一测多评法同时测定扶正固本颗粒中6种成分的含量

目的:建立扶正固本颗粒中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、黄芩苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等6种成分含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Dikma Diamonsil C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),检测波长为275 nm(0~8 min)、320 nm(8~9 min)和275 nm(9~33 min),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,进样量为10μL。以黄芩苷为基准物,采用多点校正法和斜率校正法分别计算另外5种成分的相对校正因子(fk/s),并采用保留时间差值法对待测成分进行色谱峰定位,比较上述两种一测多评法所得计算值与外标法实测值的差异。结果:2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、黄芩苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素检测进样量的线性范围分别为0.053~2.12、0.163~6.52、0.059~2.36、0.021 6~0.864、0.03~1.2、0.021~0.84μg(r>0.999),精密度、稳定性(12 h)、重复性试验的RSD均小于3%;平均加样回收率为98.72%~99.82%(RSD为0.89%~1.24%,n=9)。以黄芩苷为基准物,2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素多点校正法的f_(k/s)分别为1.172、0.528、1.479、1.820、2.534,斜率校正法的f_(k/s)分别为1.234、0.550、1.559、1.939、2.664;3种方法测得10批扶正固本颗粒中6种成分含量的RSD为0.29%~2.77%(n=10);两种一测多评法测得结果与外标法的Pearson相关系数均不低于0.999 9(P<0.001)。结论:成功建立了可用于同时测定扶正固本颗粒中6种成分含量的一测多评法。

基于UPLC-ESI-QTOF-MS/MS技术检测扶正固本颗粒化学成分

目的基于超高效液相色谱-电喷雾离子源-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-ESI-QTOF-MS/MS)检测扶正固本颗粒中的化学成分并进行确认。方法采用ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸甲醇溶液(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速0.2 mL/min,柱温40℃,同时联合XEVO G2-XS ESI离子源进行正、负离子模式测定,通过比对保留时间、分子精确质量数及二级质谱碎片等参数,结合UNIFI软件分析各成分碎片裂解方式并参考化学成分数据库及文献数据对检测到的化学成分进行确认鉴定。结果初步鉴定出56个化合物,其中包括黄酮类化合物29个,蒽醌类化合物9个,二苯乙烯苷类化合物2个,萜类化合物6个,皂苷类化合物3个及7个其他成分。结论该方法可快速、准确的鉴定出扶正固本颗粒中的多种化学成分,为寻找其药效物质基础及进一步建立全面质量控制方法提供了依据。

扶正固本颗粒联合顺铂对S180荷瘤小鼠T细胞免疫功能调节作用的研究

目的研究扶正固本颗粒联合顺铂对荷瘤小鼠体内抗肿瘤治疗及T细胞免疫调节的影响。方法选取昆明种小鼠120只,雌雄各半,随机分为6组,每组20只,建立小鼠S180腹腔积液瘤模型。空白组,无任何处理;模型组:等体积蒸馏水灌胃;化疗组:顺铂注射液(1 mg/kg)腹腔注射;低、中、高剂量组:顺铂注射液(1 mg/kg)腹腔注射联合扶正固本颗粒(5.625、11.250、22.500 g/kg)灌胃给药,每日给药1次,共10天,观察小鼠一般情况,记录体重变化,计算抑瘤率、脏器指数,流式细胞仪检测小鼠外周血中CD4+、CD8+及T淋巴细胞亚群水平。结果化疗组和低、中、高剂量组的抑瘤率分别为65.5%、43.2%、44.0%、57.6%。与化疗组比较,低、中、高剂量组小鼠体重与血液中Th1/Th2水平均提高;中、高剂量组小鼠胸腺指数和血液中CD4+、Th1、Th17水平均提高,CD8+水平降低;高剂量组小鼠血液中Th2、Treg水平下降,Th17/Treg水平提高,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论顺铂联合高剂量扶正固本颗粒治疗较单独化疗能增强荷瘤小鼠T细胞免疫。

扶正固本颗粒质量标准研究

目的:建立扶正固本方颗粒剂的质量标准。方法:颗粒剂中炙甘草的薄层色谱展开剂为乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2),显色剂是10%硫酸乙醇溶液;黄芪的薄层色谱展开剂是三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液,显色剂也是10%硫酸乙醇溶液;五味子的薄层色谱以环己烷-乙酸乙酯(3∶2)为展开剂,应用硅胶GF254薄层板,检视条件是紫外光灯254 nm。实验采用C18条件色谱柱,乙腈-水(29∶71)的流动相,和203 nm的检测波长,对扶正固本颗粒人参皂苷Rb1的量进行测定。结果:实验所建立的TLC方法,各斑点清晰,Rf值较适中,且分离度良好。以人参皂苷Rb1为指标成分进行方法学研究,其对应的线性范围分别0.89~4.45μg,平均加样回收率为96.59%,方法的稳定性与重复性良好。结论:该方法准确灵敏,易于操作,专属性强,重复性好,可用于扶正固本方的质量控制。

