组织工程颌下腺细胞与胶原海绵复合培养的实验研究

目的研究大鼠颌下腺细胞在胶原海绵材料支架上的生长情况。方法取8d龄Wistar大鼠颌下腺细胞,传代培养至第2代细胞,按2×104/ml注射法接种于5mm×5mm×2mm胶原海绵表面进行培养。术后1、2、3周行组织学观察、扫描电镜观察胶原海绵上接种颌下腺细胞形态结构特点;取复合培养3周的颌下腺细胞行免疫组织化学细胞角蛋白(cytokratin8.13,CK8.13)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscular actin,α-SMA)染色,透射电镜观察细胞超微结构,鉴定细胞来源。分别取复合培养1d,1、2、3周的培养上清,用Amano法测定淀粉酶含量,检测与胶原海绵复合培养的颌下腺细胞功能。结果细胞接种后第1周细胞分散于材料表面,无细胞突起形成;第2周细胞数量有所增加、细胞突起形成并锚定于胶原海绵表面;第3周时附着的细胞数目增多,可见细胞表层有丝状纤维形成。免疫组织化学染色观察复合培养的颌下腺细胞上皮细胞特异性抗体CK8.13呈强阳性,肌上皮细胞特异性抗体α-SMA染色呈阳性。透射电镜下颌下腺上皮细胞表面可见微绒毛、胞浆皱褶和细胞顶部的酶原颗粒,胞核大卵圆形,胞质内见线粒体和粗面内质网。随着接种后培养时间的延长,与胶原海绵复合培养的颌下腺细胞分泌的淀粉酶含量有不同程度的增加。结论胶原海绵具有良好的细胞相容性,颌下腺细胞与胶原海绵复合培养,细胞可保持增殖分化能力及分泌功能,有望成为颌下腺细胞的载体应用于组织工程支架材料。

表面修饰化材料对颌下腺种子细胞生长影响的研究

目的探讨应用表面修饰技术处理的生物支架材料与颌下腺种子细胞复合培养研究对种子细胞在支架材料上的附着、生长和分泌功能的影响。方法选用明胶海绵36块,均分为3组。A组:明胶海绵材料与鼠颌下腺细胞复合培养物;B组:层黏连蛋白(laminin,LN)表面修饰的明胶海绵材料与鼠颌下腺细胞复合培养物;C组:转化生长因子(TGF-β3)表面修饰的明胶海绵材料与鼠颌下腺细胞复合培养物。各组在体外进行复合培养,3、7和15 d各时间点行组织学观察和扫描电镜观察,15 d行免疫组织化学鉴定细胞来源,测定上清淀粉酶含量并进行比较。结果组织学和扫描电镜观察见培养第3天各组细胞分散于材料表面,无细胞突起形成;第7天见B组细胞数量明显多于A组和C组,细胞突起形成并锚定于胶原海绵表面;第15天,B组细胞数量仍多于A组和C组,并可见细胞之间有触突联系和腺管样结构形成。免疫组织化学染色观察复合培养的颌下腺细胞Brdu呈强阳性。随着接种后培养时间的延长,各组颌下腺细胞分泌的淀粉酶含量均有不同程度的增加。15 d,C组淀粉酶含量明显高于A组和B组(P<0.05)。结论应用细胞外基质和细胞因子成分对生物支架材料进行表面修饰,可促进颌下腺种子细胞在材料上的附着、增殖和分泌,有利于组织工程化颌下腺研究的进一步成功。

SD大鼠颌下腺腺泡细胞培养及胶原海绵的细胞相容性

【目的】研究SD大鼠颌下腺腺泡细胞体外培养方法以及和胶原海绵的细胞相容性,探讨胶原海绵应用于涎腺组织工程支架材料的可行性。【方法】取新生SD大鼠颌下腺组织,胰酶消化后将细胞于适宜的体外环境培养、纯化、鉴定,并将鉴定好的颌下腺腺泡细胞移植到胶原海绵上,采用DAPI进行特异性的核染色,荧光显微镜下观察腺泡细胞与胶原海绵的相容情况,评价腺泡细胞与胶原海绵的相容性。【结果】体外培养的颌下腺腺泡细胞经纯化后能够分泌特异性的淀粉酶,免疫细胞化学淀粉酶抗体阳性染色,并能在胶原海绵上正常增殖。【结论】体外培养的颌下腺腺泡细胞具备腺泡细胞的生物学特征并与胶原海绵有很好的相容性,有望将胶原海绵作为组织工程化涎腺组织的支架材料之一。

