锁阳中19种无机元素的NIR快速测定模型的建立与适宜测定元素筛选

目的:建立锁阳中19种无机元素含量的近红外光谱(NIR)快速测定模型,筛选适宜采用NIR技术进行测定的元素。方法:采集5个省(区)的82批锁阳样品,采用积分球漫反射方式采集样品的NIR原始光谱,采用电感耦合等离子体-质谱(ICP-MS)法测定Na、K、Ca、Mg、Fe、Zn、Mn、Co、Sr、Ni、Ag、Ba、Ti、Pb、Cr、Cd、As、Hg、Cu等19种无机元素含量的化学参考值,筛选预处理原始光谱的化学计量学方法,筛选最佳波段及因子数,以偏最小二乘法(PLS)建立NIR定量分析模型。结果:K、Ca、Mg、Mn、Co、Sr、Ti、Cr元素的决定系数R^(2)及交叉验证R^(2)均大于0.9,校正均方差(RMSEC)、预测均方差(RMSEP)及留一法交叉验证均方差(RMSECV)在0.52~2.20之间,模型预测值与真实值之间具有较好的相关性,预测性能较好;Ni、Zn元素的决定系数R^(2)及交叉验证R^(2)在0.8~0.9之间,RMSEC、RMSEP及RMSECV在0.49~1.41之间,预测值与真实值之间的相关性一般;Cu元素的决定系数R^(2)及交叉验证R^(2)在0.7~0.8之间,Na、Fe、Ag、Ba、Pb、Cd、As、Hg元素的决定系数R^(2)及交叉验证R^(2)均小于0.7,此9种元素的RMSEC、RMSEP及RMSECV在1.13~10.75之间,预测值与真实值之间的相关性较差。K、Ca、Mg、Mn、Co、Sr、Ti、Cr等8种元素的模型预测值和真实值之间的相对误差在0.04%~7.62%之间,平均预测回收率在94.12%~108.45%之间,预测值与真实值之间无显著性差异(P>0.05)。结论:锁阳中K、Ca、Mg、Mn、Co、Sr、Ti、Cr元素含量适宜采用NIR技术进行快速测定。

锁阳化学成分研究Ⅱ

目的研究常用补肾助阳中药锁阳(Herba Cynomorii)的化学成分。方法采用大孔吸附树脂、聚酰胺、硅胶、SephadexLH-20和ODS柱等色谱手段进行化学成分的分离纯化;依据理化常数、光谱数据、对照品和相关文献进行结构鉴定。结果分离得到并鉴定了11个化合物,分别为柑桔素(naringenin,1)、柑桔素-4′-O-β-吡喃葡萄糖苷(naringenin-4′-O-β-pyranoglucose;choerospondin,2)、异槲皮苷(isoquercetin,3)、儿茶素[(+)catechin,4]、表儿茶素[(-)epicatechin,5)]、乙酰熊果酸(acetyeursolic acid,6)、葡萄糖(glucose,7)、熊果酸(ursolic acid,8)、β-谷甾醇(β-sitosterol,9)、棕榈酸(palmitic acid,10)和胡萝卜苷(daucosterol,11)。结论化合物1,3,5,7为首次从锁阳中得到。对其中5种成分1,2,4,6,8首次建立了定性鉴别和含量测定方法,为锁阳药材的质量控制标准提供了科学依据。

沙生药用植物锁阳产地适宜性的定量评价

通过实地取样、标本查阅和文献研究获得131个锁阳(Cynomorium songaricum)采样点数据,并运用ArcGIS技术平台,从气候、土壤、地形数据库中提取了各采样点的生态因子,得出锁阳适宜生态因子范围。以此为据,利用中药材产地适宜性分析系统(TCMGIS)对锁阳在中国的产地适宜性进行多因子的空间分析。结果表明,锁阳适生区域主要位于西北干旱地区,包括内蒙古、新疆、宁夏、甘肃、青海等省(区)。研究结果对我国西北地区防沙固沙、荒漠生态保护和恢复具有重要的社会效应和生态价值。

