Subfatin脂肪特异性敲除动物模型的建立及胰岛素敏感性评价

目的Subfatin（又名Metrnl）是近年来发现的一个新的脂肪因子,能够被机体内多种脂肪组织表达、分泌.它在皮下白色脂肪中高丰度的表达,提示Subfatin可能参与调节白色脂肪的生物学功能和能量代谢.方法通过Cre/LoxP重组酶系统特异性敲除脂肪组织Subfatin的表达,成功构建了Subfatin脂肪特异性敲除小鼠模型（Subfatin^-/-）.与对照野生型小鼠（WT）相比,Subfatin^-/-脂肪组织中Subfatin的表达下调了57%.对WT和Subfatin^-/-小鼠给予正常饮食（NCD）和高脂饮食（HFD）喂养,使用葡萄糖耐量实验（GTT）和胰岛素耐量实验（ITT）对小鼠的胰岛素敏感性进行评估.结果正常饮食和高脂饮食喂养的WT和Sub-fatin^-/-小鼠在体重、摄食量以及能量代谢水平上均没有显著性差异.在高脂饮食喂养情况下,Subfatin^-/-小鼠出现的胰岛素抵抗明显地强于WT小鼠,这种差异在正常饮食情况下没有被观察到.结论脂肪组织缺乏Subfatin加剧了高脂饮食诱导的胰岛素抵抗.

Subfatin调节脂肪组织重构

目的Subfatin,又名Metrnl,是本室近年来发现的一个新的脂肪因子,其在皮下脂肪组织中高表达.我们前期的研究发现,脂肪来源的Subfatin可以缓解高脂或肥胖诱导的胰岛素抵抗,然而其机制还不清楚.本研究拟探讨脂肪组织在Subfatin增强的系统性胰岛素敏感性中的作用.方法在高脂饲养的Subfatin脂肪特异性过表达和敲除小鼠模型上,通过Westernblot方法,在主要糖代谢组织肝脏、肌肉、白色脂肪、棕色脂肪中检测胰岛素诱导的AKT磷酸化;通过ELISA访求,检测脂肪组织中炎症因子TNF-α,IL6的表达情况;运用HE染色与形态学软件分析,检测脂肪组织形态与脂肪细胞大小.结果过表达和敲除小鼠模型的结果都表明,Subfatin增强了白色脂肪组织中胰岛素诱导的AKT磷酸化,但对肝脏、肌肉、棕色脂肪没有影响;Subfatin减少了白色脂肪组织中TNF-α的含量,但没有影响IL6;形态学上,Subfatin减少了炎症细胞浸润,扩大白色脂肪细胞.结论Subfatin促进了脂肪组织重构,减低了脂肪组织炎症,从而参与改善了全身的胰岛素敏感性.

脂肪分泌Subfatin对机体脂质代谢影响的研究

目的探讨脂肪因子Subfatin（又名Metrnl）对机体脂质代谢,特别是甘油三酯代谢的影响.方法1、正常饮食和高脂饮食条件下,检测Subfatin脂肪特异性过表达小鼠（Fabp4-Subfatin）血清Subfatin的水平.2、高脂饮食条件下,检测Fabp4-Subfatin小鼠TC、HDL-C、LDL-C和TAG血清水平.3、正常饮食时,甘油三酯过载实检测Fabp4-Subfatin小鼠对甘油三酯的清除作用.结果1、正常饮食和高脂饮食时,Fabp4-Subfatin小鼠Subfatin水平高于野生型,但差异没有统计学意义.2、高脂饮食时,与野生型相比,Fabp4-Subfatin小鼠TC、HDL-C和LDL-C无明显变化,但血清TAG水平明显降低.3、甘油三酯过载实验中,Fabp4-Subfatin小鼠血清TAG水平明显低于野生型.结论脂肪分泌的Subfatin能明显增强血清中TAG的清除,降低血TAG水平,改善小鼠脂质代谢.

Subfatin脂肪特异性过表达小鼠的构建及胰岛素敏感性的研究

目的该室前期利用限食动物模型筛选到一个新脂肪因子Subfatin.初步研究结果表明,Subfatin可能参与脂肪功能的调节,并影响肥胖及机体代谢.为进一步研究其功能,本研究拟构建Subfatin脂肪特异性过表达小鼠模型,并研究其胰岛素敏感性的改变,从而阐明Subfatin在代谢平衡中的作用.方法本研究首先利用FABP4启动区域,构建了Subfatin脂肪组织特异性过表达载体,采用显微注射法将线性化后的载体注射进小鼠单细胞受精卵中,再将受精卵移植入假孕母鼠体内生长发育,选出阳性首建鼠扩大繁殖,并在mRNA与蛋白水平用多种实验方法对转基因小鼠进行表达验证.最后,利用葡萄糖耐量实验（GTT）、胰岛素耐量实验（ITT）、高胰岛素性正糖钳夹实验（HIEG）对转基因小鼠的胰岛素敏感性进行了研究.结果该文成功构建了Subfatin脂肪特异性过表达小鼠模型,并发现高脂饮食饲养条件下,转基因小鼠的胰岛素敏感性明显高于野生型小鼠.结论脂肪组织Subfatin能对抗高脂诱导的胰岛素抵抗.

