长链非编码RNASUCLG2-AS1通过调节微小RNA-491-5p对非小细胞肺癌细胞增殖和免疫逃逸的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)SUCLG2-AS1对非小细胞肺癌细胞增殖和免疫逃逸的影响及对微小RNA-491-5p(miR-491-5p)的调节作用。方法:通过Cancer LncRNA Census数据库分析SUCLG2-AS1在非小细胞肺癌组织中的表达及SUCLG2-AS1表达量与非小细胞肺癌患者生存期的关系。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SUCLG2-AS1在非小细胞肺癌株A549、PG49、H1975、H2170和人正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B中表达量的变化。培养H1975细胞并分为si-NC组和si-SUCLG2-AS1组。集落实验和流式细胞术检测H1975细胞的增殖能力和细胞周期。蛋白质印迹(Western blot)检测H1975细胞免疫相关蛋白细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)和细胞周期相关蛋白细胞周期依赖性蛋白激酶3(Cdk3)、细胞周期蛋白C(Cyclin C)、细胞周期依赖性蛋白激酶2(Cdk2)的表达。LncRMap生物信息学软件预测SUCLG2-AS1可结合的微小RNA。RNA pull-down实验验证SUCLG2-AS1与miR-491-5p的直接结合。通过qRT-PCR检测SUCLG2-AS1对miR-491-5p表达的调节作用。结果:与正常肺组织比较,非小细胞肺癌组织中SUCLG2-AS1表达升高(P<0.01)。SUCLG2-AS1高表达的非小细胞肺癌患者生存期短于SUCLG2-AS1低表达患者(P<0.01)。与BEAS-2B细胞比较,非小细胞肺癌株中SUCLG2-AS1表达升高,H1975细胞中SUCLG2-AS1表达升高最明显(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-SUCLG2-AS1组H1975细胞增殖能力降低,G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例减少,G2/M期细胞比例减少(均P<0.01)。与si-NC组比较,si-SUCLG2-AS1组H1975细胞中免疫相关蛋白PD-L1、RORγt表达减少,细胞周期相关蛋白Cdk3、Cyclin C、Cdk2表达减少(均P<0.01)。SUCLG2-AS1靶向直接结合miR-491-5p(均P<0.01)。与si-NC组比较,si-SUCLG2-AS1组H1975细胞中miR-491-5p表达上升(P<0.01)。结论:沉默SUCLG2-AS1可能通过上调miR-491-5p表达抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和免疫逃逸。

四君子汤对慢性心衰大鼠心肌组织蛋白质组学影响的研究

目的:探讨四君子汤对慢性心衰大鼠心肌组织蛋白质表达变化的影响。方法:SD雄性大鼠42只,随机取6只作为正常组,其余36只复制慢性心力衰竭大鼠模型,造模成功后,分为四君子汤高、低剂量组(11.88,2.97 g·kg^(-1)·d^(-1)),卡托普利组(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)),正常组和模型组分别给予相同体积生理盐水,连续灌胃给药1月。分别留取各组左心室组织,双向凝胶电泳分离心肌蛋白,分析差异显示的蛋白,并对有显著差异的蛋白点进行胶内酶切和质谱鉴定。结果:与模型组比较,四君子汤组有31种蛋白质表达上调,28种蛋白质表达下调,各选取8个差异显著(Volume值相差≥1.5倍)的蛋白进行质谱鉴定,通过整合去重,鉴定出4个蛋白:与能量代谢相关的Suclg2蛋白、丙酮酸脱氢酶复合体;与心肌细胞收缩功能相关的肌球蛋白轻链2;与心肌细胞重构相关的丝氨酸蛋白酶抑制剂A3N。结论:四君子汤可调节慢性心衰大鼠心肌组织多种蛋白表达,可能通过调节能量代谢、减少心肌重构、提高收缩功能而改善心功能。