包穗突变体sui1-5鉴定及OsPSS1互作蛋白筛选

包穗是水稻生产上的不利性状,表现为倒一节间伸长异常,穗部不能正常从叶鞘伸出。目前,已经鉴定报道了多个包穗性状突变体,但对该性状产生的分子机制认识仍然有限。OsPSS1/SUI1是一个磷脂酰丝氨酸合酶的编码基因,该基因突变会引起突变体sui1-4的倒一节间严重缩短。我们鉴定到了一个新的OsPSS1/SUI1等位突变体sui1-5,该突变体倒一节间缩短程度明显减轻。测序发现突变体中基因SUI1的第7个外显子存在1个单碱基G→T替换,导致甘氨酸突变为缬氨酸。为了研究OsPSS1的功能,我们通过酵母筛库发现了一个与OsPSS1互作的蛋白GH9A3,并通过酵母双杂交、荧光素酶互补(LCI)和双分子荧光互补(BIFC)实验加以验证。GH9A3是GH9基因家族成员,编码内切-1,4-β葡聚糖酶,推测是细胞壁成分纤维素合成的一个关键酶。在苗期,SUI1和互作蛋白编码基因GH9A3的表达量并不同步,GH9A3在sui1-5的表达量上调。但是在拔节抽穗期,SUI1和GH9A3在sui1-5中的表达量都相应降低,其他纤维素合酶CESAs家族基因的表达量在sui1-5中也明显降低。这些结果为进一步研究OsPSS1的功能奠定了一定的理论基础。

水稻磷脂酰丝氨酸合酶SUI1在烟草叶肉细胞中的定位

在克隆水稻编码磷脂酰丝氨酸合酶的短穗颈基因SUI1的基础上,利用Gateway方法分别构建了N端和C端两种GFP融合载体pMDC45-SOVT和pMDC201-SOV。利用农杆菌侵染烟草叶片的方法,观察SUI1蛋白在烟草叶肉细胞中的瞬时表达情况,结果显示GFP-SUI1定位于质膜和核上,而SUI1-GFP定位于质膜和核膜上,并且两种融合蛋白在质膜上的分布都是不连续的。由于N端融合可能改变了目标蛋白的折叠方式及跨膜方式,从而影响蛋白的正确定位,因而SUI1蛋白主要定位于烟草叶肉细胞的质膜和核膜中。

猪链球菌种及其1、2、7型多重PCR检测方法的建立与应用

【目的】建立致病性猪链球菌种及其1、2、7型的快速多重PCR检测方法,并进行初步的临床应用。【方法】根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及其1(14)、2(1/2)、7型特异的cps1I、cps2H、cps7H基因序列,分别设计4对引物,通过对单个基因PCR和多重PCR扩增条件、反应体系的优化,建立了快速检测猪链球菌种及其1(14)、2(1/2)、7型的4重PCR方法。利用保存的猪链球菌不同血清型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株,对建立的多重PCR方法进行特异性和敏感性试验。用所建立的4重PCR方法对河南省不同地市的39份猪扁桃体样品进行检测,并选取部分样品的PCR产物进行测序验证。【结果】所建立的4重PCR方法特异、敏感,对猪链球菌2型的最低检出水平为2.52×103CFU/mL。临床检测及测序结果显示,该多重PCR准确性较高。【结论】建立的4重PCR方法可用于猪链球菌主要致病血清型的快速检测。

猪链球菌1、7、9型多重PCR诊断方法的建立及初步应用

为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)1、7、9型(SS1、SS7、SS9)的快速鉴别诊断和分型方法,本研究根据Gen-Bank已登录的SS1型特异性的CPS1I基因、7型CPS7H基因、9型CPS9H基因设计引物,以标准SS1、SS7、SS9株基因组DNA为模板,建立了SS1、SS7和SS9的多重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的多重PCR检测方法对11份猪链球菌的临床分离纯化菌株进行了的应用检测。结果表明,成功建立了SS1、SS7和SS9的多重PCR检测方法,该方法的检测灵敏度可达100CFU/mL,特异性和重复性好;利用多重PCR检测方法对11份猪链球菌临床分离纯化菌株检测结果表明,11份样品中有3份样品为SS9阳性、2份样品为SS7阳性、1份样品为SS1阳性。本研究为临床上SS1、SS7、SS9的快速鉴别诊断提供了一种新方法。

