补肾活血法治疗帕金森病的用药规律研究

目的 基于中医传承计算平台研究补肾活血法治疗帕金森病的临床用药规律。方法 选择2009年1月至2020年12月我院中医科运用补肾活血法治疗帕金森病门诊处方,共收集获得处方591首,运用中医传承计算平台分析其用药规律。结果 591首处方涉及中药225味,功效以补虚类、活血化瘀类和清热类药物为主;四气以温、寒、平为主;五味以苦、甘、辛为主;归经以肾经、肝经、心经、脾经为主。用药频数≥120次的中药有20味,常用药对有“肉苁蓉-当归”、“丹参-川芎”等。补肾活血法临床治疗帕金森病的基本方组成为肉苁蓉、山茱萸、知母、川芎、石菖蒲等。聚类分析发现,五组核心药物组合分别发挥益气填精、滋阴清热、活血通络、豁痰开窍、通腑泄热之功效。结论 补肾活血法治疗帕金森病的常用中药、药对和基础方加深了对补肾活血法临床用药体系的认识。

鱼藤酮对大鼠中脑黑质组织的毒性

目的研究鱼藤酮对大鼠中脑黑质组织的毒性作用。方法将24只SD大鼠随机分为4组,每组6只,即空白对照组、溶剂对照组(DMSO-PEG-300)、鱼藤酮染毒组(1.0和1.5mg/kg)。染毒大鼠每日背部皮下注射鱼藤酮溶液,染毒时间为28d。分离中脑黑质组织,应用光镜、电镜观察黑质组织多巴胺神经元形态、突触结构及髓鞘的改变;并检测中脑黑质组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及丙二醛(MDA)和谷胱苷肽(GSH)含量。结果大鼠自主活动减少,出现类帕金森病症候群特征;中脑黑质组织多巴胺神经元形态的改变主要是突触结构异常,突触囊泡数量增多,髓鞘变性等。与空白对照组比较,染毒组黑质组织MDA含量升高(P<0.01),GSH含量降低(P<0.01),SOD和GSH-Px活力降低(P<0.01),差异均有统计学意义。结论鱼藤酮可损伤多巴胺神经元,诱导大鼠出现类帕金森样症状,氧化应激可能参与了鱼藤酮大鼠中脑黑质组织的毒性作用。

臂旁核和延髓头端腹外侧区在黑质升压效应中的作用

本实验室观察到黑质具有升压效应。用L-谷氨酸钠微量注入黑质可使血压升高,此效应可被DA受体阻断剂氟哌啶醇(Halo)微量注入臂旁核加压区基本阻断。我们过去的工作证明延髓头端腹外侧区(RVL)及其内的α-受体中介臂旁核的加压效应,本实验将酚妥拉明注入RVL能明显衰减黑质的加压效应,而将Halo注入RVL加压区对黑质加压效应无明显影响。以上结果提示臂旁核-RVL(α-受体)加压系统参与黑质加压效应。

中西药合用对异动症大鼠行为学和氧化应激的影响

目的观察中西药合用对异动症(LID)大鼠行为学和氧化应激的影响。方法采用6-羟基多巴胺注射于大鼠脑右侧黑质造成偏侧帕金森病(PD)模型,进一步对PD大鼠予以左旋多巴/苄丝肼制作LID模型。将LID造模成功的大鼠随机分为2组,西药组6只予左旋多巴/苄丝肼10mg/(kg·d),每日2次腹腔注射;中西药组6只在西药组治疗基础上予熟地平颤汤颗粒剂、蝎蜈胶囊(将4包熟地平颤汤颗粒和10粒蝎蜈胶囊溶于100mL0.9%氯化钠注射液中,使每mL含生药1.28g)9mL/kg,每日1次灌胃,连续4周;同时设正常对照组6只,予0.9%氯化钠注射液2mL,每日1次灌胃。测定异常不自主运动(AIM)评分情况,黑质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。结果中西药组与西药组第3、4周AIM评分比较差异有统计学意义(P<0.05),中西药组低于西药组;中西药组、西药组与正常对照组比较,MDA含量均明显升高(P<0.05),SOD、GSH-Px活性均明显降低(P<0.05);中西药组与西药组比较,MDA含量降低(P<0.05),SOD、GSH-Px活性均有升高(P<0.05)。结论中西药合用有明显提高LID大鼠机体抗氧化能力和改善LID症状的作用。目的观察中西药合用对异动症(LID)大鼠行为学和氧化应激的影响。方法采用6-羟基多巴胺注射于大鼠脑右侧黑质造成偏侧帕金森病(PD)模型,进一步对PD大鼠予以左旋多巴/苄丝肼制作LID模型。将LID造模成功的大鼠随机分为2组,西药组6只予左旋多巴/苄丝肼10mg/(kg·d),每日2次腹腔注射;中西药组6只在西药组治疗基础上予熟地平颤汤颗粒剂、蝎蜈胶囊(将4包熟地平颤汤颗粒和10粒蝎蜈胶囊溶于100mL0.9%氯化钠注射液中,使每mL含生药1.28g)9mL/kg,每日1次灌胃,连续4周;同时设正常对照组6只,予0.9%氯化钠注射液2mL,每日1次灌胃。测定异常不自主运动(AIM)评分情况,黑质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。结果中西药组与西药组第3、4周AIM评分比较差异有统计学意义(P<0.05),中西药组低于西药组;中西药组、西药组与正常对照组比较,MDA含量均明显升高(P<0.05),SOD、GSH-Px活性均明显降低(P<0.05);中西药组与西药组比较,MDA含量降低(P<0.05),SOD、GSH-Px活性均有升高(P<0.05)。结论中西药合用有明显提高LID大鼠机体抗氧化能力和改善LID症状的作用。