基于网络药理学和分子对接的扶正固本颗粒治疗胃癌机制研究

目的:应用网络药理学和分子对接方法探究扶正固本颗粒治疗胃癌的作用机制。方法:通过TCMSP、TCMID、OMIM、DigSee等数据库获取扶正固本颗粒中的活性成分和潜在靶点以及胃癌相关人类靶点。取两者交集靶点导入STRING中进行蛋白互作分析,得到的数据导入Cytoscape 3.8.0用MCODE插件进行模块分析,并筛选出代表性的靶点通过R studio等软件进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。用Cytoscape 3.8.0构建“活性化合物-作用靶点”、“中药-化合物-核心靶点-通路”等网络。最后选取核心靶点与对应化合物进行分子对接。结果:筛选出扶正固本颗粒共174个活性化合物和1032个作用靶点,胃癌共5276个作用靶点,两者交集靶点共607个。核心靶点涉及蛋白激酶B(AKT1)、肿瘤蛋白p53(TP53)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)、磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基1(PIK3R1)、原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src(SRC)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。GO和KEGG富集分析结果显示,扶正固本颗粒治疗胃癌主要与化学反应、对有机物的反应、细胞对化学刺激的反应等生物过程有关,作用靶点主要集中在癌症通路、PI3K-Akt信号通路、癌症中的蛋白多糖通路等。分子对接结果显示核心靶点与对应化合物的最低结合能均小于-5.0 kcal·mol^(-1)。结论:扶正固本颗粒治疗胃癌的作用机制可能与PI3K-Akt信号通路以及AKT1、TP53、MAPK1、PIK3CA、STAT3、PIK3R1、SRC、VEGFA密切相关。

同期放化疗联合扶正固本颗粒治疗中晚期食管癌临床观察

目的观察扶正固本颗粒联合周剂量紫杉醇(PTX)同步放化疗治疗中晚期食管癌的近期疗效和毒副反应。方法将90例中晚期食管癌患者随机分为扶正固本颗粒加放化疗组与单纯放化疗组,两组均行常规分割放疗,2 Gy/d,总量60～64 Gy/6～7周。同期化疗开始于放疗的第1天,紫杉醇30 mg/m2、d1,每周重复,共6周期。扶正固本颗粒加放化疗组在行放化疗的同时,给予扶正固本颗粒口服,15 g/次,3次/日,42～49 d为一疗程。完成1个疗程后评价2组近期疗效和毒副反应。结果治疗组与对照组有效率分别为80.0%、60.0%;对照组发生放射性食管炎、肝肾功能损害、消化道反应及骨髓抑制的程度重于治疗组。结论扶正固本颗粒联合放化疗治疗中晚期食管癌能增强机体免疫功能,提高近期疗效,减轻毒副反应。

扶正固本颗粒配合放射治疗中晚期食管癌临床疗效观察

目的：观察扶正固本颗粒配合放射治疗中晚期食管癌的疗效。方法：将232例中晚期食管癌随机分为扶正固本颗粒加放疗组与单纯放疗组，两组均行常规分割放疗，1．8—2．0Gy／d，总量50—70Gy／5—8周。扶正固本颗粒加放疗组在行放疗的同时，给予扶正固本颗粒口服，15g／次，3次／日，50—55天为一疗程。结果：单纯放疗组1、3、5年生存率分别为41．4％、14．7％、7．6％，扶正固本颗粒加放疗组1、3、5年生存率分别为63．8％、29．3％、19．0％。1、3、5年生存率扶正固本颗粒加放疗组明显优于单纯放疗组（P〈0．05）。结论：扶正固本颗粒配合放疗可增加近期疗效与提高远期生存率，同时可减轻骨髓抑制等放射副反应。

扶正固本无糖颗粒的成型工艺研究

目的:研究扶正固本无糖颗粒的最佳成型工艺。方法:首先优选扶正固本无糖颗粒的矫味剂;其次分别以颗粒质量、性状、口感为指标优选乙醇浓度、稀释剂与浸膏的比例及矫味剂的含量,确定最佳成型工艺条件,同时测定颗粒的流动性和吸湿性。结果:扶正固本无糖颗粒最佳成型工艺条件为:浸膏、糊精、甜菊素按1:2:0.03的比例混匀,以85%乙醇为润湿剂;颗粒剂的平均堆密度为0.50咖L,休止角<40°,临界相对湿度约为61%。结论:优选的成型工艺制备的成品颗粒成型性好,吸湿性、流动性符合要求。在生产中易控制,为确定扶正固本无糖颗粒生产的工艺条件提供了科学依据。

扶正固本颗粒联合化疗放疗对于荷瘤小鼠的免疫增强作用

目的:研究扶正固本颗粒联合化疗、放疗的体内抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响,并与单独放疗、化疗作比较。方法:建立小鼠肉瘤S180移植性肿瘤模型,次日随机分为10组,放、化疗,并ig给药每日1次,10 d后,计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数,测定细胞因子白介素-2(IL-2),白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和外周血细胞数量,检测其抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果:联合治疗较单独的放化疗能增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数;拮抗化疗所致荷瘤小鼠血清IL-2,IL-6和TNF-α的减少;拮抗放疗所致荷瘤小鼠外周血细胞的减少。结论:联合治疗可增强荷瘤小鼠免疫功能。

HPLC同时测定扶正固本颗粒中黄芩苷和淫羊藿苷

目的:建立扶正固本颗粒中黄芩苷和淫羊藿苷的含量测定方法。方法:采用HPLC法,以乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,色谱柱为日旭AQ C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流速1.0 mL.min-1,柱温25℃,检测波长270 nm。结果:黄芩苷在0.756～10.08μg,淫羊藿苷在0.299～39.92μg与峰面积呈良好线性关系,相关系数分别为1.000 0,0.999 6;方法平均回收率分别为101.40%(RSD 1.41%),101.02%(RSD 1.08%)。结论:方法简便、准确、重复性好,可作为扶正固本颗粒质量控制方法。

扶正固本颗粒的质量标准研究

目的:建立扶正固本颗粒的质量标准。方法:采用薄层色谱(TLC)法对扶正固本颗粒中黄芩、女贞子、何首乌、淫羊藿和茜草进行定性鉴别,用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量。结果:TLC斑点清晰、分离度好;淫羊藿苷进样量在20.2～404.0μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.1%,RSD=1.21%(n=6)。结论:所建鉴别方法专属性强、重现性好,定量方法简便、准确,可用于控制扶正固本颗粒的质量。