧压法根管治疗)。比较两组患者在治疗前及治疗后1 d、3 d、7 d进行疼痛视觉模拟评分量表(VAS)评分,根管充填质量和操作时间评估,咀嚼功能评估,临床疗效评估。结果:观察组患者在治疗后的疼痛评分显著低于对照组,根管填充质量优于对照组,根管充填时间低于对照组,咬合力大于对照组,咀嚼效率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访12个月,观察组的临床治疗效果明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者在治疗期间均未发生严重并发症。结论:iROOT SP单尖充填法在牙髓炎及根尖周炎根管治疗中的应用效果显著优于AH Plus冷牙胶侧压法根管治疗,不仅能够有效降低患者的疼痛感,还能提高根管充填的质量和临床治疗效果,改善咀嚼功能,减少临床操作时间,且安全性较高。

海洋放线菌Streptomyces sp. 124092中的细胞毒活性成分

对海洋放线菌Streptomyces sp.发酵液的提取物进行柱层析分离,得到5个化合物.经MS,NMR,^1H-^1HCOSY,HSQC和HMBC等数据鉴定,其结构分别为3-氨基-丙酸对甲苯酯（1）、6-Amino-3-（4-hydroxy-benzyl）-1,4-diazonane-2,5-dione（2）、正丁基-α-D-吡喃甘露糖苷（3）、大豆苷元（4）和1H-3-吲哚甲酸（5）.其中化合物1和2为新化合物,细胞毒活性测试结果表明,化合物1～4对人肝癌细胞（SMMC-7721）具有不同程度的生长抑制活性.

海洋放线菌Streptomyces sp.V5产生的一个新的八元环内酯

海洋放线菌Streptomyces sp.V5分离自南中国海红树根部土壤,从其培养液分离获得一个新的八元环内酯octalactin C(A),以及四个已知化合物2-甲基-3-呋喃甲酸(B)、环(脯-亮)二肽(C)、环(丙-缬)二肽(D)和尿嘧啶(E).通过完整的波谱数据解析了它们的结构.

白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205菌株发酵条件优化及其次生代谢产物性质研究

[目的]为了获得白刺链霉菌（Streptomyces albospinus）CT205菌株摇瓶发酵最佳配方和适宜的发酵条件,并初步研究其次生代谢产物的性质。[方法]通过碳、氮源单因子试验、正交试验和主要发酵条件优化试验,以菌浓度和抑菌圈大小为指标确定其最佳发酵培养基配方和发酵条件。通过GF254薄板层析、生物测定、紫外检测、稳定性试验,研究菌株CT205发酵产生的次生代谢产物性质。[结果]菌株CT205发酵最佳培养基配方：蔗糖20.0g·L^-1,可溶性淀粉30.0g·L^-1,蛋白胨2.0g·L^-1,黄豆粉8.0g·L^-1,MgSO4·7H2O0.5g·L^-1,K2HPO4·7H2O0.5g·L^-1,NaCl2.0g·L^-1,CaCO33.0g·L^-1;最佳发酵温度为28～30℃,初始pH8.0;CT205发酵产生的抗菌活性成分的Rf值为0.68,其在λ=258nm处有1个强紫外吸收峰。在不同温度（60、80和100℃）、紫外光照射不同时间（5、10和30min）处理下,活性成分的抗菌活性与对照相比变化不大,在用酸碱处理后,其抗菌活性比对照略有下降。[结论]获得了菌株CT205优化的发酵培养基配方及适宜的发酵条件,其次生代谢产物对热和紫外光均表现出较强的稳定性,但偏酸、偏碱的环境对其活性有一定的影响。

白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205菌株固体发酵及防控草莓根腐病的研究

[目的]为了明确草莓根腐病的致病因子,降低其发病率,从草莓病株根部分离病原菌,并研究拮抗菌白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205固体制剂对草莓根腐病的防控效果。[方法]从草莓病株根部分离出了1株病原菌Y3,采用形态观察及r DNA-ITS序列分析对病原菌Y3进行鉴定,用平板对峙培养测定拮抗菌CT205对菌株Y3的抑制作用,利用最佳固体发酵培养基及发酵条件对拮抗菌CT205进行固体发酵,通过连作致病土盆栽试验评价菌株CT205固体制剂对草莓根腐病的防控作用。[结果]初步鉴定病原菌Y3为尖孢镰刀菌(Fusarium sp.)。试验发现拮抗菌CT205对病原菌Y3的抑制作用较强,CT205固体发酵6 d,其制剂中菌含量达到2.2×109CFU·g-1。盆栽试验表明,施用CT205固体菌剂对草莓生长有一定的促生作用,对草莓根腐病的防治效果为61.18%。[结论]采用拮抗菌CT205固体制剂防控草莓根腐病具有较高的潜在应用价值。

海洋放线菌Streptomyces sp.(#195-02)的代谢产物研究

从一株南海海洋链霉菌属放线菌195-02中分离得到8个化合物,利用波谱技术确定其结构分别为对羟基苯腈（1）、2-甲基-3-呋喃甲酸（2）、2-呋喃甲酸（3）、环（苯丙-苯丙）二肽（4）、环（亮-异亮）二肽（5）、烟酸（6）、吲哚-3-乙酸（7）和邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（8）。化合物1、3、8为首次从链霉菌属中分离得到,化合物4～7为首次从海洋放线菌中分离得到。活性测试表明化合物4和5在浓度为50μg/ml时,对喉癌细胞hep2抑制率分别为51%和47%,对肝癌细胞hepG2抑制率分别为40%和31%。

