Antiviral treatment of hepatitis B virus-transgenic mice by a marine organism, Styela plicata

瞄准：在肝炎 B 搬运人的一个鼠科的模型评估 Styela plicata 的有效成分的抗病毒的效果。方法：HBV 转基因的老鼠被划分成 3 个组(控制组， lamivudine 处理组和 Styela plicata 处理组的有效成分) 并且分配了收到正常饮食， lamivudine 或 Styela plicata 的有效成分连续星期。浆液肝炎 B 表面抗原被连接酶的免疫检测吸着剂试金(ELISA ) 方法。浆液 HBV DNA 被即时聚合酶链反应(RT-PCR ) 检测。浆液 T 助手(h) 1 cytokine interleukin (IL )-2 和 Th2 cytokine IL-6 被量的三明治酶免疫分析技术检测。另一组 HBV 转基因的老鼠被分配收到 Styela plicata 的有效成分连续星期。肝组织的组织学在治疗前后被评估。结果：12 个星期在开始治疗以后，浆液肝炎 B 表面抗原显著地在 Styela plicata 被降低与收到正常饮食的老鼠相比对待老鼠和对待 lamivudine 的老鼠(F (12wk )= 88.81， P (12wk )= 0.000 【0.01 ) 。浆液 HBV DNA 显著地在 Styela plicata 被降低与收到正常饮食的老鼠相比对待老鼠和对待 lamivudine 的老鼠(F (12wk )= 20.71， P (12wk )= 0.000 【0.01 ) 。然而， Styela plicata 的有效成分象 lamivudine 一样，不能完全禁止 HBV 的复制。在重量的单位的肝炎 B 表面抗原和 HBV DNA 的回缩现象一 could 在药的退却以后被发现 4 wk。八个星期在开始治疗以后，在 IL-2 的 Styela plicata 处理前后的浆液层次是 2.41 +/- 0.38 和 10.56 +/- 0.78 ng/L，分别地(t (8wk )=-16.51, P (8wk )= 0.000 【0.01 ) 。与在正常对待食谱的老鼠的 IL-2 的浆液层次相比(2.48+/-0.17 ng/L；t (8wk )= 13.23， P (8wk )= 0.000 【0.01 ) 。在 IL-6 的 Styela plicata 处理前后的浆液层次是 63.62 +/- 分别地， 6.22 ng/L 在正常对待食谱的老鼠 IL-6 与浆液相比铺平的 6.31 和 54.52 +/-(60.84 +/- 4.21 ng/L ) 。从 Styela 对待 plicata 的 HBV 转基因的老鼠的肝的组织学的分析也在发炎和肝炎 B 表面抗原显示出下降地位。结论：Styela plicata 可以是在对待长期的肝炎 B 的有效的抗病毒的药。

Therapeutic effect of Styela plicata on duck hepatitis B virus in vivo

Objective:To evaluate the antiviral activity of the alcohol extract of Styela plicata on DHBV (duck hepatitis B virus) in vivo. Methods: Guangzhou-Sheldrake ducklings congenitally infected with DHBV were assigned to receive the alcohol extract of Styela plicata or lamivudine for 30 consecutive days. The DHBV DNA of sera was detected by RT-PCR. and the histological analysis of duckling liver was evaluated. Results:Thirty days after therapy,histological analysis of duckling liver showed that the ducklings receiving the alcohol extract of Styela plicata or lamivudine exhibited catabatic status in the degree of liver cell degeneration and inflammation compared with the ducklings receiving normal diet. DHBV DNA of sera from alcohol extract of Styela plicata-treated ducklings and lamivudine-treated ducklings all produced significantly lower levels compared with ducklings receiving normal diet (P<0. 01 ). Although these treatment groups all exhibited a rebound phenomenon 10 d after withdrawal of medication, they still exhibited a significant lower level of serum DHBV DNA compared with the control group responded to normal diet (P<0. 05, P<0. 01). Conclusion:Styela plicata may be an effective antiviral medicine in treating chronic hepatitis B. The data of this experiment will be valuable in studying the therapeutic role and the potential therapeutic mechanism of Styela plicata.