锁阳多糖咀嚼片对衰老模型大鼠NO代谢及免疫功能的影响

目的探讨锁阳多糖咀嚼片对D-半乳糖致衰老大鼠血、脑、肾一氧化氮(NO)代谢及免疫器官功能的影响。方法提取并制备锁阳多糖、锁阳水提取物咀嚼片;Wistar大鼠随机分为空白对照组、衰老模型组、维生素E对照组、锁阳多糖咀嚼片组、水提物咀嚼片组。以D-半乳糖建立衰老大鼠模型,经药物干预后,检测各组大鼠血、脑、肾组织中NO的含量,脾脏指数、胸腺指数;观察脾脏组织的病理形态学变化。结果衰老模型大鼠血、脑、肾中NO含量异常增加,脾脏指数、胸腺指数下降,脾脏发生明显病理损伤。锁阳多糖咀嚼片能明显降低血、脑、肾中异常升高的NO含量,提高脾脏指数、胸腺指数,改善脾脏的病理损伤。并且锁阳多糖咀嚼片组对NO作用优于锁阳水提取咀嚼片组。结论锁阳多糖咀嚼片可通过调节衰老模型大鼠的NO代谢水平、提高免疫功能而发挥抗衰老作用。

锁阳中黄酮的抗氧化功能研究

[目的]探索锁阳黄酮对衰老小鼠机体抗氧化功能的影响。[方法]采用9月龄雌性昆明小鼠,按体重随机分为4组。空白对照组每日灌胃无菌水;将制备的锁阳提取物干粉以无菌水制成溶液,低、中、高剂量组,按总黄酮计,分别按(BW)0.08、0.17、0.50 g/kg的量灌胃,连续灌胃54 d,按南京建成试剂盒说明分别测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、心肌脂褐质水平变化。[结果]与空白对照组比较,各剂量组SOD活性均有明显的提高,低、高剂量组分别提高了18.6%和19.5%(P<0.05),中剂量组提高了22.7%,差异显著(P<0.01);各剂量组MDA含量均减少,中剂量组减少了15.0%,高剂量组减少了26.0%,差异显著(P<0.01);各剂量组心肌脂褐质含量均减少,中、高剂量组分别减少了11.2%和9.7%,差异显著(P<0.05)。[结论]超声提取的锁阳中的黄酮具有抗氧化功能。

微波消解电感耦合等离子体质谱法同时测定4个省区锁阳中19种无机元素含量

目的建立微波消解电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法同时测定4个省区锁阳中19种无机元素含量的方法。方法以HNO3-H2O2为消解体系对样品进行微波消解,采用ICP-MS法同时测定,等离子体射频功率1300 W,雾化气(氩气)体积流量1.1 L/min,等离子流量15 L/min,雾化室温度2℃,采样锥孔径1.1 mm,截取锥孔径0.4 mm,数据采集重复3次。结果19种元素在各自线性范围内均呈良好线性关系,检出限满足分析要求,方法灵敏度高,精密度、重复性、稳定性、回收率良好。锁阳主要矿质元素的平均含量依次为钾>钠>镁>钙>铁>锌>锰>锶;重金属元素铅、铬、镉、砷、汞、铜含量除个别样品超标外,其余均符合国家规定,不同省区样品重金属元素总量依次为新疆<青海<甘肃<内蒙古。结论本研究建立的微波消解ICP-MS法可用于4个省区锁阳中19种无机元素的同时测定,为锁阳的质量评价及健康风险评估提供参考。

常用中药锁阳的挥发性成分研究

从常用中药锁阳中首次得到了挥发性成分,得率0.02%。用薄层层析,气相色谱-质谱联用方法对成分进行了分析,共鉴定了22个化合物,其中主成分为棕榈酸和油酸,并测定了百分含量。

不同地区、不同生育期锁阳的熊果酸含量变化

目的:为锁阳药材的质量评价和最佳采药期的确定提供科学依据。方法:用高效液相色谱法,对不同地区、不同生育期天然锁阳与人工栽培锁阳的熊果酸含量的动态变化进行研究。结果:不同地区天然、人工栽培锁阳药材不同生育期熊果酸含量均不呈现有规律性变化。结论:熊果酸可作为评价锁阳药材质量的指标性成分,但对锁阳药材最佳采药期的确定可能非适宜的指标。该方法可以用来较准确测定锁阳药材熊果酸的含量,为锁阳药材的质量评价提供科学依据。

