POMP与SuFu相互作用调控Hedgehog信号通路的活性

Hedgehog信号通路在胚胎发育、组织再生中发挥重要的作用,且与癌症发生发展密切相关.其胞内调控组分Suppressor of Fused(SuFu)蛋白通过结合转录因子Gli(s),负调控该信号通路,但其作用的分子机制仍不甚清楚.在本项研究中,以人SuFu作为诱饵蛋白,利用酵母双杂交技术成功地筛选到1个新的相互作用因子—蛋白酶体成熟蛋白(POMP).通过免疫共沉淀、体外GST pull-down和免疫细胞化学实验验证其相互作用.为了探究POMP与SuFu的相互作用对Hedgehog信号通路的影响,构建了POMP的过表达质粒和干扰质粒(miR-RNAi)以及转录因子Gli活性检测系统,即荧光素酶报告基因法,结果显示,过表达SuFu蛋白时POMP正调控Hedgehog信号通路,而下调POMP的表达则抑制Gli的活性.该研究结果揭示了POMP新的生物学功能,为阐明Hedgehog信号通路的具体分子机制提供了新的线索.

Hedgehog信号通路抑制因子SUFU在肿瘤中的作用机制研究进展

刺猬信号通路(Hh)首先在普通果蝇中被鉴定,是一种高度保守的信号从细胞膜传递到细胞核的进化途径,其传导失调被证实与一系列恶性肿瘤的发生、发展相关。丝氨酸/苏氨酸激酶Fused抑制物(Sufu)是Hh信号通路的关键调控因子,主要通过调节该通路的末端转录因子胶质瘤相关癌基因同源物(Gli)的表达来抑制Hh信号通路,起肿瘤抑制因子作用。本文主要就Sufu调控Hh信号通路的分子机制以及Sufu蛋白自身活性调控的研究进行综述,旨在为未来肿瘤的诊疗和预防提供依据。

豆豉、腐乳蛋白质降解物限量标准研究

目的:测定豆豉、腐乳中包括挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)值、三甲胺、硫化氢、生物胺在内的蛋白质分解产物含量,确定豆豉、腐乳中蛋白质的腐败程度,为生产更安全的豆豉、腐乳等发酵豆制品提供依据。方法:参考GB/T 5009.44—2003《肉与肉制品卫生标准的分析方法》、GB/T 5009.179—2003《火腿中三甲胺氮的测定》、GB/T 16489—1996《水质:硫化物的测定:亚甲基蓝分光光度法》及其他文献分别对样品中TVB-N值、三甲胺及硫化氢等进行测定。结果:豆豉中TVB-N值、总生物胺、腐胺、三甲胺及硫化氢的含量分别为8.20~372.72 mg/100 g、15.67~2 057.56 mg/kg、ND^276.03 mg/kg、0.26~10.43 mg/100 g及1.22~27.27 mg/kg;腐乳中的含量分别为95.33~652.94 mg/100 g、11.38~2 406.95 mg/kg、11.38~1 147.32 mg/kg、0.42~4.31 mg/100 g及0.27~3.72 mg/kg。结论:腐乳、豆豉中TVB-N、三甲胺、硫化氢、生物胺等腐败变质物质大量生成,影响此类食品的可食用性。可初步将TVB-N值、腐胺、总生物胺及三甲胺含量作为腐乳的腐败变质标志物;TVB-N值、总生物胺及三甲胺含量作为豆豉的腐败变质标志物,结合生产环节确定此类物质的限定值。

腐乳生产过程中食盐对蛋白质、脂肪水解的影响

文中研究了腐乳生产过程中食盐对蛋白质及脂肪水解的作用及对总酸、游离氨基态氮和游离脂肪酸的影响。实验结果显示 ,食盐含量低的样品蛋白质水解较快 ,游离氨基态氮的增长较快 ,食盐含量高的样品则反之。总酸及游离氨基态氮的含量随着腐乳的后期发酵而呈增加趋势 。

Hh信号通路在大肠癌发生发展作用机制及临床表达意义分析

目的分析Hh信号通路在大肠癌发生发展作用机制及临床表达意义。方法选取大肠癌患者共120例;大肠腺瘤共100例;大肠正常的黏膜标本选取同期在消化内镜下的活检样本,共100例;应用免疫组化检测Hh的信号通路内Glil与Su Fu蛋白表达情况,并分析它们与患者临床参数间的关系。结果大肠癌的组织标本内Su Fu阳性表达率显著低于大肠腺瘤和正常大肠黏膜组织,差异有统计学意义(P <0. 05);肿瘤分化程度、性别、病理类型和年龄与Su Fu表达无相关性(P> 0. 05),发病部位、临床分期和浸润深度与Su Fu表达显著相关(P <0. 05);正常大肠黏膜内Glil阳性表达率显著低于大肠腺瘤与大肠癌,差异有统计学意义(P <0. 05),大肠腺瘤内Glil表达率略低于大肠癌,但差异无统计学意义(P> 0. 05);肿瘤分化程度、性别、病理类型、年龄、发病部位和临床分期与Su Fu表达无相关性(P> 0. 05),浸润深度与Glil表达显著相关(P <0. 05)。结论大肠癌疾病进展中有Hh的信号通路异常的活化参与,患者的浸润深度和临床分期与Hh的信号通路异常的活化可能有联系。