Correlativity between neural complex and gonadal development in Styela plicata

IT has been demonstrated that two reproductive hormones,gonadotropin-releasing hormone(GnRH)and gonadotropin(GTH),exist in the nervous system and Hatschek’s pit oflancelet,a species of Cephalochordata,and that these hormones are involved in the regulationof gonadal development and reproductive activity of lancelet.However,no report could

皱瘤海鞘乙醇提取物抗乙肝HBsAg和HBeAg的初步研究

目的:研究皱瘤海鞘乙醇提取物的体外抗乙肝病毒作用。方法:用 2.2.15细胞株进行抗 HBsAg、HBeAg的试验研究。结果:海鞘乙醇提取物对 HBsAg、HBeAg的分泌均有较明显的抑制作用,对细胞的毒性低,其治疗指数均在10以上。结论:海鞘乙醇提取物体外具有明显的抗乙肝病毒作用。

东海三个海鞘优势种的油脂成分分析

不饱和脂肪酸尤其是ω-3多不饱和脂肪酸是对人类健康具有重要意义的一类成分。海鞘是一类典型的海洋污损生物,对东海3个海鞘优势种皱瘤海鞘、乳突皮海鞘和长纹海鞘的油脂类成分进行相对含量分析比较,发现乳突皮海鞘油脂中含有EPA一种ω-3 PUFA,含量为5.20%;长纹海鞘油脂中含有EPA一种ω-3PUFA和二十碳四烯酸一种ω-6 PUFA,含量分别为12.7%和3.17%;皱瘤海鞘油脂中含有EPA、DHA两种ω-3 PUFAs,含量分别为10.9%和5.74%,以及亚油酸和二十碳四烯酸两种ω-6 PUFAs,含量分别为11.6%和5.94%。与磷虾油文献数据相比较,皱瘤海鞘油脂总体质量与磷虾油相近,显示了ω-3/ω-6 PUFAs较为均衡的特点。表明皱瘤海鞘的多不饱和脂肪酸具有较好的开发利用前景。

皱瘤海鞘质量HPLC指纹图谱的研究

目的应用HPLC法建立皱瘤海鞘质量HPLC指纹图谱。方法采用Agilent ZORBAX Bonus-RP柱(4.6×250mm,5μm),以0.01%TFA的双蒸水(A)和乙腈(B)为流动相梯度洗脱,检测波长254nm,柱温30℃,记录时间60min,测定10批样品的指纹图谱。结果皱瘤海鞘有效部位有13个共有峰,多数峰都可以达到较好分离,该分析方法具有很好的精密度、重现性和稳定性。结论该方法操作简便、结果可靠,可以对皱瘤海鞘进行鉴定,并为其制剂原料的质量控制提供有效手段。

不同海鞘醇提物体外抗乙肝HBsAg和HBeAg作用的比较

目的研究皱瘤海鞘、冠瘤海鞘和大洋纵列海鞘乙醇提取物的体外抗乙肝病毒作用,对其进行比较,并推测其作用机制。方法用血清进行抗HBsAg、HBeAg、AntiHBs和AntiHBe的试验研究。结果当海鞘醇提物的浓度大于2g·L-1时,3种海鞘对HBsAg均有一定程度的抑制作用,当海鞘醇提物的浓度大于0.5g·L-1时,3种海鞘对HBeAg均有良好的抑制作用,它们在抑制两种抗原的作用上差异均无显著性。结论海鞘醇提物对乙肝患者血清中的HBsAg抗原和HBeAg抗原均具有一定程度的抑制作用,其抑制程度的大小与浓度有关。通过海鞘醇提物对AntiHBs、AntiHBe的作用结果推测,海鞘中用于抗乙型肝炎病毒的成分大致可以分为两类,一类具有类似抗体样的结构,可以通过与抗原结合形成无感染力的复合物来清除病毒;另一类则在对抗原具有明显抑制作用的同时对抗体亦有一定的抑制作用。

