链脲佐菌素敏感的胰岛细胞表达亨廷顿蛋白相关蛋白1

目的探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)在大鼠胰岛中的定位。方法应用一次性大剂量腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin)的方法选择性破坏大鼠胰岛B细胞复制糖尿病模型,免疫组织化学ABC法显示胰岛内HAP1和胰岛素免疫反应性。结果在正常大鼠胰腺内,HAP1选择性表达于胰岛内,HAP1免疫反应阳性细胞呈短条索状或团状分布在每个胰岛内,主要位于胰岛的中央部,与胰岛B细胞的分布十分相似。注射链脲佐菌素的大鼠,胰岛中含HAP1的细胞数量在注射链脲佐菌素3d后已明显减少,并随着注射后动物存活时间的延长而进一步进行性减少;在注射后4周的大鼠,胰岛中仅有少数散在分布的HAP1免疫反应弱阳性细胞。链脲佐菌素对胰岛中表达HAP1细胞的影响与对表达胰岛素细胞的影响一致。结论HAP1也存在于胰岛内,并主要定位于链脲佐菌素敏感的B细胞内。

糖尿病大鼠心肌纤维化与心肌AGEs/RAGE水平的变化

目的通过构建Ⅱ型糖尿病大鼠模型,研究该模型心肌纤维化和心肌AGEs/RAGE水平的变化情况。方法雄性SD大鼠高脂饲料饲喂6周后,过夜空腹12 h,腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg)。注射3、7 d后检测大鼠随机血糖浓度,两次随机血糖≥16.7 mmol/L为Ⅱ型糖尿病大鼠建模成功。在建模成功后第4、8和12周,检测大鼠血FBG、insulin和左心室AGEs、Hyp含量及Masson染色、RAGE表达的变化。结果造模成功后第4、8和12周,糖尿病对照组(4D,8D,12D)血FBG水平均较同周次正常对照组(4C,8C,12C)显著升高,体重显著下降;造模成功后第12周时,糖尿病对照组(12D)大鼠Insulin显著高于同周次正常对照组(12C)和4周时糖尿病对照组(4D);从造模成功后第8周开始,糖尿病对照组(8D,12D)心肌Hyp、CVF、AGEs和RAGE与正常对照组(8C,12C)相比均显著升高;2型糖尿病大鼠心肌AGEs/RAGE水平与CVF呈显著正相关。结论高脂饮食饲喂加腹腔注射小剂量STZ,能够成功复制Ⅱ型糖尿病大鼠模型。随着病程的延长,心肌纤维化和心肌AGEs含量、RAGE蛋白表达均呈逐渐上升趋势,且Ⅱ型糖尿病大鼠心肌AGEs/RAGE水平与心肌纤维化存在有正相关关系。

STZ诱导的2型与1型糖尿病大鼠模型的对比研究

目的观察链脲佐菌素(STZ)诱导的2型与1型糖尿病大鼠模型的差异。方法雄性SD大鼠,高脂高糖饲养6周后按35mg/kg单次腹腔注射2%STZ溶液建立2型糖尿病(T2DM)模型,普通饲料饲养6周后按60mg/kg单次腹腔注射2%STZ溶液建立1型糖尿病(T1DM)模型,设立正常对照组。检测大鼠体重、血糖、糖化血红蛋白(Hb A1c)、血脂谱及氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。结果与正常组比较,糖尿病组大鼠的血糖、血脂和ox-LDL水平显著升高(P<0.01);T1DM组体重显著下降(P<0.01),T2DM组体重差异无统计学意义(P>0.05)。T2DM组的体重、血脂谱及ox-LDL水平显著高于T1DM组(P<0.01),血糖差异无统计学意义(P>0.05)。结论高脂、高糖喂养基础上单次腹腔注射STZ可成功诱导2型糖尿病大鼠模型,其体重及血脂异常显著高于1型糖尿病模型,近似于人类2型糖尿病。

实验性2型糖尿病动物模型研究进展

糖尿病(DM)是一种重要的内分泌代谢性疾病,主要有1型糖尿病(T1DM)和2型糖尿病(T2DM)两种类型,其中尤其是T2DM由于其患病人数多,病程及进展缓慢,严重影响患者的劳动能力和生活质量。为此国内外学者对T2DM的发病机制进行了大量的研究工作。但到目前为止,T2DM的各项研究进展仍十分缓慢,其中主要原因是T2DM病因多,发病机制复杂。本文旨在将国内外有关T2DM的实验动物模型的研究进展进行一次总结。

