miR-145-5p调控Survivin通过凋亡通路对食管癌生物学行为的影响

目的:探讨miR-145-5p靶向调控Survivin及凋亡信号通路对食管癌凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测食管癌组织和细胞系中miR-145-5p、Survivin mRNA相对表达量。双荧光素酶报告基因分析验证miR-145-5p和Survivin的靶向调控关系。通过RT-qPCR法测定细胞转染后miR-145-5p和Survivin mRNA的相对表达量。Western blot检测凋亡通路中BCL2、MDM2和Caspase-3蛋白的表达。通过MTT、流式细胞术、划痕愈合实验及Transwell小室实验检测TE-1细胞存活能力、凋亡率、迁移率及侵袭能力。结果:与癌旁组织相比,miR-145-5p在癌组织中表达低,而Survivin表达高(P<0.05)。与正常食管黏膜上皮HEEC细胞相比,食管癌TE-1细胞中miR-145-5p低表达,Survivin高表达(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-145-5p和Survivin间存在靶向调控关系。与未转染和转染miR-145-5p对照物的TE-1细胞相比,转染miR-145-5p模拟物后可显著增加miR-145-5p的表达,抑制Survivin mRNA的表达,同时BCL2和MDM2蛋白的表达下降,Caspase-3表达上升,促进细胞凋亡,抑制了细胞活性、侵袭和迁移能力(P<0.05)。结论:通过miR-145-5p的负向调控,Survivin表达被抑制,凋亡通路被激活,从而促进细胞凋亡,抑制食管癌细胞存活,侵袭和迁移能力。

超声收缩期峰值血流速度、阻力指数与乳腺癌组织中Survivin、基质金属蛋白酶-11、人类表皮生长因子受体2关系研究

目的:探讨超声收缩期峰值血流速度(PSV)、阻力指数(RI)与乳腺癌组织中Survivin、基质金属蛋白酶-11(MMP-11)、人类表皮生长因子受体2(HER2)的关系。方法:选取60例乳腺癌患者作为观察组,另选择同期60例乳腺良性病变患者作为对照组。均行手术治疗,术前经超声检测,比较两组患者术前RI值、PSV值,免疫组化法检测术后癌组织中Survivin、MMP-11、HER2的表达,分析Survivin、MMP-11、HER2表达与超声RI、PSV值的关系。结果:观察组RI、PSV值高于对照组(均P<0.05)。观察组癌组织中Survivin、MMP-11、HER2表达阳性率高于对照组(均P<0.05)。不同病灶直径、临床分期患者RI、PSV值,不同病灶直径、临床分期及是否淋巴结转移患者癌组织中Survivin、MMP-11、HER2表达比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。癌组织中Survivin、MMP-11、HER2表达与PSV、RI值呈正相关(均P<0.05)。结论:超声检测RI、PSV值对术前判断乳腺癌有一定价值,RI、PSV值与乳腺癌癌组织Survivin、MMP-11、HER2表达均相关,Survivin、MMP-11、HER2在乳腺癌的发生、发展过程中发挥重要作用。

miR-203a-3p对食管癌细胞侵袭迁移能力的影响及其与Survivin的靶向调控关系

目的观察微小RNA(miR)-203a-3p对食管癌细胞侵袭、迁移能力的影响并分析其与Survivin的靶向调控关系。方法收集对数生长期的食管癌细胞TE-1及正常食管黏膜上皮细胞HEEC,RT-qPCR法检测细胞miR-203a-3p、Survivin mRNA。双荧光素酶报告基因检测法分析miR-203a-3p与Survivin的靶向调控关系。将TE-1细胞分为对照组、miR-203a-3p模拟组、miR-203a-3p抑制组及阴性对照组。miR-203a-3p模拟组转染miR-203a-3p mimic,miR-203a-3p抑制组转染miR-203a-3p inhibitor,阴性对照组转染miR-203a-3p NC,对照组不进行转染,RT-qPCR法验证转染效率。采用MTT法检测转染后2、12、24、36、48 h的细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果食管癌细胞中miR-203a-3p mRNA表达低于正常食管黏膜上皮细胞,Survivin mRNA表达高于正常食管黏膜上皮细胞(P均<0.05)。TargetScan数据库分析显示,Survivin基因在3′UTR端存在7个连续的可以与miR-203a-3p互补的核苷酸序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,共转染Survivin-WT和miR-203a-3p mimic质粒的TE-1细胞荧光素酶活性低于其他细胞(P<0.05)。培养12、24、36、48 h时细胞活力miR-203a-3p抑制组>对照组、阴性对照组>miR-203a-3p模拟组(P均<0.05);细胞迁移距离及侵袭细胞数miR-203a-3p抑制组>对照组、阴性对照组>miR-203a-3p模拟组(P均<0.05)。结论miR-203a-3p高表达可抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与靶向负调控Survivin有关。

