hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白的制备、穿膜效应及其抗氧化、抗炎症功效

目的 探究人源性细胞膜穿透肽hPP10携带人源性抗氧化蛋白Cu,Zn-SOD的穿膜效应并观察其抗氧化、抗炎功效。方法利用RT-PCR技术扩增人源性SOD基因片段、酶切连接法构建重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD;利用镍柱亲和层析法、分子筛方法纯化Cu,Zn-SOD、hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白并利用Western blotting法鉴定其正确性;利用免疫荧光法、荧光共定位实验、Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD在细胞中的穿膜效应;利用Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白穿膜时间梯度和浓度梯度效应;利用SOD酶活性测定试剂盒检测hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后的SOD酶活性;利用MTT法检测hPP10对细胞活性的影响。利用H2O2建立HEK293氧化应激细胞模型,通过流式细胞分析术(FCM)分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后细胞凋亡情况;并RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后凋亡相关因子的表达情况;通过ROS检测分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后抗氧化能力。TPA诱导建立小鼠耳部炎症模型(5只/组,共4组),然后RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后,NFκB,IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录情况;Western blotting检测NFκB p65、p-NFκB p65、IL-1β、TNFα基因的表达;免疫组化分析炎性因子p-NFκB p65、TNFα基因的表达。结果 成功构建了重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD,并获得Cu,Zn-SOD蛋白和hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白;免疫荧光试验结果表明5μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD转导HEK293细胞具有明显的穿膜效应;荧光共定位实验显示融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD入胞后定位在细胞膜内,部分蛋白定位在细胞核内;Western blotting实验结果表明hPP10-Cu,Zn-SOD转导Hela(P<0.05),HEK293(P<0.01)细胞具有浓度依赖性,细胞内hPP10-Cu,Zn-SOD存在可持续24 h;5μmol/L的hPP10-Cu,Zn-SOD转导细胞具有较好的抗氧化活性(P<0.01);MTT结果显示高达10μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD对于细胞活力的影响小。在氧化应激模型中,FCM结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞降低了细胞的早期凋亡(P<0.01)和晚期凋亡(P<0.05);RT-qPCR结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞使Bcl2、Mcl1、Deptor等抗凋亡因子升高(P<0.05),降低了Bad、P21、P27等促凋亡因子的表达(P<0.05);ROS结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞显著降低了细胞内的活性氧含量(P<0.01)。在炎症模型中,hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白可显著降低IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录(P<0.05);p-NFκB p65、IL-1β及TNFα的表达都呈现了抑制作用(P<0.05);hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白处理组较Cu,Zn-SOD蛋白处理组,降低了炎性因子p-NFκB p65及TNFα基因的表达(P<0.05)。结论 融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD具有明显的穿膜入胞、抗氧化、抗炎功效,且对细胞毒副作用很小。这些结果为hPP10作为新的递送载体奠定基础,也为hPP10-Cu,Zn-SOD应用于护肤品等提供了理论依据。

黄芪续命汤对阿尔兹海默症脾肾亏虚型患者NE、Hs-CRP、SOD及生活能力的影响

【目的】探讨黄芪续命汤对阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)脾肾亏虚型患者的治疗效果及其可能的作用机制。【方法】将134例AD脾肾亏虚型患者随机分为观察组和对照组,每组各67例。对照组给予西医常规治疗,观察组在对照组的基础上联合黄芪续命汤治疗,疗程为12周。观察2组患者治疗前后中医证候积分、简易精神状态量表(MMSE)评分、阿尔兹海默症评定量表(ADAS-Cog)评分及血清5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、脑源性神经营养因子(BDNF)、超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素6(IL-6)、超敏C反应蛋白(Hs-CRP)水平的变化情况,并评价2组患者的临床疗效。【结果】(1)治疗12周后,观察组的总有效率为89.55%(60/67),对照组为71.64%(48/67),组间比较(χ^(2)检验),观察组的疗效明显优于对照组(P<0.05)。(2)治疗后,2组患者的MMSE评分均较治疗前升高(P<0.05),中医证候积分和ADAS-Cog评分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组对MMSE评分的升高幅度及对中医证候积分和ADAS-Cog评分的降低幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(3)治疗后,2组患者的血清5-HT、NE、BDNF、SOD水平均较治疗前升高(P<0.05),血清IL-6、Hs-CRP水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组对血清5-HT、NE、BDNF、SOD水平的升高幅度及对血清IL-6、Hs-CRP水平的降低幅度均明显优于对照组(P<0.05)。【结论】针对AD脾肾亏虚型患者,在西医常规治疗基础上联合黄芪续命汤治疗,有助于减轻炎症反应,调节氧化应激失衡,促进患者生活能力改善,提高临床疗效。