亚热带养殖海湾皱瘤海鞘生物沉积的现场研究

皱瘤海鞘是亚热带海域分布最广和数量最多的附着生物种类之一。2012年1月—7月在典型的亚热带养殖海湾-大亚湾大鹏澳海域,利用沉积物捕集器现场测定了皱瘤海鞘(Styela plicata)的生物沉积速率,并测定了生物沉积物中有机物(OM)、总碳(TC)、总氮(TN)、有机碳(OC)和有机氮(ON)含量。结果显示:皱瘤海鞘的生物沉积速率变化范围为每天145.5—1011.8mg/个,平均每天516.0mg/个,海鞘的生物沉积速率变化范围为每天154.8—1065.8 mg/g干重,平均每天463.3 mg/g干重。海鞘生物沉积物中OM、TC、OC、TN和ON含量分别为14.38%、10.80%、2.87%、3.06%和0.86%,高于自然沉积物中的含量,分别为13.39%、7.36%、2.32%、2.29%和0.67%。其中TC和ON含量要显著高于自然沉积物(P<0.05)。皱瘤海鞘的OM、TC、OC、TN和ON的生物沉积速率分别为每天74.20,55.73,14.80,15.79和4.43 mg/个。实验期间附着在浮筏养殖设施和养殖牡蛎壳上的海鞘密度变化范围为54.9—222.1个/m2,平均147.5个/m2,养殖海域单位面积的海鞘生物沉积速率平均为每天76.1 g/m2,是自然沉积速率(平均每天62.7 g/m2)的1.21倍,其中OM、TC、OC、TN和ON的平均沉积速率分别为每天10.94,8.21,2.18,2.32和0.65 g/m2。据此可推算,大鹏澳筏式牡蛎养殖海区(约103 hm2)皱瘤海鞘的年生物沉积物负荷为29000 t,其中OM,TC,OC,TN和ON分别4100,3100,820,870和240 t。研究结果说明,海鞘等附着生物在大规模浅海贝类养殖中对养殖生态环境的影响也不容忽视。

皱瘤海鞘水提物体外抗HSV-2活性实验研究

目的:了解皱瘤海鞘水提物体外抗单纯疱疹病毒2型的活性。方法:采用HSV-2在Vero细胞上的增殖为模型,用细胞病变法和MTT法对皱瘤海鞘水提物体外抗HSV-2的药效活性进行评价。结果:皱瘤海鞘水提物CC_(50)值大于10 mg·ml^(-1),毒性低;对HSV-2具有很好抑制和杀伤作用,2 mg·ml^(-1)时对病毒的生物合成抑制蟀达到82.98%,对HSV-2的直接杀伤率为74.29%。对HSV-2的吸附阻断作用较小。结论:皱瘤海鞘水提物具有良好的抗HSV-2活性。

皱瘤海鞘有效部位HPLC指纹图谱的初步研究

目的:建立皱瘤海鞘有效部位的HPLC指纹图谱。方法:应用HPLC对不同产地的皱瘤海鞘有效部位供试液进行指纹图谱比较。结果:通过对6份样品的分析鉴定,获得了皱瘤海鞘有效部位的标准HPLC指纹图谱及13个特征峰。结论:HPLC指纹图谱鉴定法可以对皱瘤海鞘有效部位进行鉴定,并为其制剂提供可靠、方便的质量控制。

皱瘤海鞘提取物体外抗乙肝病毒有效部位的筛选

目的 :筛选皱瘤海鞘体外抗乙肝有效部位。方法 :应用酶联免疫技术 (ELISA)测定血清中表面抗原 (HBsAg)、e抗原(HBeAg)的OD值 ,评价皱瘤海鞘不同部位抗乙肝病毒 (HBV)的活性。结果 :水溶性提取部位显示明显的抗HBsAg、HBeAg作用 ,而其他部位作用不明显。结论 :皱瘤海鞘提取物在体外具有抗乙肝病毒的作用 ,有效部位为水溶性成分。

皱瘤海鞘正丁醇部位体外抗乙肝病毒的初步研究

目的对皱瘤海鞘正丁醇部位进行抗乙肝药效筛选。方法应用酶联免疫技术(ELISA)测定血清中病毒与药物反应12h前后表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)的OD值变化,评价皱瘤海鞘正丁醇部位抗乙肝病毒(HBV)的活性。结果在药物浓度大于6mg/ml时,给药组与时照组中HBsAg,HBeAg的OD值在统计学上有显著性差异(P<0.05),提示皱瘤海鞘正丁醇部分有明显的抗HBsAg和HBeAg作用。结论初步提示皱瘤海鞘正丁醇部位对乙肝病毒有抑制、破坏作用。