正常大鼠颌下腺上皮细胞极性培养

目的为了探索简便、有效的涎腺上皮细胞的体外培养方法。方法采用自制鼠尾胶原胶为底物．在培养液中加入一些促进上皮细胞生长分化的刺激物，对出生一天的Wistar大鼠颌下腺上皮细胞进行原代培养。通过相差显微微镜、光镜及透射电镜对上皮细胞的生长及分化进行观察和研究。结果培养的大鼠颌下腺上皮细胞呈多层生长且为极性分化，保留了腺泡导管分泌单位的三种上皮成份。结论本研究所采用的方法是一种简便、可行、有效的涎腺上皮细胞的体外培养方法，其中自制胶原胶是本研究培养成功的关键。

表面修饰化明胶海绵支架与颌下腺种子细胞复合培养的研究

目的应用表面修饰技术处理的明胶海绵与颌下腺种子细胞复合培养,研究表面修饰技术对颌下腺种子细胞在支架材料上附着、生长和分泌功能的影响。方法选用明胶海绵36块,随机分A、B、C 3组,每组12块。分别用单纯明胶海绵、层粘连蛋白表面修饰的明胶海绵材料、转化生长因子β3表面修饰的明胶海绵材料与鼠颌下腺细胞在体外复合培养。培养后第3、7、15天行组织学观察、扫描电镜观察,第15天行免疫组织化学鉴定细胞来源,测定上清淀粉酶含量。结果组织学和扫描电镜观察可见培养后第3天各组细胞分散于材料表面,无细胞突起形成;第7天B组细胞数量明显多于A组和C组,细胞突起形成并锚定于胶原海绵表面;第15天B组细胞数量仍多于A组和C组,并可见细胞之间有触突联系和腺管样结构形成。免疫组织化学染色观察复合培养的颌下腺细胞B rdU呈强阳性。随着接种后培养时间的延长,各组颌下腺细胞分泌的淀粉酶含量均有不同程度的增加。第15天C组淀粉酶含量明显高于A组和B组(P<0.05)。结论应用层粘连蛋白和转化生长因子β3对明胶海绵进行表面修饰,可促进颌下腺种子细胞在材料上的附着、增殖和分泌功能。

两种支架材料与颌下腺细胞体外复合培养的比较研究

目的将颌下腺细胞分别与颌下腺脱细胞基质(SGAM)生物衍生材料及胶原海绵体外复合培养,比较两种不同支架材料的生物相容性。方法用传代培养第2代的颌下腺细胞分别与SGAM生物衍生材料及胶原海绵体外复合培养,在一定时间通过扫描电镜观察细胞在不同支架材料上的生长情况。结果颌下腺细胞在SGAM生物衍生支架材料上,多数附着在支架材料的孔隙内或其边缘,数量较多,大小不等,形态各异,表面凸凹不平,突起丰富;表面结构似“银耳”状。而细胞在胶原海绵支架材料上大多附着在材料表面,数量较少,突起较少。结论颌下腺脱细胞基质支架材料与胶原海绵支架材料相比具有良好的生物相容性,是一种较为理想的颌下腺组织工程用支架材料。

表皮生长因子对颌下腺细胞在胶原海绵黏附的影响

目的 探讨表皮生长因子 (EGF)对颌下腺细胞在胶原海绵支架上黏附的影响。方法体外原代培养SD鼠颌下腺细胞 ,并传至第 2代 ,将其分别接种于含表皮生长因子修饰的胶原海绵上 ,和不含表皮生长因子修饰的胶原海绵上。于接种后 7d取材 ,进行细胞计数计算细胞贴附率 ;苏木素 伊红 (HE)染色 ,扫描电镜观察等检测。结果 实验组含有EGF ,细胞贴附率为 73 .1% ,对照组不含EGF ,贴附率为 62 .8% (P <0 .0 5 ) ,HE染色及扫描电镜观察也证实 :实验组的颌下腺细胞在胶原海绵支架上黏附 ,增殖及分化均优于对照组。结论 EGF对颌下腺细胞在胶原海绵上的黏附有促进作用。