海洋放线菌Streptomyces sp.大片段DNA基因组文库的构建

目的:构建稀有海洋放线菌Streptomyces sp.基因组文库。方法:以稀有海洋放线菌Streptomyces sp.为实验材料,随机剪切提取的总DNA,5'-磷酸末端补平回收40kb左右的DNA片段,与pWEBTM载体连接,经包装蛋白包装成噬菌体后侵染宿主细胞E.coliEPI100,构建该菌株的基因组文库,并对该文库进行质量鉴定。结果:成功构建了稀有海洋放线菌Streptomyces sp.的基因组文库,效价达9.0×104CFU/mL,得到4000个阳性克隆子,远远大于按覆盖率为99%计算至少所需的837个阳性克隆子数,且平均插入片段长度为36kb,重组率100%。阳性克隆子保存于96孔板中,-80℃保存。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为了进一步评估Streptomyces sp.所能合成的所有潜在天然产物,还需要进一步检测该文库中包含有生物合成基因簇的大肠杆菌的表达情况。

抗生素Bagremycin生产菌Streptomyces sp. Tü4128接合转移系统的建立

基于噬菌体φC31 att/int系统,采用属间接合将来自大肠杆菌的DNA有效地导入菌株Tü4128的孢子中。通过条件优化,当融合温度为37℃时,在含80mmol/L MgCl2的ISP4培养基上使每个受体细胞的接合频率显著提高到7.3×10-3。Southern blot分析显示在受体菌染色体上存在单一的染色体附着位点(attB位点)。整合位点的DNA序列测序显示为保守。采用优化的方法建立了大肠杆菌和菌株Tü4128间高效的属间接合系统。

土壤链霉菌Streptomyces sp.的抑菌成分

为从放线菌次生代谢产物中寻找结构新颖的活性先导分子,通过抗菌活性筛选,发现一株土壤链霉菌Streptomyces sp.的发酵提取物具有抑菌活性.对该菌进行大规模发酵,利用正相、反相硅胶柱层析和半制备高效液相色谱法,从其发酵产物中分离得到化合物1—11,利用高分辨质谱、一维和二维核磁共振技术,分别将其结构鉴定为(E)-3-甲硫基丙烯酸(1)、(E)-3-甲硫基丙烯酰胺(2)、反式肉桂酸(3)、(E)-4-苯基-3-丁烯酸(4)、3-羟基-4-甲氧基肉桂酰胺(5)、3-indoleketol(6)、N-乙酰基-β-氧色胺(7)、2-乙酰基大黄素(8)、7-羟基-2-(2-羟丙基)-5-甲基色酮(9)、环(苯丙-脯)(10)和环(3-羟基酪-脯)(11).其中,化合物4—6、8、9和11是首次从链霉菌中发现,并且首次报道了化合物2的13C核磁数据.体外对化合物2—4、6、8和9进行了抗菌活性测试,结果表明,化合物3和6对枯草芽孢杆菌和耻垢分支杆菌具有弱抑菌活性,化合物8对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和耻垢分支杆菌也具有弱抑菌活性.

菌株Streptomyces capillispiralis 1070代谢产物的抗肿瘤机制

目的考察菌株Streptomyces capillispiralis 1070的代谢产物抑制肿瘤细胞A549增殖的作用机制。方法采用MTT法考察菌株Streptomyces capillispiralis 1070的活性代谢产物对A549细胞增殖的抑制作用,采用吖啶橙活细胞染色荧光显微镜观察法、罗丹明123活细胞染色流式细胞检测技术及扫描电镜技术、透射电镜技术观察A549细胞增殖受到抑制后的各种变化。采用全波长扫描与Molish反应对活性物质的成分做初步判断。结果该活性物质可使A549细胞存活率降低至25.79%,可使A549细胞线粒体膜电位明显下降,能使A549细胞胞浆内出现酸性自噬泡,但细胞膜结构完整、无细胞内容物外漏。结论推测该活性物质是通过诱导细胞自噬而发挥其抗肿瘤作用。菌株Streptomyces capillispiralis 1070的活性代谢产物为多糖类物质。

海洋链霉菌Streptomyces sp. SCSIO 1672及其代谢产物水杨酸的分离鉴定

从南海海洋沉积物中分离得到1株海洋放线菌,鉴定为链霉菌Streptomyces sp. SCSIO 1672。通过优化发酵条件,采用海虾生物致死活性和高效液相色谱追踪,利用有机溶剂萃取、正相硅胶、反相硅胶等各种色谱层析方法分离出活性化合物,通过波谱数据解析出海洋放线菌SCSIO 1672次级代谢产物中的该活性化合物为水杨酸。

Streptomyces sp.WJS-825产谷氨酰胺转胺酶发酵条件优化及中试

应用五因子二次正交旋转回归试验设计,建立了微生物谷氨酰胺转胺酶 (TG)发酵生产过程中以酶活力和菌体细胞生长量作为目标函数的数学模型,并以此模型对链霉菌 (Streptomycessp. )WJS-825菌株发酵生产TG的培养条件进行优化,确定了影响TG生产的主要因子及其最适取值为多价胨 2. 1%、可溶性淀粉 1. 5%、初始pH 7. 0及培养温度 30℃.以该优化工艺条件进行了 5L发酵罐小试和 200L发酵规模的中试生产.结果表明,在中试发酵生产中使用以豆饼粉部分替代多价胨的经济性发酵优化培养基,以及发酵过程中在线监控pH、溶氧系数等多项发酵调控参数,并分段控制pH、温度、通气量和搅拌转速以及进行适时的流加补充碳源,该菌株生长繁殖能力强、产酶效果好,TG活性达 3. 2u/mL,而且连续重复的中试发酵生产试验的TG产量均稳定在 3. 2u/mL以上. 图 2表 3参