江西省一例人感染1型猪链球菌病例的流行病学调查与分析

目的通过对江西省一例人感染1型猪链球菌病例的流行病学调查与分析,查找可能的感染来源,为人感染1型猪链球菌病病例的防治提供科学依据。方法采用描述流行病学方法分析。结果经流行病学调查发现,该病例在发病前1周食用过市场上购买的猪肉,可能通过接触携带1型猪链球菌的猪肉感染。结论 1型猪链球菌一般不导致人类感染,但对免疫功能低下或伴有基础性疾病的老年人有致病性,要进一步关注1型猪链球菌毒力的变化和耐药情况,以便今后更好地应对此类病例,减少死亡。

抗寒树莓新品种“绥莓1号”的选育

"绥莓1号"是从小兴安岭伊春区野生树莓中选育出的优良品种。该品种平均单果重6.25g、可溶性固形物4.2%、可溶性糖1.88%、可滴定酸0.70%、维生素C 31.7mg/kg,属秋果型树莓品种。抗寒力强,是一个综合性状优良、丰产的树莓品种。

绥糯粱1号的选育与栽培技术

绥糯粱1号是黑龙江省农业科学院绥化分院选育的酿造用高粱新品种,支链淀粉含量85.1%。2018—2019年在黑龙江省和内蒙古自治区进行每年6点次自布点试验,2年试验平均产量8263.0 kg/hm^(2),比对照绥杂7号增产9.1%。2021年通过农业农村部非主要农作物品种登记,登记名称绥糯粱1号,登记编号为GPD高粱(2021)230032.该品种具有矮秆、耐密、适合机械化作业、商品粮品质优良等特点,适宜在黑龙江省第四积温带和内蒙古自治区≥10℃活动积温2250℃以上区域种植。

基于Keap1/Nrf2信号通路研究益髓生血方改善化疗所致小鼠肾损伤的作用机制研究

目的 研究益髓生血方(YSSX)通过Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路改善化疗所致小鼠肾损的效果和作用机制。方法 通过腹腔注射40 mg·kg^(-1)卡铂诱导小鼠肾损伤模型。将C57BL/6小鼠随机分为空白组(0.9%NaCl)、模型组(小鼠肾损伤模型)和低、中、高剂量实验组组(0.53、1.05、2.10 g·kg^(-1)·d^(-1) YSSX灌胃7 d)。用蛋白质印迹法测定Keap1、Nrf2表达水平;用分光光度法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)活性。结果 空白组、模型组和低、中、高剂量实验组的Keap1蛋白表达水平分别为0.26±0.02、0.64±0.03、0.59±0.01、0.45±0.05和0.34±0.02;Nrf2蛋白表达水平分别为0.69±0.06、0.35±0.01、0.36±0.01、0.48±0.02和0.56±0.01;CAT活性分别为(572.49±912.92)、(334.60±4.92)、(402.76±9.80)、(475.35±5.21)和(493.00±12.03)U·mg^(-1);GSH活性分别为(2.79±0.06)、(0.51±0.01)、(0.59±0.07)、(1.29±0.04)和(1.70±0.08)μmol·L^(-1);SOD活性分别为(477.00±4.32)、(260.67±6.13)、(272.67±2.87)、(386.33±3.68)和(395.00±12.25)U·mL^(-1);MDA活性分别为(3.89±0.02)、(7.32±0.03)、(6.94±0.14)、(4.60±0.01)和(4.34±0.02)nmol·mg·prot^(-1)。模型组上述指标与空白组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.001);中、高剂量实验组上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.001)。结论 YSSX可以通过激活Keap1/Nrf2信号通路,调节机体氧化应激状态从而改善化疗导致的小鼠肾损伤。