锁阳不同生育期儿茶素含量的动态研究

目的:为锁阳药材最佳采药期的确定提供科学依据。方法:用高效液相色谱法,对不同地区、不同生育期天然锁阳与人工栽培锁阳的儿茶素含量的动态变化进行了研究。色谱条件:色谱柱为 ZORBAX SB-C_(18)柱(4.6mm×250mm,5μm),0.04mol·L^(-1)枸橼酸溶液-N,N 二甲基甲酰胺-四氢呋喃(50:4:1)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),检测波长为280nm.柱温:35℃;进样量:30μL。结果:无论不同地区天然的还是人工栽培锁阳不同生育期儿茶素含量均呈现规律性变化,出土前期的儿茶素含量最高,出土期的次之,结实期的最低。结论:经研究确认儿茶素为锁阳药材的有效成分之一,也可作为其指标性成分之一。如仅以儿茶素作为指标性成分,出土前期和出土期所采集的锁阳药材质量最好。该结果同锁阳药材的民间采药期-即5月初出土期采药是吻合的,为锁阳药材采收期的确定和质量评价提供了科学依据。

补肾活血方对恒河猴PCO形态学和血清性激素的影响

目的探讨中药补肾活血方对恒河猴多囊卵巢(PCO)形态学和血清性激素的影响。方法选择健康育龄雌性恒河猴(6只)随机分为正常对照组、模型对照组、补肾活血方组;采用皮下注射丙酸睾丸酮和绒毛膜促性腺激素(HCG)建立PCO模型,分别灌胃给予生理盐水、补肾活血方,观察其卵巢形态及测定血清相关性激素含量。结果模型对照组血清LH、T水平较正常对照组明显升高,血清FSH、E2较正常对照组下降,与正常对照组相比模型组恒河猴卵巢体质量增加,呈多囊性改变,卵泡颗粒细胞减少而膜细胞层增加,电镜可见膜细胞内大量脂滴;补肾活血方组血清相关性激素水平恢复或接近正常对照组,卵巢形态接近正常组。结论提示此动物模型可以作为多囊卵巢研究的动物模型;补肾活血方具有改善多囊卵巢不排卵的作用。

不同产地锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱及含量测定研究

目的建立12个产地锁阳水溶性部位的HPLC指纹图谱、3种成分同时测定及主成分分析(PCA)评价方法。方法采集5个省(区)12个市(区/州/旗)的95批锁阳,提取水溶性部位。采用WondaSil C18-WR色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-0.1%甲酸水溶液(9∶91)为流动相,流速0.8 mL/min,柱温30℃,检测波长258 nm,进样量10μL,建立HPLC指纹图谱及没食子酸、原儿茶酸、儿茶素含量测定方法。对12个产地锁阳水溶性部位的指纹图谱进行相似度分析,以指纹图谱共有峰峰面积为变量建立PCA模型,进行质量评价与产区鉴别,采用载荷分析寻找不同产区样品共有峰差异。结果12个产地锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱的主要色谱峰一致,共指认出16个共有峰,除阿拉善左旗、阿拉善右旗、和田样品外,其余产地样品指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9。没食子酸、原儿茶酸、儿茶素分别在0.022~0.330、0.002~0.030、0.080~1.200μg范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9998、0.9993、0.9994,平均加样回收率分别为100.54%、99.82%、99.62%,RSD分别为1.71%、1.95%、2.07%。锁阳水溶性部位没食子酸、原儿茶酸、儿茶素含量分别为0.0313~7.0316、0.0255~0.3963、0.0035~0.7934 mg/g。PCA可将锁阳样品按12个市级产区、5个省级产区进行质量评价与归类分析,载荷分析筛选出导致不同产地锁阳水溶性部位整体质量差异的5个化学成分。结论本研究建立的分析方法稳定、准确、可靠,可用于不同产地锁阳的综合质量评价及产区鉴别。

