HBsAg与HBsAb中和比的研究及应用探讨

目的明确 HBsAb 与 HBsAg 中和作用不同时间两者之间的消耗比,为 HBsAg/HBsAb 确认试验的标准化奠定基础。方法将卫生部临床检验中心提供的质控血清用电化学发光法测定;并将5ng/ml HBsAg 与30mIU/mlHBsAB 质控血清不同比例37℃作用不同时间后,用电化学发光法测定 HBsAg、HBsAb 浓度的变化;留取日常工作中酶联免疫吸附试验测定病人血清,结果为 HBsAg(+)、HBsAB(-)、HBeAg(-)、HBeAb(+)、HBcAb(+)的标本30份;结果为 HBsAg(-)HBsAB(+)、HBeAg(-)、HBeAb(-)、HBcAb(-)的标本30份,将两种血清不同比例混合37℃作用不同时间用 ELISA、电化学发光法测定 HBsAg、HBsAb 浓度的变化。结果 5ng/ml、2ng/ml、0.5ng/ml HBsAg、30mIU/ml HBsAb 质控血清电化学发光法测定结果分别为116.2 COI、42.43 COI、14.02 COI、62.54 mIU/ml;ELISA 的中和比,以 HBsAg 完全被 HBsAb 中和计算即有223/774=0.283 ng HBsAg/mIU HBsAb,如果以 HBsAb 完全被 HBsAg 中和计算即有570/757=0.753 ng HBsAg/mIU HBsAb。而 ECLIA 的中和比,以 HBsAg 完全被 HBsAb 中和计算即有2304/1664=1.38 COI HBsAg/mIU HBsAb,如果以 HBsAb 完全被 HBsAg 中和计算即有13106/1577=8.31COIHBsAg/mIU HBsAb。5ng/ml HBsAg 与30mIU/mlHBsAB 质控血清37℃水浴作用1h 中和比在3.00～4.25COI HBsAg/mIU HBsAb 之间;2h 中和比在2.31～3.47COI HBsAg/mIU HBsAb 之间;24h 中和比在2.03～2.43COI HBsAg/mIUHBsAb 之间。结论 ELISA 完全中和比在0.283～0.753 ng HBsAg/mIU HBsAb;ECLIA 完全中和比在1.38～8.31 COI HBsAg/mIUHBsAb。

HBV感染患者循环miR-24的表达与作用机制

目的检测乙型肝炎病毒(HBV)感染患者血清中循环miR-24表达的变化,并探讨miR-24与HBV感染的关系及作用机制。方法收集45例HBV感染者和22例健康正常对照者的一般临床资料和血清样本,用实时定量PCR(qRT-PCR)检测两者血清中miR-24的表达;用ELISA法检测乙肝表面抗原(HBs Ag)和乙肝E抗原(HBe Ag)的含量;在Hep G2.2.15细胞中转染miR-24模拟物(mimic)48 h,qRT-PCR检测Hep G2.2.15细胞中miR-24表达;再用ELISA法检测HBs Ag和HBe Ag含量,并用qRT-PCR检测细胞中前C基因HBV RNA表达。结果 HBV感染组血清中循环miR-24的表达水平均显著低于对照组(P<0.01)。Hep G2.2.15细胞中HBs Ag和HBe Ag含量均显著高于Hep G2细胞(P<0.01)。在Hep G2.2.15细胞中转染miR-24 mimic后,miR-24的表达显著增高(P<0.01);miR-24显著抑制了细胞中HBs Ag和HBe Ag分泌(P<0.01);并抑制了细胞中前C基因HBV RNA表达(P<0.05)。结论miR-24在HBV感染患者体内表达下调,增强miR-24表达的治疗策略有望使HBV感染患者受益。

HBsAg生化性状对乙型肝炎疫苗效力影响的研究

比较研究了重组酵母表达HBsAg的P2 4亚基间二硫键结合及其还原条件下降解程度对乙型肝炎疫苗效力的影响。分别用HPLC及SDS PAGE法检测重组酵母乙型肝炎疫苗HBsAg的P2 4亚基在还原条件下降解和P2 4亚基间二硫键桥联程度 ,并检测乙型肝炎疫苗小鼠体内效力 (ED50 值 )和体外相对效力 (RP) ,分析HBsAg的P2 4亚基间二硫键结合及其还原条件下降解程度对乙型肝炎疫苗效力的影响。结果表明HBsAgP2 4亚基还原条件下降解成分Sub P2 4的相对含量在 5 .2 %～ 31%间、P2 4亚基间二硫键桥联型HBsAg颗粒相对含量在 41.9%～ 71.8%范围内与疫苗的实验室效力无关。所生产重组酵母乙型肝炎疫苗HBsAg的P2

乙型肝炎病毒阳性血清体外感染Hep G_2细胞的实验研究

目的 建立HBV阳性血清体外感染HepG2 细胞的实验方法。方法 培养HepG2 细胞传至6孔板中,2 4h后进行HBV阳性血清体外感染HepG2 细胞的实验。感染组用HBV阳性血清,阴性对照组用HBV阴性血清,空白对照组用DMEM培养基。实验开始后HepG2 细胞继续孵育2 4h ,而后用0 0 1mol LPBS清洗8次后加入2 %DMEM培养液。收集PBS第8次洗液,收集PBS洗后每隔12h各孔细胞培养上清。ELISA检测细胞培养上清中的HBsAg。PCR检测细胞培养上清和HepG2 细胞中的HBVDNA。结果 感染组在PBS洗后12h的细胞培养上清中ELISA检测HBsAg呈阳性。PCR检测显示感染组细胞培养上清和HepG2 细胞中HBVDNA呈阳性,阴性对照组和空白对照组HBVDNA呈阴性。结论 HBV阳性血清进行HBV感染体外培养HepG2 细胞是可行的。