山羊胎盘小肽的分离及对小鼠抗氧化能力的影响

本文分离并初步鉴定山羊胎盘小肽,探讨各小肽对小鼠抗氧化能力的影响。采用超滤法制得山羊胎盘小肽的粗提物(Mr≤10 kDa),经Superdex-75层析分离,Tricine-SDS-PAGE蛋白质电泳初步鉴定,分离的各种小肽及粗提物按低中高剂量分别腹腔注射小鼠,每天1次持续1周,测小鼠血清中SOD和MDA的含量。结果表明:Superdex-75层析得到4个组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,电泳显示其分子量分别为10.139、8.166、7.447、6.761 KDa,试验小鼠血清检测显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的SOD和MDA含量与对照组没有显著差异(P(0.05),Ⅳ和粗提物能提高SOD含量和降低MDA含量,不过低剂量组与对照组没有显著差异(P(0.05),中高剂量组有显著差异(P(0.05),呈现剂量相关性,效果最明显的是粗提物,不过粗提物与Ⅳ没有显著差异(P(0.05)Tricine-SDS-PAGE蛋白质电泳显示,Superdex-75层析可以初步提纯山羊胎盘小肽;分离的小肽和粗提物进行动物试验,表明小肽Ⅳ和粗提物对小鼠具有抗氧化作用。

桔梗多糖的分离纯化与含量测定

利用离子交换凝胶柱层析法分离纯化桔梗多糖,并对纯化组分进行纯度鉴定和糖含量及蛋白质含量测定。桔梗饮片经热水浸提、乙醇分步沉淀得桔梗粗多糖PPS80,Sevage法脱蛋白后,通过DEAE-Sepharose FF离子交换和Sephadex G-75凝胶柱层析进行纯化鉴定。分别采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝染色法测定纯化后各组分的糖和蛋白质含量。试验结果表明,从桔梗粗多糖PPS80中分离得到2个均一性组分PPS80-I和PPS80-Ⅱ,糖含量分别为90.32%和86.75%,蛋白质含量分别为0.48%和1.96%。该试验首次采用DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析结合Sephadex G-75凝胶柱层析有效分离纯化出桔梗多糖均一性组分,为桔梗多糖的进一步研究提供基础。

重组人IL-31蛋白纯化方法的比较研究

目的比较两种方法纯化rhIL-31的效果。方法将含pET32a/rhIL-31的重组菌E.coli.BL21(DE3)经IPTG诱导表达,通过超声波破碎,包涵体的提取溶解,分别经G75凝胶层析和镍琼脂糖凝胶FF层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析。结果镍琼脂糖凝胶FF层析法的杂蛋白去除率高于凝胶层析法,所得蛋白纯度略高。结论比较重组人IL-31蛋白的纯化效果,镍琼脂糖凝胶FF层析的效果比G75凝胶层析的效果好。

酱油曲蛋白酶的分离及催化性质研究

酱油曲提取液,经硫酸铵盐析后,用Sephadex G-75柱层析分离,测定收集液中的蛋白含量并用两种方法测定蛋白酶活力。结果显示,福林法酶活力峰出现在蛋白吸收曲线第二高峰,酶解酪蛋白显示的酶活力峰值出现在蛋白含量第三高峰的左肩。表明酱油曲含有不同分子量大小的蛋白酶,分别作用于蛋白质的不同位点,分子量较大(在20 kDa到14.3 kDa之间)的蛋白酶福林法酶活力最高,蛋白酶水解酪蛋白产生的酪氨酸较多;分子量比较小(小于14.3 kDa)的蛋白酶福林法检测酶活力不高,但分解酪蛋白产生的氨基酸态氮(ANN)含量较高,表明该蛋白酶酶解酪蛋白产生酪氨酸之外的其它氨基酸或肽类较多。