厦门皱瘤海鞘性腺发育的组织学研究

皱瘤海鞘雌雄同体。性腺组织学观察结果表明，厦门皱瘤海鞘卵巢和精巢发育和成熟可分为5个时期。在同一个体中，卵巢和精巢的发育不同步，因而不发生自体受精。另外，根据性晚发育的季节性观察，皱瘤海鞘常年都可繁殖，但生殖旺季在6月。

皱瘤海鞘胃肠道中3种内分泌细胞的免疫组织化学定位

应用免疫组织化学技术,用5-羟色胺、神经肽Y和胃泌素3种抗血清对皱瘤海 鞘(Styela plicata)胃肠道内分泌细胞进行鉴别和定位．结果表明,皱瘤海鞘的胃、前 肠、中肠和后肠均不同程度地存在5-羟色胺、神经肽Y和胃泌素3种免疫活性内分 泌细胞,且细胞在胃部的分布密度最高,后沿肠道逐渐递减,至后肠密度最低．胃肠道 免疫活性内分泌细胞可分为开放型和封闭型两种类型．开放型细胞多为长柱形或圆 锥形,具有长短不一的胞质突起;封闭型细胞则多为圆形或椭圆形．本文结合内分泌 细胞的分布密度和形态特点对其在皱瘤海鞘胃肠道中的功能进行讨论．

北部湾优势种皱瘤海鞘的化学成分及抗氧化活性

运用紫外分光光度法,首次对北部湾优势种海鞘皱瘤海鞘Styela plicata各有机相的总还原力、DPPH自由基、O2^-·和·OH的清除能力进行测试,总还原力实验中乙酸乙酯相和水相在100μg/m L时的吸光度分别为0.149和0.122。DPPH·清除能力较好的是水相,其IC50为6.10μg/m L。水相和乙酸乙酯相对O2^-·的IC50分别为10.26μg/m L和2.18μg/m L,两者对·OH的IC50分别为2.30μg/m L和9.65μg/m L。表明皱瘤海鞘次级代谢产物中的体外抗氧化活性组分主要集中于水相浸膏和乙酸乙酯相。运用正反相硅胶柱层析、Sephadex-LH20凝胶柱层析法和半制备HPLC对乙酸乙酯相进行分离纯化,运用NMR、MS波谱学方法结合理化性质和TLC技术纯化鉴定了其中3个多羟基甾体类化合物的结构为cholestane-1,3,5,6-tetraol(1),(5)-cholestane-3,5,6-triol(2)和suberoretisteroids D(3),这三个化合物均为首次从皱瘤海鞘中分离获得。实验结果为扩展皱瘤海鞘应用价值提供基础资料和指导,也为食源性的天然抗氧化剂的开发提供资源。

皱瘤海鞘神经腺上皮细胞活动周期与性腺发育关系的研究

对皱瘤海鞘神经腺上皮细胞活动周期进行了组织学、超微结构和免疫细胞化学的研究。结果表明皱瘤海鞘神经腺细胞活动周期与性腺发育相关。在性腺发育早期，神经腺各小叶上皮细胞基本上属胞质致密形式。性腺Ⅱ～Ⅲ期，有些小叶腺细胞出现空泡化，空泡化小叶占统计总数的２３％，性腺Ⅳ和Ⅴ期，增至３５％～３９％和６３％。产卵后大多数腺小叶为空泡形式，或网状形式。超微结构研究进一步证实组织学观察。免疫细胞化学定位首次证实了神经腺细胞对人促黄体素和人绒膜促性腺激素抗体发生强免疫阳性反应。为皱瘤海鞘神经腺上皮细胞可能具有内分泌功能提供了证据。