色钉菇粗多糖对小鼠DA能神经元MPTP损伤的保护作用

以C57BL/6J小鼠为实验材料,研究色钉菇粗多糖对多巴胺能神经元损伤的保护作用,并用体外实验方法测定其抗氧化活性。用MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)方法复制了帕金森病小鼠模型,模型复制前,预先给予小鼠100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg不同剂量的色钉菇粗多糖,通过行为学检测方法和免疫组化技术观察小鼠的行为变化以及黑质中多巴胺能神经元的数量变化;用抑制小鼠肝脂质过氧化能力的方法测定色钉菇粗多糖的抗氧化活性。结果显示,预先给予200mg/kg和400mg/kg剂量的色钉菇粗多糖能显著地改善帕金森病模型小鼠的行为症状,并能显著地降低MPTP所致的小鼠多巴胺能神经元的凋亡,这可能与该多糖的抗氧化活性有关。提示色钉菇多糖有开发成防治帕金森病药物的应用前景。

3-硝基丙酸预处理对黑质纹状体THmRNA基因表达的影响

目的：探讨3-硝基丙酸（3NP）预处理对黑质、纹状体部位酪氨酸羟化酶（TH）基因表达的影响。方法：20只雄性SD大鼠随机分为对照组、3NP组、帕金森病（PD）组及化学预处理（CPC）组。建立6-OHDA损毁PD大鼠模型。造模前24h给予3NP（20mg／kg，腹腔注射），采用RT-PCR技术检测术后2周黑质、纹状体THmRNA基因表达水平。结果：对照组、3NP组及PD组黑质THmRNA基因表达较纹状体部位明显增强（P〈0.01）；纹状体THmRNA表达，CPC组较其他各组显著增强（P〈0．01），对照组、3NP组及PD组组间同部位比较，THmRNA基因表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：3NP预处理能够促进纹状体THmRNA基因转录，并可能通过转录后水平调节促进黑质THmRNA蛋白表达。

五子衍宗丸对帕金森病小鼠的神经保护及抗炎作用

目的:探析五子衍宗丸对帕金森病(PD)小鼠的神经保护及抗炎作用。方法:24只C57BL/6雄性小鼠随机分为模型组和五子衍宗丸组,每组12只。腹腔注射MPTP建立小鼠PD模型,同时模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,五子衍宗丸组灌胃五子衍宗丸溶液,持续2周。采用旷场和步态实验观察小鼠行为学表现;免疫组织化学染色观察中脑黑质TH阳性神经元;ELISA检测脑组织中细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-10水平。结果:与模型组比较,五子衍宗丸组小鼠移动总距离及平均速度均显著增加(P<0.01),休息时间和脚步角度显著减少(P<0.05),自主活动量增多;形态学显示中脑黑质TH阳性细胞数显著增多(P<0.05);炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05,P<0.01),抗炎因子IL-10水平显著升高(P<0.01)。结论:五子衍宗丸可明显改善PD小鼠的行为学,保护黑质多巴胺能神经元,其作用机制可能与抑制脑内炎症反应有关。

吗啡诱发的大鼠强迫性觅药动机及中脑神经元活动性改变

目的考察不同剂量吗啡用药模式下大鼠的行为敏感化表达是否受到前期用药环境的调控，探索行为敏感化表达不受前期用药环境影响的动物模型及其中脑区域神经元的活动性改变。方法按吗啡给药方式将大鼠分为3组：累加大剂量吗啡前处理组（HD组）、固定小剂量吗啡前处理组（LD组）和盐水前处理组（S组）。戒断后，在“非用药环境”中考察大鼠经吗啡点燃后的水平运动和刻板运动。随后进行腹侧被盖区（VTA）和黑质（SN）的Fos蛋白和酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）双重免疫组织化学染色。结果10mg／kg吗啡点燃后，HD组水平运动和刻板运动均显著高于S组（水平运动和刻板运动，HD组：26907±2003和129．6±6．5；S组：14962±1888和89．9±10．9，均P〈0．01）。与S组比较，HD组在SNr整体及SNr外侧部Fos蛋白阳性神经元均显著增高（SNr和SNr外侧部Fos阳性神经元，HD组：29．14±5．27和9．83±2．84；S组：17．29±1．51和2．06±0．45；均P〈0．05）。结论相对于固定小剂量吗啡用药，累加大剂量吗啡用药诱导的大鼠行为敏感化不受前期用药环境调控；SNr尤其是其外侧部的神经元活动性增加与累加大剂量吗啡用药大鼠的觅药动机表达有重要关系。