生物反馈电刺激疗法对围绝经期女性盆底功能障碍患者血清SOD、GSH-Px水平的影响

目的观察生物反馈电刺激疗法治疗围绝经期盆底功能障碍性疾病(PFD)患者的临床效果及对血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的影响。方法收集2019年8月至2022年8月在长沙市第三医院妇产科就诊的204例PFD患者作为研究对象,以随机数字表法分成对照组(102例)与试验组(102例)。对照组给予盆底肌肉锻炼(即Kegel运动),试验组同时联合生物反馈电刺激疗法治疗,比较两组患者临床效果,以及治疗前后盆底肌力、生活质量及血清SOD与GSH-Px水平变化。结果治疗后,试验组总有效率(96.08%)高于对照组(82.35%)[(χ2=4.993,P=0.025)];治疗后,试验组盆底肌力、Ⅰ类/Ⅱ类肌纤维最大值均明显优于对照组[(4.31±0.80)级vs(3.09±0.76)级,(31.69±7.62)uv vs(23.19±7.17)uv,(44.07±12.89)uv vs(34.48±13.15)uv(t=-7.896,-5.802,-3.719,P均<0.01)];治疗后,试验组患者血清SOD、GSH-Px水平明显优于对照组[(5501.28±512.37)pg/mL vs(5096.31±526.42)pg/mL,(824.33±139.69)pmol/L vs(542.68±117.54)pmol/L(t=-3.937,-11.018,P均<0.01)];治疗后,试验组患者盆底功能障碍量表(PFDI-20)总分与其分量表评分以及盆底障碍影响简易量表(PFIQ-7)总分与分量表评分下降显著优于对照组(t=1.967~4.840,P均<0.05)。结论生物反馈电刺激疗法有助于围绝经期女性PFD患者增强盆底肌力,提高血清SOD、GSH-Px水平,提升患者生活质量。

自拟补肺健脾益肾方治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期患者的临床疗效及对血清TGF-β1、bFGF、SOD水平的影响

【目的】探讨自拟补肺健脾益肾方治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期患者的临床疗效及对血清转化生长因子β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响。【方法】将86例COPD稳定期肺脾肾虚证患者随机分为对照组和观察组,每组各43例。对照组给予布地奈德吸入剂吸入治疗,并予以常规戒烟、预防呼吸道感染和呼吸功能锻炼。观察组在对照组的基础上联合自拟补肺健脾益肾方治疗,疗程为3个月。观察2组患者治疗前后临床症状评分、慢性阻塞性肺疾病评估测量表(CAT)评分、肺功能指标以及血清TGF-β1、bFGF、SOD水平的变化情况,评价2组患者的临床疗效,并采用改良呼吸困难量表(m MRC)评估患者治疗后的呼吸困难改善情况。【结果】(1)治疗3个月后,观察组的总有效率为95.35%(41/43),对照组为81.40%(35/43),组间比较,观察组的疗效明显优于对照组(P<0.05)。(2)治疗后,2组患者的中医临床症状评分(包括主症评分和次症评分)、CAT评分和急性加重次数均较治疗前降低(P<0.05),且观察组的降低作用均明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。(3)治疗后,2组患者的1秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)及FEV1/FVC等肺功能指标均较治疗前改善(P<0.05),且观察组的改善作用均明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。(4)治疗3个月后,观察组患者的呼吸困难改善程度明显优于对照组(P<0.05)。(5)治疗后,2组患者血清SOD水平均较治疗前升高(P<0.05),血清TGF-β1、b FGF水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组对血清SOD水平的升高作用及对血清TGF-β1、bFGF水平的降低作用均明显优于对照组(P<0.01)。【结论】自拟补肺健脾益肾方对COPD稳定期患者疗效显著,可有效改善患者呼吸困难等临床症状与肺功能,降低急性加重发作次数,提高患者生活质量,其机制可能与清除自由基、降低气道炎症反应及纤维化有关。