紫外分光光度法测定锁阳中熊果酸的含量

通过薄层层析从锁阳中提取分离出熊果酸，并用紫外分光光度法测定其含量为０７８％。实验平均回收率为９７４％，ＲＳＤ＝０．４５％（ｎ＝４）。

锁阳药材质量多指标评价体系构建及权重分配方法优化

目的构建锁阳药材质量的多指标评价体系,优化各评价指标的权重分配。方法从无机成分和有机成分两方面构建锁阳药材质量的多指标评价体系,采用层次分析法(AHP)、熵权法、主成分分析法(PCA)、变异系数法、CRITIC法及独立性权重法建立各评价指标的权重分配方法。结果AHP确定的锁阳药材质量评价的多指标权重排序为:总多糖>没食子酸>As>总黄酮>Na>儿茶素>Cu>K>Fe>Ag>Ca>原儿茶酸>Hg>Mg>Pb>Zn>Cd>Mn>Co>Ni;熵权法为:Na>儿茶素>原儿茶酸>Co>Mg>Mn>没食子酸>Zn>Fe>Ni>总多糖>Hg>K>总黄酮>Cd>Ca>As>Ag>Cu>Pb;变异系数法为:没食子酸>Na>Co>Hg>Cd>Ag>Cu>儿茶素>原儿茶酸>Fe>Ni>Mg>As>Pb>Zn>Ca>总黄酮>总多糖>Mn>K;CRITIC法为:Zn>儿茶素>Hg>As>Mn>Pb>没食子酸>Fe>总多糖>K>原儿茶酸>Ni>Mg>总黄酮>Na>Cd>Cu>Co>Ca>Ag;独立性权重法为:Na>Hg>K>Pb>Cd>Ni>Zn>Co>Mg>没食子酸>As>Mn>原儿茶酸>总黄酮>Cu>Ca>总多糖>Ag>Fe>儿茶素。结论AHP、熵权法与CRITIC法确定的锁阳药材质量评价指标权重排序与传统经验认知较为符合,推荐作为锁阳药材质量的多指标评价权重分配方法。

基于多产地及多模型的锁阳有效成分与无机元素相关性研究

目的:探讨锁阳有效成分含量与无机元素含量的相关性。方法:采集甘肃、内蒙古、新疆、青海、宁夏等5个省(区)的12个市(州/区/旗)的66批锁阳样品,测定并比较锁阳中5种有效成分含量和19种无机元素含量,建立Pearson相关分析、典型相关分析(CCA)、逐步回归分析(SREG)等多种数学模型,探索锁阳19种无机元素与5种有效成分的相关性。结果:锁阳中有效成分含量从高到低依次为总多糖、儿茶素、总黄酮、没食子酸、原儿茶酸;无机元素含量从高到低依次为K、Na、Mg、Ca、Fe、Zn、Mn、Sr、Cu、Ti、Co、Pb、Ba、Ni、Cr、As、Ag、Cd、Hg,各产地锁阳中重金属及有害元素含量均未超过现行标准。相关性分析表明,Pb、Na元素与锁阳多糖呈正相关,K、Cd、Hg元素与多糖呈负相关;Sr、Ni元素与锁阳黄酮呈正相关,Fe元素与黄酮呈负相关;Mn、Cr元素与原儿茶酸呈负相关;Mn元素与儿茶素呈负相关;呈正相关的元素在锁阳中富集越多,越能够促进相应有效成分的生物合成与含量积累,而呈负相关则相反。结论:初步阐明了锁阳中19种无机元素对5种有效成分的生物合成及含量富集的影响,为锁阳有效成分及有益矿质元素的富集研究,重金属及有害元素的避害研究,锁阳的种植培育、综合开发利用及安全使用等提供了科学依据。

基于39项指标建立不同产地锁阳综合质量评价的模糊综合评价法模型

目的建立模糊综合评价法(FCE)模型综合评价不同产地锁阳药材质量,为锁阳的综合质量评价提供新思路。方法采集甘肃、内蒙古、新疆、青海、宁夏5个省份13个市/地区/州/旗的60批锁阳样品,从指标性成分、氨基酸、无机元素三方面测定39个评价指标的含量,构建锁阳药材的综合质量评价指标体系,将39个评价指标从高到低划分为4个等级建立锁阳的质量评价集,以半梯形分布模型设计隶属度函数,采用CRITIC法对39个评价指标进行赋权,由此建立锁阳药材综合质量评价的FCE模型,通过模型计算得到60批锁阳对应的质量等级。结果所有样品的重金属及有害元素元素含量均符合国家规定。Duncan方差分析表明,张掖、内蒙古样品中没食子酸的平均含量高于其他产地,内蒙古、青海样品中原儿茶酸的平均含量较低,酒泉、武威、内蒙古样品中儿茶素的平均含量高于其他产地,宁夏、新疆及青海样品中氨基酸含量普遍低于其他产地。CRITIC法分析表明,39个指标权重为0.0175~0.0375。FCE模型分析表明,甘肃、内蒙古产锁阳评判等级高于其他产地,质量最优。结论本研究建立的FCE模型稳定,评价结果科学可靠,综合评价能力强,可用于不同产地锁阳的综合质量评价。