补肾益髓生血法再障大鼠含药血清对大鼠造血祖细胞增殖分化及其机制的影响

目的:探讨补肾益髓生血法再障大鼠含药血清对大鼠骨髓造血祖细胞增殖分化及其机制的影响。方法:60Co-γ射线联合环磷酰胺建立再障大鼠模型,以正常对照组、模型组、康力龙组、益髓生血组、温肾生血组和滋肾生血组复方中药灌胃大鼠,制备其含药血清培养正常大鼠骨髓细胞,培养体系中含药血清比例为20%,进行骨髓造血祖细胞集落形成单位(CFU)计数;收集集落细胞,RT-PCR检测红系GATA-1 mRNA及粒系PU.1 mRNA表达。结果:与正常对照组相比,模型组骨髓有核细胞显著减少(P<0.01),造血祖细胞红系集落形成单位(CFU-E)、红系爆式集落形成单位(BFU-E)和粒单核系造血祖细胞集落(CFU-GM)数目均明显降低(P<0.01),GATA-1、PU.1 mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组相比,各个治疗组大鼠骨髓有核细胞升高,造血祖细胞CFU-E、BFU-E和CFU-GM数目显著增加(P<0.01);滋肾生血组CFU-E、BFU-E明显优于益髓生血组(P<0.01);滋肾生血组CFU-GM优于益髓生血组、温肾生血组。各治疗组GATA-1、PU.1 mRNA表达明显高于模型组(P<0.01);滋肾生血组GATA-1 mRNA表达明显高于益髓生血组、温肾生血组(P<0.05);滋肾生血组PU.1 mRNA表达高于益髓生血组、温肾生血组。结论:补肾益髓生血法可能通过增加GATA-1、PU.1 mRNA表达而促进骨髓造血祖细胞增殖分化,其中滋肾生血法优于益髓生血法和温肾生血法。

荚膜唾液酸缺失对2型猪链球菌与人单核细胞相互作用的影响

目的本研究以人单核细胞THP-1为靶细胞,研究荚膜唾液酸成分对2型猪链球菌与人单核细胞相互作用的影响。方法透射电镜定性比较野生株及敲除株与人单核细胞相互作用并观察细菌的超微结构;通过涂板计数定量测定比较细胞对细菌的内吞及细菌在细胞内的存活情况;ELISA法检测野生株及敲除株刺激人单核细胞分泌炎症因子的水平。结果猪链球菌唾液酸突变株与人单核细胞间相互作用,在黏附、内吞及胞内存活方面与野生株相比均有显著的差异;野生株对人单核细胞杀伤的抵御能力显著强于唾液酸缺失突变株;唾液酸突变株能更加快速的刺激人单核细胞分泌IL-8,且分泌水平要高于野生株,但对IL-6的分泌无影响。结论荚膜唾液酸在2型猪链球菌致病过程中发挥着重要作用,为进一步探讨荚膜唾液酸参与2型猪链球菌强致病性调控奠定了基础。

头针结合骶四针治疗女性压力性尿失禁临床研究

目的:通过盆底肌电生理检查测定头针结合"骶四针"疗法治疗后盆底表面肌电值,为针刺治疗女性压力性尿失禁(SUI)的临床疗效提供客观依据。方法:选取女性SUI患者62例,按随机数字表法分为研究组32例和对照组30例。对照组采用盆底生物反馈电刺激疗法结合凯格尔训练,研究组在对照组基础上加用头针结合骶四针疗法。治疗4周后比较2组患者的盆底表面肌电值、1h尿垫试验尿失禁量和ICI-Q-SF量表评分。结果:治疗前,2组盆底表面肌电值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组盆底表面肌电值较治疗前升高,且研究组盆底表面肌电值高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,2组1 h尿垫试验尿失禁量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组1 h尿垫试验尿失禁量较治疗前降低,且研究组1 h尿垫试验尿失禁量小于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,2组ICI-Q-SF量表评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组ICI-Q-SF量表评分较治疗前降低,研究组ICI-Q-SF量表评分低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在盆底生物反馈电刺激疗法结合凯格尔训练基础上加用头针结合"骶四针"疗法治疗女性SUI,其临床疗效显著优于单纯使用盆底生物反馈电刺激疗法结合凯格尔训练,表明头针结合骶四针疗法治疗SUI效果确切,值得临床推广及应用。

