对小菜蛾较高毒力的阿弗曼链霉菌突变株及其发酵培养基的筛选

利用紫外线诱变阿弗曼链霉菌４６０ 菌株， 筛选得到两株对小菜蛾２ 龄幼虫有较高毒力的突变株Ｌ０９ 和Ｌ１０ ， 其ＬＣ５０ 值分别比出发菌株低７４－３ ％ 和８５－５ ％ 。用正交法对突变菌株的发酵培养基进行了筛选， 得到试验条件下一较优的培养基配比。

阿维菌素B1a组分高产菌株的高通量选育

为筛选阿维菌素高产菌株,建立了阿维菌素高产菌株的高通量初筛及复合诱变技术选育高产菌株的方法。初筛首先采用24孔板培养突变株,发酵培养5 d,甲醇直接浸提固体培养物,最后利用96孔板-酶标仪检测浸提液在紫外波段245 nm吸收。以阿维链霉菌(Streptromyces avermitilis)编号为AV-X-95的阿维菌素产生菌作为出发菌株,通过紫外线(UV)照射45 s和亚硝基胍(NTG)处理60 min的组合诱变方法对出发菌株的孢子悬液进行了连续的诱变处理。研究结果表明,1 728株突变子的经高通量初筛后得到8株高产菌株,经摇瓶复筛和稳定性考察得到高产菌株AW4-329,其B1a产量较出发菌株提高了15.1%。

利用前体物质定向选育阿维菌素高产菌株

以除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)AV-0105为出发菌株,采用紫外线诱变处理,并结合前体抗性定向选育阿维菌素高产菌株。通过对致死率的考察,确定了紫外线诱变的最适剂量。在分离培养基中分别加入不同体积分数的缬氨酸和D-脱氧葡萄糖作为前体物质进行正突变株的定向筛选,选育得到阿维菌素高产菌株AV-03-35,其摇瓶发酵效价达到4695u/mL,较出发菌株提高15.5%。采用该菌株在2t罐进行生产验证,平均发酵效价达4592u/mL,较出发菌株提高了13%。

阿维链霉菌的诱变育种

以阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)76-12为出发菌株,采用亚硝基胍、吖啶橙、紫外线和氯化锂分别对其孢子和原生质体进行诱变,经抗代谢物理性筛选,获得一系列高产突变株,其中N-1-2高产突变株的发酵单位是出发菌株的2.47倍。实验中同时获得了只产阿维菌素a组分的突变株G-32、Bla组分含量高的Ave8菌株和产蓝绿色孢子的突变株UA-G等。

采用紫外线连续诱变方法选育阿维菌素高产菌株

以除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)为出发菌株,采用连续3次紫外诱变,同时使用D-脱氧葡萄糖进行定向筛选,选育得到阿维菌素高产菌株,较出发菌株提高了34.4%。