血清SOD1、BACE1水平与认知功能障碍的相关性

目的 拟探讨血清β分泌酶(BACE)1、超氧化物歧化酶(SOD)1水平与认知功能障碍的相关性。方法 选取2018年1月至2020年10月在新疆医科大学第一附属医院老年病科就诊、年龄≥60岁、诊断为阿尔茨海默病(AD)的老年患者57例,轻度认知障碍(MCI)患者92例,另选同期健康体检者为对照104例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述3组间蛋白水平。结果 AD组血清BACE1、SOD1水平明显低于MCI组、对照组(P<0.05);AD组男性患者血清BACE1水平明显低于MCI组(P<0.05)。Pearson相关性分析表明:血清BACE1水平与MCI呈正相关(P<0.05)。多因素有序Logistic回归分析表明:年龄、腹围、总胆固醇水平是认知功能障碍的独立危险因素(P<0.05),头围、高密度脂蛋白(HDL)可能是认知功能障碍的保护因素(P<0.05)。结论 低水平的血清BACE1、SOD1可能与认知功能障碍相关。

柴芩承气汤干预急性胰腺炎的配伍规律及作用机制

目的:探讨不同配伍的柴芩承气汤治疗急性胰腺炎(AP)的临床效果及作用机制。方法:昆明小鼠采用区组随机化随机分为6组,分别是空白对照组、模型组、柴芩承气汤A组、柴芩承气汤B组、柴芩承气汤C组、柴芩承气汤D组,每组10只。模型组给予20%L-精氨酸腹腔注射复制AP小鼠模型,柴芩承气汤A、B、C、D组在此基础上给予不同配伍的柴芩承气汤(生药浓度1 g/mL)灌胃,2次/d,连续给药3 d。造模后72 h取材,检测小鼠胰腺脏体比、血清淀粉酶(AMS)含量,观察小鼠胰腺病理学改变,并检测血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果:不同配伍的柴芩承气汤均可降低AP小鼠胰腺脏体比,改善胰腺的水肿、出血和坏死程度,降低血清淀粉酶水平,并明显降低血清MDA含量,升高血清SOD含量。柴芩承气汤A组对AP小鼠胰腺水肿和血清MDA含量的改善效果最好,柴芩承气汤B组对AP小鼠胰腺病理损伤和血清淀粉酶含量的改善效果最佳,柴芩承气汤D组对AP小鼠血清SOD含量的改善效果最好。结论:不同配伍的柴芩承气汤均能有效缓解AP小鼠的病变程度,但根据加减药物不同,其干预效果各有侧重。

SOD与植物胁迫抗性

SOD是生物体内超氧阴离子自由基的清除剂,有效地防止它们对生物体的损害,几乎参与了生物体对各种逆境的生理生化反应,是生物体内一种很重要的抗氧化酶类,有很好的科研价值和应用价值。本文介绍了SOD的分类、位置、结构,并就近几年SOD与环境胁迫、抗病、抗衰老、转基因等抗逆方面的最新研究进展进行了综述,结合本实验室关于短季棉早熟不早衰研究,对SOD的研究与应用进行了展望。

超声波辅助酶法分离提取葡萄酒泥酵母SOD工艺条件的优化

以葡萄酒泥酵母为试材,超氧化物歧化酶(SOD)比活力为指标,在超声功率、超声时间、蜗牛酶质量浓度、酶解pH值和酶解温度等单因素试验基础上,采用正交试验优化超声波辅助蜗牛酶法提取SOD的工艺条件。结果表明:提取工艺因素对SOD比活力影响大小顺序为超声时间>蜗牛酶质量浓度>超声功率>酶解pH值>酶解温度,1 g湿酵母悬浮于5 mL 0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液,其提取SOD最佳工艺条件为超声功率400 W、超声时间12 min、2.0 mg/100 mL蜗牛酶液1 mL、pH 6.6、温度37℃,在此条件下,分离提取得到的SOD比活力达192.27 U/mg。结果表明超声波辅助酶法在葡萄酒泥酵母SOD的提取中具有较高的应用价值。