猪链球菌1/2型的分离鉴定与致病性研究

为精准鉴定从贵州临床发病死亡猪分离到的疑似致病菌,通过形态学观察、革兰染色镜检、生化鉴定、种特异性PCR鉴定、血清型分型鉴定及毒力基因、小鼠致病性、耐药性检测,确定分离菌株为血清型1/2型猪链球菌,携带fbps+、mrp+、orf2+毒力基因,不具有gapdh、sly毒力基因,小鼠LD50为2.0×10^(9)CFU/mL,致病小鼠肺和肝可见明显病变,对氨基糖苷类、喹诺酮类、氯霉素类和大环内酯类等多种抗生素敏感。结果表明,贵州省猪群存在致病性猪链球菌1/2型感染。

民族危机与中学应变——试析冀察绥平津中等学校通讯处

七七事变后,全面抗战爆发,河北等地首当其冲,中等学校师生义愤填膺,不愿在日军铁蹄下接受奴化教育,自北向南,纷纷南下流亡,试图在后方稳定地区继续求学。河北籍流亡师生聚集在河南省一些交通便利的中心城市。在河北籍流亡教职员的呼吁下,国民政府高层中河北籍人士出面倡导,南京国民政府教育部派督学筹设“冀察绥平津中等学校通讯处”,以通讯处为基础,以河北籍为主的华北流亡师生最终在河南淅川成立国立第一中学,这成为后来国立中学体制的发端,孕育出抗战时期独特的国家办理中等教育的办学模式。

猪种布鲁氏菌生物1型野毒株和2号菌苗的鉴别诊断

目的寻找猪种布鲁氏菌生物1型野毒株(1330S)和猪种布鲁氏菌2号菌株(S2)的鉴别诊断方法。方法采用牛、羊、绵羊、猪种型聚合酶链反应(AMOS-PCR)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点可变数量串联重复序列(MLVA)3种方法对21株1330S菌株进行鉴别。结果AMOS-PCR和PFGE方法未能区分两类菌株;MLVA方法发现1330S和S2菌株在Bru9和Bru16两位点存在差异。结论MLVA方法可以作为两类菌株鉴别诊断的方法之一。

模拟分娩损伤及绝经对压力性尿失禁模型大鼠尿道周围结缔组织转化生长因子β1和弹性蛋白表达的影响

目的:探讨模拟分娩损伤及绝经对压力性尿失禁(SUI)模型大鼠尿道周围结缔组织转化生长因子β1(TGFβ1)和弹性蛋白(elastin)表达的影响。方法:51只雌性SD大鼠随机分为3组:阴性对照组(正常未孕大鼠)、阳性对照组(分娩组)、SUI组(分娩、模拟产伤、卵巢去势),造模前和处死前均行尿道动力学检测,于术后4周处死大鼠,收集大鼠尿道周围结缔组织进行常规石蜡切片、HE染色、弹性纤维特殊染色,免疫荧光实验和Western blotting方法检测各组尿道周围结缔组织TGFβ1和弹性蛋白的蛋白表达情况。结果:SUI组最大膀胱容量和漏尿点压力明显较阳性对照组和阴性对照组下降(P均<0.01)。弹性纤维特殊染色显示阴性对照组和阳性对照组弹性纤维完整致密,SUI组弹性纤维较对照组减少、稀疏、变细(P均<0.01)。Western blotting检测结果显示阴性对照组和阳性对照组尿道周围结缔组织均见TGFβ1和弹性蛋白的高表达,2个对照组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。SUI组在造模后4周TGFβ1和弹性蛋白的表达均较对照组明显下降(P均<0.01)。结论:尿道周围结缔组织弹性纤维的破坏和缺失可能与SUI的发生关系密切,弹性蛋白和TGFβ1的减少可能共同参与了SUI的发生、发展。