甲状腺乳头状癌患者Survivin和VEGF-C表达水平及在淋巴转移中的协同作用

目的 探讨甲状腺乳头状癌患者Survivin和血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-c, VEGF-C)表达水平及其在淋巴转移中的协同作用。方法 前瞻性纳入2019年1月到2020年12月甲状腺乳头状癌患者86例为研究对象,入院时测量所有受试者Survivin和VEGF-C表达水平,采用Pearson相关系数分析Survivin和VEGF-C表达水平的相关性,后随访1年,根据患者是否发生淋巴转移分为转移组和非转移组;使用Logistic回归方程分析Survivin和VEGF-C表达水平对甲状腺乳头状癌患者淋巴转移的影响,绘制ROC曲线分析其预测效能。结果 86例甲状腺乳头状癌患者随访1年后,共7例失访,其中29例患者出现淋巴转移,为转移组,50例患者未出现淋巴转移,为未转移组。Survivin和VEGF-C表达水平转移组高于未转移组,Pearson相关系数分析显示Survivin与VEGF-C表达水平呈正相关(r=0.418,P<0.05);Logistic回归方程分析显示Survivin(OR=1.952)、VEGF-C(OR=1.790)高表达均为甲状腺乳头状癌患者淋巴转移的危险因素,ROC曲线分析显示Survivin和VEGF-C的曲线下面积分别为0.878、0.776。结论 甲状腺乳头状癌患者Survivin和VEGF-C表达水平呈正相关,且在促进甲状腺乳头状癌淋巴转移中起协同作用。

Ets-1和survivin在宫颈鳞状细胞癌中的表达研究

目的 探讨宫颈鳞状细胞癌(宫颈鳞癌)Ets-1和survivin表达与患者临床病理指标的关系。方法应用免疫组化EliVision^(TM) plus二步法检测72例宫颈鳞癌手术标本及30例癌旁宫颈组织Ets-1和survivin表达,分析其表达与患者年龄、癌灶大小、浸润深度、分化等级、TNM分期、术前淋巴转移、术后5年内复发转移7项指标的关系。结果 Ets-1阳性染色可见于细胞核及细胞质,survivin阳性染色多见于细胞质,少见于细胞核。癌组织Ets-1和survivin阳性率(分别为63.9%,72.2%)均显著高于癌旁组织(分别为13.3%,3.3%)(P<0.05)。患者年龄、癌灶大小均与Ets-1和Survivin表达阳性率无关(P>0.05);浸润深度、分化等级、TNM分期、术前淋巴转移、术后5年内复发转移5项指标均与Ets-1和survivin表达阳性率相关(P<0.05)。72例患者Ets-1和survivin共阳率为58.3%,共阴率为22.2%,两者表达呈正相关(r=0.49,P<0.05)。结论 Ets-1和survivin与宫颈鳞癌的发生发展密切相关,两者高水平表达预示癌组织侵袭能力强、分化等级低、病情发展快、淋巴转移早、患者预后差。