超高压液相色谱/线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法鉴定锁阳有效部位的化学成分

目的:评价利用超高压液相色谱/线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC/LTQ-Orbitrapa MS)测定锁阳改善认知功能障碍有效部位的化学成分。方法:选取Acquity UPLC BEH C18(1. 7μm 2. 1 mm×100 mm)色谱柱,柱温:30℃,流速:0. 3 m L/min,进样量:5μL,流动相为0. 1%甲酸水(A)-乙腈(B)梯度洗脱。质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正负离子模式下采集数据。结果:共鉴别了21个化合物,包含6个潜在新化合物。鉴定的化合物包含核苷类、多酚类、黄酮苷类、氨基酸类、香豆素类化合物。结论:UPLC/LTQ-Orbitrapa MS方法能快捷、准确、较全面地鉴定锁阳有效部位的化学成分,为明确锁阳药效学物质基础及进一步提取分离提供科学依据。

螺旋藻-灵芝-锁阳的复合粗多糖对正常小鼠免疫功能的影响

目的:探究螺旋藻-灵芝-锁阳的复合粗多糖对小鼠免疫功能的影响。方法:用足跖肿胀法测定小鼠迟发型变态反应(DTH);用中性红比色法测定小鼠巨噬细胞吞噬功能;半数溶血值测定小鼠B淋巴细胞功能;小鼠免疫器官指数。结果:与对照组相比,各剂量组复合多糖可显著提高正常小鼠的免疫器官指数、腹腔巨噬细胞的吞噬功能、迟发型变态反应和血清半数溶血值(P<0.05),并呈现剂量效应。相同剂量复合粗多糖各指标均显著高于单味药螺旋藻多糖(P<0.05)。结论:螺旋藻多糖能改善正常小鼠免疫功能;等剂量的螺旋藻-灵芝-锁阳的复合粗多糖可显著改善小鼠免疫功能,说明这3味药物的复合多糖在增强免疫功能方面有相互协同作用。

益智健脑颗粒联合针灸对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的影响

目的观察益智健脑颗粒联合针灸对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、针灸组(C组)、益智+针灸组(D组)各10只,B、C、D 3组分别以海马CA1区注射β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)造模,A组注射等量的双蒸水,各组分别治疗20 d后行Morris水迷宫试验,观察大鼠学习记忆能力变化。结果B组较A组的平均潜伏期明显延长,差异具有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组、D组的平均潜伏期明显缩短,过台次数增多,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与C组比较,D组的潜伏期缩短,过台次数增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论益智健脑颗粒联合针灸能够提高Aβ25-35介导的AD模型大鼠的学习记忆能力。

肾康宁胶囊的薄层色谱定性鉴别质量控制方法研究

目的建立肾康宁胶囊中泽泻、丹参、茯苓和锁阳的薄层色谱定性鉴别质量控制方法。方法采用单因素试验方法,对不同的展开系统、显色剂、点样量、温湿度进行系统考察,确定鉴定泽泻、丹参、茯苓和锁阳的最佳薄层色谱条件。结果泽泻、丹参采用硅胶G薄层板,以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(7∶4∶0.6)为展开剂,展开、取出、晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视荧光斑点,再喷以2%磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;茯苓采用硅胶G薄层板,以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(7∶4∶0.4)为展开剂,展开、取出、晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视荧光斑点;锁阳采用硅胶G薄层板,以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(8∶6∶1∶1)为展开剂,展开、取出、晾干,用0.04%DPPH无水乙醇溶液浸板,取出、晾干,置日光下检视斑点显色清晰。结论薄层色谱特征鉴别斑点清晰、专属性强、阴性对照无干扰。该方法简单方便,重复性好,可用于肾康宁胶囊的质量控制。

壮腰健步丸的薄层色谱鉴别

目的:建立壮腰健步丸的薄层色谱鉴别方法,为该制剂质量标准的制定提供依据。方法:薄层色谱法鉴别该制剂中的甘草、白芍、续断、锁阳。结果:供试品色谱中与对照品及对照药材色谱相应的位置,显相同颜色的斑点。结论:实验方法简单,专属性强,阴性对照无干扰,可作为该制剂的定性质量控制标准。