低浓度阿特拉津对鲫鱼超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响

将鲫鱼分别暴露于浓度为0、0.1、0.5、1.0、5.0和10.0mg·L-1的阿特拉津溶液中,在染毒后的第3、6、10、14、19和24d对1.0和10.0mg·L-1两个浓度组的鲫鱼进行取样;在实验结束时(24d)对所有浓度组进行取样,分别测定其肝脏、肾脏和肌肉中SOD活性,研究在不同作用时间和不同暴露浓度下,阿特拉津对鲫鱼肝脏、肾脏和肌肉SOD活性的影响。结果表明,阿特拉津能使鲫鱼肝脏、肾脏和肌肉SOD活性产生显著变化。在染毒后的第24d,各浓度组肝脏SOD活性均受到抑制,肾脏SOD活性均受到诱导,肌肉SOD活性在低浓度下受抑制,高浓度下被诱导;且在本实验所设浓度范围内,阿特拉津与肝脏SOD活性之间存在剂量-效应关系,与肾脏SOD活性在1.0～10.0mg·L-1范围内存在剂量-效应关系。在14～24d内,阿特拉津与肌肉SOD活性之间存在时间-效应关系,与肝脏和肾脏SOD活性之间在任何时间范围内都不存在明显的时间-效应关系,但在整个实验期内,1.0和10.0mg·L-1两个暴露浓度对同一器官SOD活性的影响具有相同的变化趋势。

红酵母提取SOD的研究

研究了从红酵母中提取、纯化超氧化物歧化酶(SOD)的方法和条件。所得SOD酶比活2297.20U/mg,对粗酶液的收率为89.94%,纯化倍数为11倍。

佛州侧耳子实体锰型SOD的纯化及性质研究

佛州侧耳（ＰｌｅｕｒｏｔｕｓｆｌｏｒｉｄａｎｕｓＳｉｎｇｅｒ）子实体ＳＯＤ同工酶只有一条较宽的谱带，确认为Ｍｎ－ＳＯＤ，有其资源和学术研究上的意义。以简化的方法提纯其Ｍｎ－ＳＯＤ，活性回收率显著提高。该酶分子为二聚体。荧光光谱在３５５．１ｎｍ处有最大发射峰。氯仿－乙醇混合液（２∶３／ｖ∶ｖ）对该酶的抑制属于非竞争性抑制。它的碱性氨基酸和酸性氨基酸的比值与酵母的相近。

盐生杜氏藻锰超氧化物歧化酶(MnSOD)在大肠杆菌中的功能鉴定

将极端耐盐的盐生杜氏藻(Dunaliella salina)的锰超氧化物歧化酶(DsMnSOD)基因克隆到表达载体pET32a中,并转入SOD缺陷型大肠杆菌菌株K12(SOD-)中,诱导重组蛋白表达,在耐盐、抗辐射和抗寒方面对其功能进行验证.结果显示,导入外源DsMnSOD基因的工程菌,在有氧条件下受到各种胁迫时,生长状况明显优于原菌,其耐受NaCl浓度从8%提高到10%,耐受紫外线(295 nm,83μW/cm2)照射时间从45 s提高到65 s,4℃培养的存活率从10.7%提高19.0%,且SOD的酶活表达依赖于Mn2+的存在.

超氧化物歧化酶(SOD)的研究和应用进展

超氧化物歧化酶(SOD)是一类广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶,是化学生物界研究的热点之一。作为生物体内自由基的清洁剂,SOD对生物体(包括人体)具有重要的功能作用。

Phen-铜(Ⅱ)-氨基酸配合物的合成、表征及其SOD活性

合成了3个新的SOD模拟配合物:[Cu(Phen)(L-Gln)(H2O)]Cl·2H2O(1)、[Cu(Phen)(L-Ala)(H2O)]Cl·4H2O(2)、[Cu(Phen)(L-Thr)(H2O)]Cl·2H2O(3)[Phen(1,10-邻菲咯啉)、L-Gln(谷氨酰胺)、L-Ala(丙氨酸)、L-Thr(苏氨酸)]。用元素分析、摩尔电导、红外光谱、紫外-可见光谱对配合物进行了表征。用X-射线衍射对配合物[Cu(Phen)(L-Gln)(H2O)]Cl·2H2O的晶体结构进行了测定。用氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光还原法对这3个配合物催化歧化超氧阴离子自由基(O2-·)的能力进行了测定。结果表明:这些配合物具有较高的SOD活性,催化速率常数KQ分别为1.58×107mol-1·L·s-1、5.65×107mol-1·L·s-1、0.83×107mol-1·L·s-1。