冻干血小板对大鼠难愈合创伤模型的实验治疗

血小板含有20多种生长因子,对于创伤尤其是难愈性创伤具有治疗作用。本研究以糖尿病SD大鼠为基础,建立了一种难愈合创口模型,用于评价冻干血小板对难愈性创伤修复的治疗作用。采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)65mg/kg对大鼠腹腔注射制备糖尿病模型。取正常大鼠10只,糖尿病大鼠20只,将其分为正常对照组(NDR)、糖尿病对照组(DR)和冰冻干燥血小板治疗组(TLP);在各组大鼠背部造成直径2cm圆形创面,分别于第l、3、5、7、12天进行创面照相和透明膜描计法计算创面愈合速度。结果显示,注射STZ72小时后糖尿病组血糖明显高于16.7mmol/L。1周后糖尿病大鼠体重与正常对照组比较明显减轻(p<0.05)。糖尿病对照组创口的愈合速度在各个时间点均低于正常对照组创口(p<0.05),冰冻干燥血小板治疗组创口愈合速度显著快于糖尿病对照组。第12天时,正常对照组和治疗组创口再上皮化率分别达到88.1%和81.8%,而糖尿病组只有62.8%。结论 :以链脲佐菌素建立的糖尿病大鼠能成功制备难愈合创口模型,冰冻干燥血小板对该难愈性创伤模型具有治疗作用。

糖尿病胃轻瘫大鼠模型制作的实验研究

目的:探讨小剂量链脲佐菌素注射液(STZ)联合高能量饮食法诱导糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠模型。方法:将24只大鼠随机均分为正常组和模型组,正常组大鼠予普通饲料喂养,模型组大鼠予高脂高糖喂养,模型组大鼠高脂高糖喂养4周后,予1%STZ溶液腹腔注射3次,剂量分别为20、25、35 mg/kg,第3次注射后4周测大鼠空腹血糖、胃内残留率、血清胃动素(MLT)、胃泌素(GAS),同时取大鼠胃组织,观察胃窦平滑肌细胞。结果:模型组大鼠空腹血糖、胃内残留率、MLT、GAS明显高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01);模型组大鼠胃窦平滑肌细胞形态学改变较正常组大鼠有明显差异。结论:小剂量STZ联合高能量饮食法可成功复制DGP大鼠模型。

活血化瘀通络方对糖尿病胃轻瘫大鼠模型胃动素、胃泌素指标的影响研究

目的观察活血通络方在糖尿病胃轻瘫大鼠模型中的治疗效果及对胃动素、胃泌素水平的影响。方法选择90只健康雄性Wistar大鼠,随机分为对照组、吗丁啉治疗组、模型组、中药1组(含丹参、川芎)、中药2组(含水蛭、地龙)、中药3组(活血化瘀通络方,含丹参、川芎、水蛭、地龙)。各组在造模时灌胃给药,给药剂量:正常对照组服用1.5ml/100 g生理盐水,模型组摄入1.5 ml/100 g生理盐水,中药1组给予丹参、川芎1.2 g/(kg·d)灌胃,中药2组给予水蛭、地龙1.2 g/(kg·d)灌胃,中药3组给予丹参、川芎、水蛭、地龙合方1.2 g/(kg·d)灌胃,周期为8周。购入的实验大鼠放入SPF级的饲养条件下进行稳定,7 d后每只大鼠均禁食12 h,造模,在24 h、36 h、72 h测定90只大鼠非空腹尾静脉血糖值,将血糖值长期稳定于16.8 mmol/L的60只大鼠作为研究对象,平均分入各组中,每组12只。另外选择12只健康大鼠入对照组中,与其他5组操作方式相似,以等量消毒生理盐水对大鼠进行腹腔注射。共接受8周治疗,在最后给药时检测各组大鼠血糖值、体重,24 h禁食后各组均经口灌胃30 min后,空腹取眶静脉血3 ml,放于含有10%乙二胺四乙酸二钠30μl和抑肽酶60μl试管内,4℃下离心后取血浆放于-20℃冰箱内保存测定胃动素及胃泌素水平。结果(1)各组给药8周后,均出现了动物死亡,以模型组大鼠的死亡率为最高,存活率仅为58.33%(7/12)。其他各个组的存活率显著高于模型组(P<0.05)。(2)与模型组相比较,对照组、中药各组、治疗组大鼠的胃动素、胃泌素水平明显降低;与中药1组、2组大鼠比较,中药3组胃动素、胃泌素水平明显升高(P<0.05)。结论活血通络方、中药1组、2组及吗丁啉治疗组均可以相应地提高糖尿病胃轻瘫大鼠的存活率,通络方对糖尿病胃轻瘫大鼠血糖具有一定的改善作用,能够降低血浆胃动素、胃泌素水平,提升大鼠胃肠推进,促进胃排空。