妊娠期糖尿病患者母血及脐血中subfatin和spexin水平的变化及其临床意义

目的探讨妊娠期糖尿病患者母血、脐血中subfatin和spexin水平的变化及其临床意义。方法前瞻性选取2019年1月至2020年3月同济大学附属第一妇婴保健院门诊建卡以及住院分娩的妊娠期糖尿病的妇女75例,及其所分娩的新生儿75例,为妊娠期糖尿病组;同时在选取糖耐量正常妊娠期妇女及其所分娩的新生儿各80例为对照组。测定两组产妇的葡萄糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、尿酸水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定母血、脐血中的subfatin和spexin水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析母血、脐血中subfatin和spexin在妊娠期糖尿病中诊断的价值。结果妊娠期糖尿病组患者的母血、脐血葡萄糖、胰岛素、HOMA-IR、TC和TG水平为(5.86±0.42) mmol/L、(5.76±0.63)μU/mL、2.47±1.21、(5.37±1.19) mmol/L、(1.29±0.43) mmol/L,均显著高于对照组[(5.37±0.33) mmol/L、(3.97±0.45)μU/mL、1.16±0.78、(4.96±0.919) mmol/L、(0.86±0.29) mmol/L],差异均有统计学意义(P <0.05),妊娠期糖尿病组中LDL-C、HDL-C、尿酸水平与对照组相比,差异无统计学意义(P> 0.05);妊娠期糖尿病组中口服糖耐量试验前、分娩结束时母血、脐血subfatin水平为(14.27±4.52)、(7.54±1.17)、(8.59±2.23) ng/mL,均明显高于对照组[(4.13±0.93)、(3.26±0.78)、(6.29±1.27) ng/mL],差异均有统计学意义(P <0.05);妊娠期糖尿病组患者口服糖耐量试验前、分娩结束时母血、脐血spexin水平为(2.55±0.48)、(1.94±0.39)、(1.87±0.25) ng/mL,均显著低于对照组[(3.92±0.99)、(3.17±0.82)、(2.94±0.73) ng/mL],差异均有统计学意义(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,母血subfatin和spexin、脐血中subfatin和spexin诊断妊娠期糖尿病的曲线下面积为0.924(95%CI:0.875~0.934,P <0.001)、0.901(95%CI:0.849~0.9515,P <0.001)、0.858(95%CI:0.796~0.920,P <0.001)和0.799(95%CI:0.724~0.873,P <0.001),灵敏度为86.49%、81.57%、78.38%和75.68%,特异度为72.75%、75.68%、84.59%和89.24%。结论妊娠期糖尿病患者母血、脐血中subfatin水平升高,spexin降低,可以作为诊断妊娠期糖尿病的分子标志物。

Subfatin is a novel adipokine and unlike meteorin in adipose and brain expression

Aim Adipose tissue releases adipokines that play important roles in metabolic and cardiocerebro- vascu- lar homeostasis. This study was to discover novel adipokines using caloric restriction model. Methods Adipokine candidates were captured by gene array and bioinformatics analysis and verified by preparation of recombinant pro- tein and antibody. Results We established a potential secreted protein database containing 208 genes and identi- fied a novel adipokine, Subfatin, that was the highest expressed in subcutaneous fat of both rodents and humans a- mong 15 detected tissues. The secreted mammalian Subfatin was a glycosylated protein. Subfatin was located dif- fusely throughout the adipose tissue except lipid droplets, with comparable expression between adipocytes and stro- real cells, but much lower expression in macrophages than adipocytes. Subfatin was downregulated in white adipose tissue of caloric restriction rats, whereas dramatically upregulated during white adipocyte differentiation as well as in white adipose tissue of diet-induced obese mice. Subfatin was annotated as Meteorin-like （Metrnl） in public data- bases, a similar transcript of Meteorin （Metrn, also known as glial cell differentiation regulator）. Meteorin dis- played a brain-specific expression and was scarce in various adipose tissues, in contrast to the tissue expression pat- terns of Subfatin. Conclusions Subfatin is a novel adipokine regulated by adipogenesis and obesity, with tissue distribution different from its homologue Meteorin.

血清subfatin与2型糖尿病患者微血管病变的相关性分析

目的分析血清脂肪因子subfatin与2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者微血管病变的相关性。方法将2017-11/2020-11月作者医院收治的180例T2DM患者资料,根据患者是否出现微血管病变分为病变组(n=78)、无病变组(n=102),同时选择同期来院进行体检的90名健康人群作为对照组。收集纳入对象一般资料,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清subfatin水平。采用受试者工作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清脂肪因子subfatin对T2DM患者微血管病变的预测价值。Logistic回归分析探讨影响T2DM患者微血管病变的相关因素。结果病变组、无病变组患者血清subfatin水平均明显低于对照组(P<0.05),且病变组血清subfatin水平低于无病变组(P<0.05)。经ROC曲线结果显示subfatin的曲线下面积(area under the curve,AUC)、灵敏度、特异度分别为0.838、82.6%、77.6%,且均高于收缩压、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA_(1)c)、血肌酐(serum creatinine,Scr)。Logistic回归分析结果得出收缩压、HbA_(1)c、Scr、subfatin均为影响T2DM患者并发微血管病变的危险因素(P<0.05)。结论血清subfatin水平在T2DM并发微血管病变患者中降低,对早期诊断T2DM并发微血管病变具有一定的临床价值。血清subfatin有望用作评估T2DM患者并发微血管病变的生物标志物。