变铅青链霉菌启动子活性片段的亚克隆及其顺序分析

近年来,由于链霉菌启动子探测质粒的构建以及体外克隆技术的迅速发展,使得许多链霉菌启动子得到分离分析.已发现的链霉菌启动子大致可以分为三类:一、与原核生物典型启动子—10区和—35区类似的链霉菌启动子;二、仅与原核生物典型启动子—10区相似的启动子;三、无论在—10区还是在—35区与典型的原核生物的启动子都没有任何相似之处的启动子.链霉菌启动子的多样性还表现在—10区与—35区保守序列的间隔长短差异较大,从7bp到24bp长短不一.链霉菌中还常存在着串联的启动子.总之,链霉菌启动子比一般原核生物启动子具有更加复杂的多样性.

灰色链霉菌启动子活性片段在大肠杆菌中的亚克隆及其序列分析

通过对重组质粒No.8-1的亚克隆,灰色链霉菌插入到大肠杆菌载体质粒中的序列已缩小到410bp,仍具有启动子功能。序列分析表明,启动子活性片段的G+C碱基组成为50.5%。内含链霉菌启动子区域常有的正向重复序列;有1个Alul位点,1个Clal位点,2个Mbol位点,3个Nla Ⅲ位点,1个Pvu Ⅱ位点;具有类似于E.coli启动子的保守序列-10区和-35区,两者间隔18bp;在相应位置上分别有一段序列与E.coli的SD序列和在苄铅青链霉菌的SEP(Streptomyces-E.coil-type promoter)序列中存在的保守序列具有一定的相似性。