链球菌制剂预防性治疗实验动物糖尿病机理研究

为了探讨链球菌制剂预防性治疗糖尿病的机理,以纯系的自发性糖尿病NOD小鼠和链脲霉素诱导糖尿病鼠为动物模型,从5周～20周皮下注射链球菌制剂0.1 mg/只,对照组注射等量生理盐水,观察其发病率.至40周时链球菌制剂组均未发病,而生理盐水组发病率为70%.取胰腺组织作病理切片,Fas、FasL染色及胰岛β细胞染色.未发病鼠无Fas表达,但有FasL的表达;已发病鼠有Fas的表达;经链球菌制剂免疫后小鼠有FasL表达.相同的结果也出现在以链脲霉素(STZ)诱导的迟发型糖尿病模型鼠中.链球菌制剂可能通过改变Fas L/Fas系统在胰腺组织的表达,来预防性治疗糖尿病,发挥免疫调节作用.

链球菌制剂对NOD鼠脾细胞及血清细胞因子的影响

为了探索链球菌制剂对NOD鼠脾细胞及血清细胞因子的影响,试验以NOD鼠为Ⅰ型糖尿病动物模型,在5～20周龄,皮下注射链球菌制剂,每只0.1 mg,对照组注射0.1 mL生理盐水,分别取未发病鼠、已发病鼠及经链球菌制剂免疫后小鼠的眼底血、脾脏制成脾细胞DMEM悬液,夹心ELISA法测IFN-γ、IL-4的含量。结果发病鼠IFN-γ的分泌量高于链球菌制剂的免疫鼠,而IL-4低于后者。链球菌制剂可能通过调节Th1和Th2型细胞因子的平衡来预防性地治疗糖尿病,从而发挥免疫调节的作用。

褐环粘盖牛肝菌乙醇提取物抗糖尿病研究

为验证褐环粘盖牛肝菌95%乙醇提取物(Suillus luteus ethanol extract,SLE)抗糖尿病活性,本文采用抑制α-葡萄糖苷酶活性实验验证SLE的体外降血糖活性;建立高脂高糖饲料联合链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠模型,检测SLE处理后模型小鼠血糖、血脂变化;组织切片法检测糖尿病小鼠病变胰脏、肝脏和肾脏的恢复情况。抑制α-葡萄糖苷酶活性检测结果表明,SLE的EC50值为3.269 mg/m L,表现出一定的体外降血糖活性。SLE处理后糖尿病模型小鼠血糖、三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)降低,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)升高,体重增加;SLE处理4周后,糖尿病模型小鼠的胰脏、肝脏、肾脏病变组织得到明显修复。本实验结果证明SLE具有较好的抗糖尿病活性,可用于相关保健品或药品的开发。

类叶升麻苷对STZ侧脑室注射模型小鼠认知行为及LTP的影响

目的研究类叶升麻苷对链尿佐菌素(STZ)侧脑室注射诱导的AD模型小鼠认知行为及突触可塑性的影响。方法将昆明小鼠和BALB/c鼠按体质量随机分为正常组、模型组、阳性对照组(Donepezil组)及类叶升麻苷低、中、高剂量组。除正常组注射PBS外,其余各组均侧脑室注射STZ(30μg/μL,5μL)制备AD模型。然后给予5、15、45mg/kg体质量类叶升麻苷溶液灌胃15d。给药完成后,利用自主活动、新物体识别、水迷宫等行为学实验测试小鼠的认知行为,通过突触长时程增强(LTP)观察类叶升麻苷对突触可塑性的影响。结果与模型组小鼠相比,类叶升麻苷给药组小鼠的认知行为及LTP提高,小鼠自主活动性增加,新物体识别优先指数升高,差异有统计学意义(P<0.05),在O迷宫中开臂区域的时间增加,差异有统计学意义(P<0.05),在水迷宫测试期逃避潜伏期缩短,差异有统计学意义(P<0.01),PS波增幅高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论类叶升麻苷对链尿佐菌素(STZ)诱导的AD模型小鼠认知功能具有明显保护作用,其保护作用机制可能与类叶升麻苷可以提高小鼠海马PP-DG区的LTP和改善模型小鼠突触可塑性有关。