皱瘤海鞘提取物对阴道感染HSV-2小鼠保护作用及机制

目的探讨皱瘤海鞘提取物体内抗HSV-2的作用及机制。方法应用阴道感染HSV-2的小鼠模型,采用形态学方法观察皱瘤海鞘提取物对小鼠生殖器疱疹的保护作用,分别用流式细胞术和ELISA方法分析小鼠外周血T细胞比率,IL-2,IFN-γ,IL-4和IL-10水平以探讨皱瘤海鞘提取物抗HSV-2感染机制。结果皱瘤海鞘提取物能减少阴道感染HSV-2小鼠生殖道的损伤,能增强小鼠CD4^+T细胞、CD8^+T细胞免疫功能,使CD4^+/CD8^+T细胞比值恢复平衡状态,能提高小鼠血清IL-2,IL-4,IL-10表达。结论皱瘤海鞘提取物在体内对HSV-2感染具有一定治疗作用,作用机制之一是通过调节小鼠的免疫功能。

皱瘤海鞘醇提物体外抗HBsAg和HBeAg的作用

目的:研究皱瘤海鞘乙醇提取物的体外抗乙肝病毒作用,并推测其作用机理。方法:用血清进行抗HBsAg、HBeAg、Anti-HBs和Anti-HBe的试验研究。结果:当海鞘醇提物的浓度>0.05mg/ml时,对HBeAg有良好的抑制作用,其抑制程度的大小与浓度有关。通过海鞘醇提物对Anti-HBs、Anti-HBe的作用结果推测,海鞘中用于抗乙型肝炎病毒的成分大致可以分为两类:一类具有类似抗体样的结果,可以通过与抗原结合形成无感染力的复合物来清除病毒;另一类则在对抗原具有明显抵制作用的同时对抗体亦有一定的抑制作用。

皱瘤海鞘神经递质和性类固醇激素含量与性腺发育成熟的关系

运用免疫组织化学和化学发光免疫分析方法研究了皱瘤海鞘(Styela plicata)神经递质多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)及其受体以及性类固醇激素含量与性腺发育成熟的关系.结果显示,DA和5-HT免疫活性定位在脑神经节中大小2种类型的神经细胞,DA免疫活性还定位在不同发育时期神经腺上皮细胞.5-HT受体免疫活性存在于脑神经节小型神经细胞和大生长期神经腺上皮细胞.在小生长期和大生长期性腺中均检测到DA、5-HT及其受体,提示DA和5-HT可能参与调节皱瘤海鞘的性腺发育.皱瘤海鞘为雌雄同体,化学发光免疫分析证实,海鞘性腺能够合成和分泌性类固醇激素,大生长期性腺中雄激素、孕激素和雌激素的含量分别为25.8±0.0、38.9±0.2和14.3±0.6pg/mg,提示性腺既是生殖组织也是内分泌组织.上述发现为证明尾索类海鞘可能像头索类文昌鱼一样,具有原始的生殖内分泌调控轴(脑神经节-神经腺-性腺)提供科学依据.

皱瘤海鞘被囊多肽的抗氧化活性

为了评估水产养殖的污损生物—海鞘的生物利用价值,研究南海海鞘优势种—皱瘤海鞘(Styela plicata)被囊多肽的体外抗氧化活性,探索不同分子量级的被囊多肽对DPPH·以及O2-·清除能力。试验经提取、超滤得4种分子量级的被囊多肽,通过其对DPPH·以及O2-·的清除率来比较4种分子量级被囊多肽的抗氧化活性。结果表明:相对分子质量小于3 KD的皱瘤海鞘被囊多肽抗氧化活性最好,其中2.5 g·L-1浓度对于DPPH·清除率达到(42.97±1.05)%,对于O2-·清除率达到(33.50±0.28)%。3~10,10~30 KD的被囊多肽抗氧化活性接近,对于DPPH·以及O2-·的清除率都在22%~24%之间。大于30 KD的被囊多肽对于2种自由基的清除率相对最低,平均分别为18.34%(DPPH·)和17.88%(O2-·)。4种分子量级的皱瘤海鞘被囊多肽在0.5~2.5 g·L-1浓度范围内都具有良好的抗氧化活性,具有进一步开发为化妆品添加成分及抗衰老保健品的潜力。