原发性肝癌survivin基因表达及靶向survivin治疗

目的:研究原发性肝癌survivin基因表达及治疗靶点作用.方法:收集肝癌和癌旁组织40例.Westernblot法检测survivin蛋白表达,RT-PCR法检测survivinmRNA.原位末端标记法检测组织凋亡指数.设计合成survivin反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASODN)转染hepG2细胞,设置空白对照组、脂质体组、正义链组和各浓度ASODN组.流式细胞术检测凋亡指数,MTT法检测化疗药物对细胞生长抑制率.建立原位荷肝癌鼠模型并分为3组:反义survivin链组、空白对照组及脂质体组.V=ab2/2计算肿瘤体积,以V治疗后/V治疗前×100%计算生长指数.结果:肝癌细胞株和34/40例肝癌组织表达survivin蛋白及mRNA,癌旁组织无survivin表达.肝内转移组(93.5%)和门静脉癌栓组(92.8%)survivin蛋白表达阳性率显著高于阴性组(55.6%)和无癌栓组(66.7%)(p<0.05)肝内转移组(1.105±0.396)和门静脉癌栓组(1.137±0.404)survivinmRNA水平显著高于阴性组(0.572±0.082)和无癌栓组(0.627±0.122)(P<0.05).Survivin阳性组织凋亡指数为1.15±0.33%,显著低于阴性组(4.50±0.83%)(P=0.00002).ASODN组survivin表达减弱,凋亡指数增高,200nmol/L组为10.50±0.76%,400nmol/L组为12.99±0.42%,600nmol/L组为22.21±1.26%,明显高于对照组(P<0.05).化疗药物对ASODN组生长抑制率增高,200nmol/L组为47.7±4.6%(5-FU)、59.7±3.5%(DDP),400nmol/L组为56.8±4.0%(5-FU)、68.2±2.1%(DDP),600nmol/L组为85.2±2.3%(5-FU)、79.9±3.7%(DDP),明显高于对照组(P<0.05).23/25裸鼠成功建立原位荷肝癌动物模型.ASODN组肿瘤生长指数为51.0±24.2%,显著低于空白对照组(70.2±23.4%)和脂质体组(168.0±28.6%)(P<0.05).ASODN组凋亡指数为21.97±2.11%,显著高于空白对照组(3.21±0.57%)和脂质体组(3.07±0.81%)(P<0.05).结论:survivin在HCC发生中有重要作用.survivinASODN转染能下调survivin表达,诱导细胞凋亡,增加HCC细胞对化疗药物敏感性.survivinASODN对荷HCC鼠有一定治疗作用.

血清survivin、ABCA1与急性心肌梗死单支冠脉闭塞患者冠脉侧支循环不良的关系分析

目的探讨血清生存素(survivin)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)与急性心肌梗死(AMI)单支冠脉闭塞患者冠脉侧支循环(CCC)不良的关系。方法选取2021年5月至2023年5月在邯郸市第一医院收治的155例AMI单支冠脉闭塞患者作为研究对象,根据其CCC情况分为CCC不良组(n=80)和CCC良好组(n=75)。比较两组血清survivin、ABCA1水平,采用单因素和多因素Logistic回归模型分析CCC不良的影响因素,以及采用受试者工作特征曲线分析血清survivin、ABCA1预测CCC不良的效能。结果与CCC良好组比较,CCC不良组血清survivin、ABCA1显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与CCC良好组比较,CCC不良组Gensini评分、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、Killip心功能分级≥Ⅱ级占比、高血压史占比显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归模型显示,高Gensini评分、高CK-MB、Killip心功能分级≥Ⅱ级、有高血压史是CCC不良的危险因素(P<0.05),高survivin、高ABCA1为其保护因素(P<0.05);两项指标联合预测CCC不良的曲线下面积、灵敏度、特异度依次为0.949、90.70%、92.52%,显著优于单项检测。结论血清survivin、ABCA1与AMI单支冠脉闭塞患者CCC不良密切相关,血清survivin、ABCA1水平越低者CCC不良风险越大,两者联合检测对AMI单支冠脉闭塞患者CCC不良有较高的预测价值。