猪链球菌1型临床分离株的鉴定和基因组学分析

从罹患肺炎型猪链球菌病的仔猪气管中分离出1株猪链球菌强毒株,命名为SS2011GZ,经PCR鉴定为血清1型。斑马鱼攻毒试验测得该菌株的半数致死量(LD50)为4.09×10^(4) CFU/mL,有较强毒力;全基因组测序分析显示,毒力基因型为mrp^(+)gdh^(+)epf^(+)sly^(+)fbps^(-)sao^(-),存在19个基因岛,24种耐药基因,共线性分析发现该菌株基因有大量重排、倒位、插入、缺失,基因发生树中处于独立的分支。结果表明本研究分离的猪链球菌1型为强毒力株,基因共线性较差,存在大量特殊基因和耐药基因,有重要的公共卫生学意义,需引起足够重视。

肺泡巨噬细胞在猪链球菌2型引致肺炎过程中的作用

为探明肺巨噬细胞在猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)引致肺炎过程中发挥的作用,用SS2体外感染4周龄SPF巴马小型猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM),首先以10倍递增的SS2∶PAM感染比(MOI)分别为1∶10～1 000∶1感染12h;其次以MOI=100∶1分别感染1、2、4、6、12、24h,ELISA检测三种主要炎性细胞因子TNF-α、IL-1和IL-6的质量浓度及动态变化,同时光镜观察PAM的形态变化。结果显示,三种细胞因子具有相似的动态表达趋势,其表达量均随MOI升高和作用时间的延长而上升,与对照组之间均差异极显著(P<0.01),菌液浓度之间和时间点之间均差异显著(P<0.05);同时PAM的形态异常和崩解死亡比例依次增多,表明三种炎性因子的表达量与SS2的浓度和感染时间之间呈正相关;受损或濒死细胞比例亦正相关;提示三种炎性因子由受损细胞或濒死细胞产生。MOI为1∶1感染12h,或MOI为100∶1感染6h的条件下均可致70%的PAM崩解死亡,表明此条件下SS2可摧毁由PAM构筑的第一道防线。三种炎性细胞因子表达最高峰的条件是MOI为100∶1,感染12h,此时镜下细胞几乎全部崩解死亡,表明PAM的完全死亡伴随炎性因子的最大释放,炎症随吞噬功能的完全丧失而开始。结果表明,在SS2引致肺炎过程中,AM的作用是炎症的起始者,而不是抵御细胞。

猪链球菌全基因组序列比较分析

1995年,在四川局部地区爆发的人感染猪链球菌疫情导致200多人感染,30多人死亡.为了研究猪链球菌的致病机理,以达到防止细菌传播和人畜感染的目的,对已测序的猪链球菌(Streptococcussuis)的2个菌株(P1/7,89-1591)进行了全面的功能注释和分析.猪链球菌P1/7的基因组全长为2.007Mb,共有1969个可读框(ORF),而部分测序的猪链球菌89-1591序列包含在177个连接群(contig)中,长为1.98Mb,含有1918个ORF.两菌株基因组比较结果表明,其平均编码区(CDS)的长度非常接近.在所有ORF中,同源ORF数为1306个.两菌株中可能的毒性因子大多数具同源性.但也存在例外,如在P1/7中存在于一个基因岛内,编码与毒性相关的荚膜多糖的11个毒性因子(CPS2A-2K)中,4个基因cps2A,2B,2I,2J未在89-159菌株中发现.同时,P1/7中编码细胞外因子(EF)和溶血素(Haemolysin)的基因也未在89-159菌株中发现.另外,两菌株中与DNA复制、修复及重组相关的基因组成上存在着明显的差异,并且在表面蛋白质组成上也同样存在着一定的差异.这些特性表明两菌株为了适应不同的环境压力而演化出特有的功能单位,暗示着2个菌株在毒性机理上存在着一定的差异.以上分析结果为系统地研究猪链球菌以及防治、疫苗的开发、治疗药物的设计提供了广泛的基因组学信息.