绍兴白方腐乳中含氮物质的分析及对白点形成的影响

文中分析了绍兴白方腐乳白点的组成,并对有白点和无白点腐乳坯中的含氮物质进行了对比研究,同时利用傅里叶红外光谱对汤汁中蛋白质的二级结构进行了分析。结果表明:绍兴白方腐乳白点中的92.49%的物质为游离氨基酸,主要为酪氨酸,占86.27%,同时还含有少量蛋白质,该蛋白质经TCA-丙酮沉淀、Tricine-SDSPAGE分析和质谱鉴定,为大豆球蛋白Glycinin亚基碱性端肽链B1b,其分子质量为25.4 k Da。傅里叶红外光谱分析表明,有白点腐乳汤汁中蛋白质的二级结构中α-螺旋比无白点腐乳汤汁中蛋白质的高13.70%,而β-折叠比无白点腐乳汤汁中蛋白质的低20.04%,说明有白点腐乳汤汁中蛋白质的疏水性要高于无白点腐乳汤汁中的蛋白质。显著性水平检验结果表明,有白点腐乳和无白点腐乳坯中的三氯乙酸-氮溶指数、蛋白质水解度和游离酪氨酸含量差异显著,说明绍兴白方腐乳白点的产生跟腐乳坯中大豆蛋白质的过度水解产生过量酪氨酸有关。

真菌豆乳凝固酶的筛选及其凝固豆乳的工艺条件研究

筛选获得ＳＣＥ２豆乳凝固酶，在固态发酵时的产酶量为１２８ｕ／ｇ干麸皮。采用正交试验法对ＳＣＥ２凝固豆乳的工艺条件进行优化，结果表明，控制凝固温度６９℃、自然ｐＨ（６．１）、加酶终浓度３ｕ／ｍｌ豆乳时，蛋白质凝固率和固形物收率分别高达８８４％和８１０％。微生物酶凝固豆乳应用于传统豆腐乳制作使生产周期相对缩短了２０４％。

白腐乳微生物肽酶的测定及其脱苦特性研究(英文)

采用合成底物对毛霉和白腐乳发酵中分离出的细菌JS3及酵母JSBB2的肽酶活力进行了检测,测定表明微生物具有明显的二肽酶和羧肽酶活力,其中毛霉的氨肽酶和内肽酶活力较高,细菌表现出明显的氨肽酶活力,而Alcalase的外切酶活力不足。两步法水解实验表明,毛霉和细菌的粗酶液有利于降低Alcalase水解大豆蛋白(SPI)后溶液的苦味,经毛霉粗酶液作用后大豆蛋白水解液的水解度提高了16.2%,而酵母发酵液的水解和脱苦作用均不明显。

鱼腐乳前发酵过程中蛋白质的降解及工艺的优化

接种总状毛霉(Mucor racemosus)对鱼豆腐进行前发酵研制鱼腐乳,对前发酵过程中氨基酸态氮的变化进行研究,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察蛋白质的降解情况。并以蛋白酶活力为评价指标,采用响应面试验优化鱼腐乳前发酵工艺。结果表明,发酵至第4天氨基酸态氮含量上升至0.23%,前发酵过程中大部分蛋白质被分解为小分子肽类。最佳前期发酵工艺条件为发酵时间103 h,发酵温度27℃,菌悬液接种量5.3%,此优化条件下,蛋白酶活力可达51.48 U/g。

Sufu通过抑制Hedgehog信号通路抑制成纤维细胞的纤维化作用

目的探讨Sufu(suppressor of fused)是否通过抑制Hedgehog信号通路抑制成纤维细胞的纤维化作用。方法自2019年3—8月通过北部战区总医院烧伤整形科获取手术切除的增生性瘢痕组织和正常皮肤组织,经Western blot检测组织中Sufu的表达情况,原代提取增生性瘢痕成纤维细胞。通过噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)实验检测Sufu作用0、12、24、36和48 h时成纤维细胞的增殖情况,流式细胞技术和propidine iodide,Annexin V-碘化丙啶(PI)实验检测Sufu作用24 h后细胞周期和细胞凋亡情况。Western blot实验检测Sufu作用24 h后成纤维细胞中Sufu、Gli1和α-SMA蛋白的表达情况。结果Sufu在增生性瘢痕组织中表达下调,并能够显著抑制成纤维细胞的增殖,其中12、24、36和48 h时对于成纤维细胞增殖的抑制率分别为(31.92±1.69)%、(33.24±3.55)%、(47.22±2.07)%和(51.33±2.32)%。Sufu作用细胞24 h后能够抑制细胞周期G1/S期的进程,促进细胞凋亡,并下调细胞中Gli1和α-SMA蛋白的表达。结论Sufu可以通过抑制Hedgehog信号通路抑制成纤维细胞的纤维化作用。

腐乳废水生物转化单细胞蛋白的研究

利用腐乳酿造过程中所排放的废水,以白地霉1315为菌种,采用液体深层发酵法培养,使白地霉菌体蛋白产率达到10 g/L左右,产品的蛋白质含量达41.6%。发酵前后废液中COD(化学耗氧量)平均降低71.1%,SS(悬浮物)含量平均降低73.4%,从而实现了腐乳生产废水资源化利用的目的。