Hp感染与胃癌组织凋亡抑制基因Survivin、MMP-2的表达及其关联性

目的 研究幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌组织凋亡抑制基因存活素(Survivin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达及其两者的关联性。方法 选取120例胃癌患者为研究对象,采用免疫组化染色法检测癌组织及癌旁组织中Survivin、MMP-2表达,分析其与临床病理特征关系;并检测Hp阳性情况,对比不同感染情况胃癌患者的病理特征及组织凋亡抑制基因Survivin、MMP-2表达,采用Spearman分析Hp感染与Survivin、MMP-2表达的关系。结果 Survivin、MMP-2在胃癌组织中的阳性表达率为76.67%、73.33%,均高于癌旁组织的16.67%和13.33%(P<0.05)。Survivin、MMP-2表达与TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05);与年龄、性别、肿瘤直径无关(P>0.05)。Hp阳性65例,阴性55例。Hp阳性组患者肿瘤分化程度为低-中分化、肿瘤浸润深度及淋巴结转移发生率均高于Hp阴性组(P<0.05),2组年龄、性别、TNM分期、肿瘤直径比较无差异(P>0.05)。Hp阳性组胃癌组织中Survivin、MMP-2阳性表达率为87.69%、83.08%,均高于Hp阴性组的63.64%和61.82%(P<0.05)。Spearman相关分析显示,Hp感染与Survivin、MMP-2表达呈正相关性(γ=0.357、0.349,P<0.05)。结论 Survivin、MMP-2表达均与胃癌发生有关,且Hp感染能够增加胃癌组织凋亡抑制基因Survivin、MMP-2表达。

SIRT2、P65和Survivin在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的通过检测SIRT2、P65和生存素(Survivin)蛋白在乳腺癌中的表达,探讨其在乳腺癌中的相互关系及与乳腺癌的临床病理特征的关系。方法384例乳腺浸润性癌患者作为乳腺癌组,31例乳腺纤维腺病患者作为对照组,采用免疫组化EnVision二步法检测两组乳腺病变组织内SIRT2、P65、Survivin的蛋白表达,同时收集乳腺癌组患者相关临床病理特征资料(年龄、分子分型、TNM分期、组织学分级、淋巴结转移及月经情况),分析SIRT2、P65及Survivin蛋白在乳腺癌组中的表达与临床病理特征的关系,分析SIRT2、P65及Survivin蛋白在乳腺癌组表达的相关性。结果乳腺癌组中SIRT2、Survivin蛋白高表达,表达率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);SIRT2、P65及Survivin蛋白在不同分子分型、TNM分期乳腺癌患者的高表达,差异有统计学意义(P<0.05);SIRT2蛋白在LuminalB1型中的高表达率高于其他分型(P<0.05),P65蛋白在LuminalA型中的高表达率高于其他分型(P<0.05),Survivin蛋白在HER-2阳性型的高表达率高于其他分型(P<0.05);SIRT2、P65及Survivin蛋白在TNM分期中Ⅲ~Ⅳ期高表达率较Ⅰ~Ⅱ期高(P<0.05);SIRT2和P65蛋白在淋巴结转移与非转移乳腺癌患者间的高表达,差异有统计学意义(P<0.05),其中转移的高表达率较非转移高;P65和Survivin蛋白在不同组织学分级乳腺癌患者间高表达,差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅰ级的高表达率较Ⅱ、Ⅲ级高;乳腺癌组中SIRT2与P65和Survivin蛋白表达均呈正相关(r分别为0.371和0.310,P<0.001),P65与Survivin蛋白表达呈正相关(r=0.466,P<0.001)。结论乳腺癌组织存在SIRT2及Survivin蛋白表达上调,这可能是影响乳腺癌组织学分级及TNM分期、分子分型等临床病理特征的机制。