过量表达小麦超氧化物歧化酶(SOD)基因对烟草耐盐能力的影响

利用前期克隆的小麦超氧化物歧化酶(SOD)基因TaSOD1.1和TaSOD1.2,构建融合上述基因编码阅读框(ORF)的双元表达载体。采用农杆菌介导的遗传转化技术,获得了过量表达TaSOD1.1和TaSOD1.2的转基因烟草植株。研究表明,NaCl处理下,与对照相比,转基因植株伤害较小,叶片失绿面积较少,植株长势明显增强,叶片的SOD活性均明显提高,而MDA含量明显降低。转基因植株的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量,以及可溶性糖和可溶性蛋白含量也表现与SOD活性相同的趋势。表明在烟草中高表达小麦TaSOD1.1和TaSOD1.2基因,通过外源基因在转录水平上的调节,能增加植株SOD活性,减轻盐分胁迫造成的细胞膜质过氧化,增强植株抵御盐分胁迫的能力。

低浓度阿维菌素对鲤鱼超氧化物歧化酶(SOD)的影响

研究了阿维菌素长期暴露下鲤鱼肝脏和肌肉超氧化物歧化酶(SOD)活性的动态变化.结果表明:阿维菌素对SOD活性具有较大影响.低浓度组(3.2μg·L-1)SOD活性随暴露时间无显著变化(p>0.05);中浓度组(5.6μg·L-1和7.5μg·L-1)SOD活性先显著上升(p<0.05),随后又显著下降(p<0.05);高浓度组(10μg·L-1和18μg·L-1)SOD活性呈逐渐下降趋势,48h后极显著低于对照(p<0.01).解除污染胁迫10d,低浓度和中浓度组SOD活性能恢复到正常水平,但高浓度组SOD活性不能恢复到正常水平,说明低浓度阿维菌素对鲤鱼机体产生的损伤是可逆性的,而高浓度阿维菌素会对鲤鱼机体产生不可逆损伤.阿维菌素暴露浓度与其对鲤鱼肝脏和肌肉SOD活性抑制率之间具有显著剂量-效应关系,可以考虑将其作为水体中阿维菌素类药物污染的生物标志物;同时,由于正常鲤鱼(对照组)肌肉中SOD活性和受污染胁迫时SOD活性变化的显著性远低于肝脏,因此在考虑用SOD作为生物标志物对水体中阿维菌素污染进行监测时,肝脏是比较理想的取样器官.

人参二醇组皂甙对游泳训练大鼠LPO和SOD的影响

目的 :观察人参二醇组皂甙 (PDS)对游泳训练大鼠超氧化物歧化酶 (SOD)与脂质过氧化物(L PO)水平的影响。方法 :TBA比色法和邻苯三酚 -氯化硝基四氮唑蓝法。结果 :PDS可降低肝、肾、心与骨骼肌组织中的 L PO水平 ,提高红细胞与肺组织中 SOD活性 ,并且这些作用优于甲基睾酮对照组。结论

邻苯三酚自氧化法适于测定SOD活性吗?

用邻苯三酚自氧化法测定了Cu-ZnSOD(Superoxidedismutase,SOD)及根据天然超氧化物歧化酶活性部位结构设计、合成的一些模型化合物(themodelsofSOD,MSOD)活性.测试结果表明:Cu-ZnSOD和含Cu( )、Fe( )、Mn( 、 )的SOD模型化合物随浓度升高,有的对邻苯三酚氧化表现为负抑制(即促进邻苯三酚氧化);另一部分化合物在较低浓度表现为抑制,较高浓度表现为负抑制的交替变化;或抑制率的无规则变化.本文对出现负抑制的内在根源进行了探讨,鉴于邻苯三酚自氧化的复杂反应机理;含Cu( )、Fe( )、Mn( 、 )SOD模型化合物的多酚氧化酶活性和Fenton反应催化活性,及MSOD中金属离子的Lewis酸性,不宜采用邻苯三酚自氧化法测定SOD活性.

刺梨SOD活力测定研究

本文建立了邻苯三酚自氧化对刺梨SOD测活方法的改进条件;并对不同方法提取的刺梨SOD样液进行测活。结果表明:刺梨果中含有丰富的SOD,但加工过程中温度对SOD活力影晌很大。测得的SOD活力数据低的约100U/g,高的则约5000U/g,数值相差几十倍。为刺梨加工方法的选择提供参考。

饲料中硒的添加量与中华米虾肌肉中SOD的活性

研究了饲料中添加量为0、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75μg/g的硒,对中华米虾(Caridina denticulatasinensis)体内超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响。结果表明,硒对中华米虾体内SOD的激活作用显著,并表现出明显的时间效应和剂量效应。随着养殖时间的延长,各实验组虾体内SOD的活性会相应地降低。饲料中添加硒浓度为0.45μg/g时,虾体SOD的活性最高。