不同剂量链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠角膜病变模型的对比研究

目的 比较研究单次高剂量和多次低剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔内注射诱导糖尿病小鼠角膜病变的成模情况及其病理表现的异同. 方法 正常6～8周龄雄性C57BL/6小鼠80只,随机分为正常对照组、多次低剂量1个月组、多次低剂量3个月组（60 mg/kg STZ连续腹腔内注射5次）和单次高剂量1个月组（150 mg/kg STZ腹腔内注射1次）,每组20只.比较各模型组小鼠成活率、糖尿病成模率、平均体质量、糖化血红蛋白（HbA1c）水平.各组小鼠均行角膜上皮刮除术,采用荧光素钠染色法检测角膜上皮的缺损面积百分比.采用免疫荧光染色法检测角膜上皮p-Akt、Sirt1和Ki67的表达情况.采用Cochet-Bonnet触觉测量器检测角膜上皮刮除前、刮除后3、7、10和14 d角膜敏感度,采用免疫荧光染色检测角膜上皮刮除前、刮除后14 d角膜神经密度.结果 多次低剂量1个月组、多次低剂量3个月组和单次低剂量1个月组小鼠糖尿病成模率分别为90％、80％和70％.各糖尿病模型组小鼠血液HbA1c水平较正常对照组明显升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;各糖尿病模型组间小鼠血液HbA1c水平比较,差异均无统计学意义（均P＞0.05）.角膜上皮刮除后24 h和48 h,多次低剂量3个月组和单次高剂量1个月组小鼠角膜上皮缺损面积百分比均高于正常对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.多次低剂量3个月组和单次高剂量1个月组小鼠角膜上皮p-Akt、Sirt1和Ki67的荧光强度均低于正常对照组.角膜上皮刮除前和刮除后14d,多次低剂量1个月组小鼠角膜敏感度、角膜神经密度与正常小鼠相比,差异均无统计学意义（均P＞0.05）;但多次低剂量3个月组和单次高剂量1个月组小鼠角膜神经敏感度、角膜神经密度明显下降,与正常对照组相比差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 低剂量STZ注射1个月不能诱导糖尿病小鼠出现角膜病变特征,而高剂量STZ注射后1个月和低剂量STZ注射后3个月的糖尿病小鼠出现典型的角膜上皮和神经病变,可作为研究1型糖尿病性角膜病变的理想动物模型.

α-硫辛酸对链脲菌素诱发的大鼠胰岛β细胞损伤的保护作用

目的研究α-硫辛酸（ALA）对链脲菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤的保护作用。方法30只SD大鼠按数字随机法分为正常对照组（NC组）、STZ组和ALA＋STZ组（ALA组），各10只。后2组以STZ（70mg／kg体重）一次性腹腔内注射诱发糖尿病，ALA组在注射前8d开始给予ALA（50mg·kg^-1·d^-1，强饲）直至实验结束（4周）。STZ注射后每3天监测血糖、体重一次。测定胰腺匀浆中丙二醛（MDA）含量及还原型谷胱甘肽（GSH）水平，免疫组化方法检测胰岛β细胞内胰岛素水平。结果STZ使大鼠血糖明显升高，STZ和ALA组制模成功率分别为90％（9／10）和70％（7／10），相差显著（P〈0．05）。实验结束时NC组、STZ组和ALA组平均体重分别为（368±3）g、（301±2）g和（341±26）g，3组间相差显著（P〈0．05）。STZ组胰腺组织内MDA水平为（1．22±0．14）nmol／mg prot，NC组为（0．57±0．04）nmol／mg prot，相差显著（P〈0．05）；STZ组胰腺组织内GSH含量为（16．54±1．10）mg／g prot，NC组为（25．46±0．62）mg／g prot（P〈0．05）；STZ组胰岛细胞呈退行性变。ALA组血糖较STZ组明显降低（P〈0．05），胰腺组织匀浆MDA含量为（0．72±0．23）nmol／mg prot，较STZ组明显降低（P〈0．05），GSH含量为（35．33±2．66）mg／g prot，较STZ组明显升高（P〈0．05），胰岛的胰岛素分泌增强，较STZ组显著（P〈0．05），胰岛β细胞损伤减轻。结论ALA可通过减轻氧化应激来保护胰岛β细胞结构和功能的完整性。

SD大鼠II型糖尿病模型的建立与评价

通过高糖高脂饮食诱导,联合小剂量链脲佐菌素部分破坏胰岛-细胞,建立II型糖尿病SD大鼠模型.结果表明,模型组大鼠饲喂高糖高脂饲料4周后,腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素,1周后86.7%的大鼠空腹血糖高于13.8mmol/L,在8周观察期内稳定,糖耐量受损.皮下注射50μg/kg艾塞那肽降血糖作用明显,3 h时较初始水平下降38.2%,表明糖尿病大鼠对II型糖尿病治疗药物艾塞那肽的反应良好.第13周处死大鼠,胰脏病理切片检查,模型组大鼠部分胰岛-细胞被破坏.建立的模型可用于药效学的相关评价研究.