乙酰基转移酶KAT2A和Survivin蛋白乙酰化在食管癌中的相关性研究

目的 探讨食管癌组织中乙酰基转移酶2A(KAT2A)表达与Survivin蛋白乙酰化水平,分析二者在食管癌发生过程中的相关性。方法 选取70例食管鳞癌组织及其癌旁正常食管黏膜组织。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Survivin和KAT2A mRNA的表达,免疫组化及Western blotting检测Survivin和KAT2A的蛋白表达,免疫荧光验证Survivin和KAT2A在癌组织中的定位及表达;免疫共沉淀检测Survivin乙酰化。分析Survivin蛋白乙酰化与KAT2A的相关性及其二者与食管癌临床病理特征的关系。构建KAT2A RNA干扰序列,脂质体介导法转染至食管癌EC109细胞。应用qRT-PCR和Western blotting检测转染siRNA-KAT2A的食管癌EC109细胞中KAT2A mRNA和蛋白表达水平,免疫共沉淀检测EC109细胞中Survivin蛋白乙酰化水平。结果 食管癌组织中Survivin和KAT2A mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05);食管癌组织中Survivin和KAT2A蛋白呈高表达,而癌旁组织则呈低表达。免疫荧光证实Survivin和KAT2A蛋白在癌组织中同时呈现高表达状态,二者主要表达于细胞质中,部分表达于细胞核中。食管癌组织中Survivin蛋白发生了乙酰化,且食管癌组织中的乙酰化率显著高于癌旁组织(P<0.05);在食管癌组织中Survivin乙酰化和KAT2A表达呈正相关(r=0.517,P<0.05);Survivin乙酰化和KAT2A表达与食管癌的TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。体外实验显示,RNA干扰下调KAT2A对食管癌细胞Survivin mRNA和蛋白表达量均无影响(P>0.05),但Survivin蛋白的乙酰化水平显著降低(P<0.05)。结论 在食管病变过程中KAT2A参与了Survivin乙酰化修饰,其高表达可能是Survivin乙酰化修饰重要的前期分子事件,在食管癌的诊治中具有潜在应用价值。

Survivin、IMP3及Claudin1在浆膜腔积液细胞蜡块中的表达及临床意义

目的探讨Survivin、胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(insulin-like growth factorⅡmRNA-binding protein 3,IMP3)及Claudin1在浆膜腔积液细胞蜡块中的表达及临床意义。方法收集我院病理科2017年2月~2021年11月行免疫组化检查且临床资料齐全的浆膜腔积液细胞块95例,其中恶性84例,良性11例(对照组)。应用免疫组化方法检测浆膜腔积液细胞蜡块中Survivin、IMP3及Claudin1蛋白的表达情况,并对比分析其在良恶性浆膜腔积液以及不同恶性肿瘤中的差异。结果恶性胸膜腔积液病例中胸腔积液53例,腹腔积液31例。肺腺癌41例,消化系统腺癌25例,卵巢恶性肿瘤9例,其他恶性肿瘤9例。与对照组相比,肺腺癌组及消化系统腺癌组IMP3的表达差异具有统计学意义(P<0.05),消化系统腺癌组Claudin1的表达差异具有统计学意义(P<0.05),其他组别Survivin、IMP3及Claudin1的表达与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论IMP3及Claudin1在恶性浆膜腔积液判断是否为消化系统腺癌来源时具有鉴别意义,IMP3在肺腺癌来源具有鉴别意义。

胃腺体组织癌变过程中CD44和survivin表达与幽门螺杆菌感染的相关性及其在胃癌浸润和转移中的作用

目的分析胃腺体组织癌变过程中CD44、survivin表达与幽门螺杆菌(HP)感染的相关性,探讨CD44、survivin在胃腺体组织癌变过程及胃癌(GC)浸润和转移中的作用。方法选择2022年4月至2022年6月于新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的资料完整且为首次经胃镜及病理学检查后确诊慢性非萎缩性胃炎(CNAG)患者(CNAG组)、慢性萎缩性胃炎(CAG)患者(CAG组)、肠上皮化生(IM)患者(IM组)、异型增生(AH)患者(AH组)和GC患者(GC组)各50例为研究对象,收集各组患者的胃黏膜病变组织。采用快速尿素酶和碳14法分别检测CNAG、CAG、IM、AH和GC患者胃黏膜病变组织中HP感染情况,苏木精-伊红染色观察不同患者胃黏膜病变组织形态,免疫组织化学法检测不同患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin的蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应检测不同患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin mRNA表达。结果250例患者中,HP感染率为50.4%(126/250),其中CNAG、CAG、IM、AH和GC患者的HP感染率分别为10.0%(5/50)、24.0%(12/50)、44.0%(22/50)、68.0%(34/50)、80.0%(40/50),HP感染率呈显著增高趋势(χ^(2)=68.068,P<0.001)。CNAG组、CAG组、IM组、AH组和GC组患者胃黏膜病变组织中CD44蛋白阳性表达率分别为4.0%、16.0%、32.0%、62.0%、80.0%,呈逐渐升高趋势(χ^(2)=84.50,P<0.001)。CAG组、IM组、AH组和GC组胃黏膜病变组织中survivin蛋白阳性表达率分别为18.0%、38.0%、58.0%、68.0%,呈逐渐升高趋势(χ^(2)=67.63,P<0.001)。CAG组、IM组、AH组和GC组患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin mRNA相对表达量显著高于CNAG组,IM组、AH组和GC组患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin mRNA相对表达量显著高于CAG组,AH组和GC组患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin mRNA相对表达量显著高于IM组,GC组患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin mRNA相对表达量显著高于AH组(P<0.001)。CAG组、IM组、AH和GC组HP阳性患者胃黏膜组织中CD44、survivin蛋白阳性表达率显著高于阴性患者(P<0.01)。CNAG组HP阳性患者与阴性患者胃黏膜组织中CD44、survivin蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。CD44和survivin蛋白表达与GC患者癌组织分化程度、淋巴结转移、远处转移相关(P<0.05),CD44和survivin蛋白表达与GC患者的浸润深度无相关性(P>0.05)。结论HP感染与CD44和survivin基因表达间存在正关联,胃腺体组织癌变过程中Hp感染可能诱导CD44和survivin基因表达,从而通过改变黏膜细胞的生物学活性来发挥促癌作用;CD44和survivin可促进GC的浸润和转移。

Survivin、Livin和NF-kB在大肠癌中的表达及影响探究

探讨大肠癌组织中Survivin,Livin和NF-kB的表达以及大肠癌细胞HT29增殖和凋亡受到siRNA沉默Survivin基因的影响。方法:回顾性选取2020年2月-2022年2月本院慢性肠炎组织50例、大肠癌(临床上无转移)组织50例,转移性大肠癌组织50例以上,共150例。统计分析慢性肠炎组织和大肠癌组织中Survivin,Livin和NF-kB表达,分析大肠癌组织中Survivin,Livin表达和临床病理特征的相关性,并统计分析Survivin-siRNA转染后1 d、2 d、3 d增殖抑制率及Survivin-siRNA转染后凋亡比例。结果 大肠癌组织中Survivin,Livin和NF-kB表达阳性率均高于慢性肠炎组织(P<0.05)。突破肌层患者大肠癌组织中Survivin,Livin表达阳性率高于未突破肌层患者(P<0.05),有淋巴结转移患者大肠癌组织中Survivin,Livin表达阳性率高于无淋巴结转移患者(P<0.05),Duke’s分期C+D期患者大肠癌组织中Survivin,Livin表达阳性率高于A+B期患者(P<0.05)。空白组、阴性对照组、Survivin-siRNA组、5-Fu 24 h组患者Survivin-siRNA转染后1 d、2 d、3 d增殖抑制率均逐渐升高(P<0.05),Survivin-siRNA转染后M1值逐渐升高(P<0.05)。结论 大肠癌组织中Survivin,Livin和NF-kB的表达阳性率高,大肠癌细胞HT29增殖和凋亡分别受到siRNA沉默Survivin基因的抑制和促进。

膀胱移行细胞癌中survivin及其剪接变异体survivin-2B和survivin-ΔEx3的表达及意义

目的:研究survivin及其剪接变异体survivin-2B和survivin-ΔEx3在膀胱移行细胞癌中的表达,探讨其临床意义。方法:应用免疫组化及实时荧光定量PCR检测膀胱移行细胞癌、癌旁和正常膀胱组织survivin、survivin-2B和survivin-ΔEx3表达。结果:Survivin、survivin-2B和survivin-ΔEx3在膀胱移行细胞癌中均表达,与对照组差异有统计学意义。随着病理分级、临床分期升高,survivin和survivin-ΔEx3表达升高(P<0.05),且两者正相关(0<r<1,P<0.05);而survivin-2B的表达则降低(P<0.05)。结论:Survivin、survivin-2B和survivin-ΔEx3可能在膀胱移行细胞癌的发生发展中起不同作用,为膀胱移行细胞癌的诊断治疗提供新的思路。

砷对雄性大鼠睾丸组织AQP-8及survivin蛋白表达的影响

[目的]研究亚慢性砷中毒对大鼠睾丸组织AQP-8及survivin蛋白表达的影响。[方法]将40只健康成年清洁级SD雄性大鼠随机分为对照组以及低、中、高剂量砷染毒组,每组10只;采用自由饮水方式染毒,低、中、高剂量染毒组饮水中亚砷酸钠浓度分别为2.4、12.0、60.0 mg/L,连续染毒15周,对照组饮用蒸馏水;染毒试验结束后,对各组大鼠进行精子计数,计算精子存活率;制备睾丸组织切片进行病理学观察;利用免疫组化及Western blotting法测定大鼠睾丸组织中AQP-8及survivin蛋白的表达水平。[结果]与对照组相比,中、高剂量染毒组大鼠精子计数与精子存活率均降低,且差异显著(P<0.05)。低剂量染毒组大鼠生精小管无明显变化;中剂量染毒组大鼠生精上皮层数减少,小管间隙增宽;高剂量染毒组大鼠部分生精小管出现基膜溶解,生精上皮细胞层次紊乱,细胞间隙增大,间质出现水肿、渗出。免疫组化分析结果显示,AQP-8蛋白主要表达于各级生精细胞的细胞膜和精子细胞,与对照组相比,各剂量染毒组大鼠睾丸组织中AQP-8阳性细胞平均光密度值显著(P<0.05)升高;survivin蛋白主要表达于次级精母细胞和精子细胞的胞浆,与对照组相比,各剂量染毒组大鼠睾丸组织中survivin阳性细胞平均光密度值显著(P<0.05)降低。Western blotting分析结果显示,对照组和各剂量染毒组大鼠睾丸组织中均存在AQP-8及survivin蛋白的表达;与对照组相比,低、中、高剂量染毒组AQP-8蛋白表达量显著(P=0)增加,survivin蛋白表达量显著(P=0)降低。[结论]砷暴露使睾丸组织AQP-8蛋白表达量增加,survivin蛋白表达量下降,这可能是导致其雄性生殖毒性效应的机制之一。

烯壳铁氮磁珠介导SurvivinASO对肿瘤细胞的转染和抑制作用

基于石墨烯的生物相容性和对单链核酸的吸附性,研究烯壳铁氮磁珠(graphene-shelled ferro-nitride magnetic beads,GFeNMB)运载靶向Survivin的反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)及其对肿瘤细胞的抑制作用。首先用RNA Draw针对Survivin mRNA的二级结构设计ASO,合成FAM标记和未标记的ASO;基于石墨烯对单链核酸的吸附性和对荧光团的淬灭性,采用酶标仪检测荧光强度方法检测GFeNMB对ASO的吸附能力,并对GFeNMB和GFeNMB-ASO表征;磁极作用下将Survivin ASO磁转染至人非小细胞肺癌细胞A549中,荧光显微镜观察GFeNMB将ASO载入细胞的能力;ASO转染后,采用Western blot检测Survivinr的表达,活性氧(reactive oxygen species,ROS)试剂盒、流式细胞仪检测细胞凋亡,CCK-8和划痕实验检测细胞增殖和迁移能力。结果表明,GFeNMB对ASO具有良好的吸附性,GFeNMB与ASO混合20 min达最大吸附量(0.44µg·mg^(-1));FAM-ASO经磁性载入细胞内呈绿色荧光且集中于细胞核,GFeNMB介导的核转染能力显著优于脂质体;ASO经磁转染至细胞后,Survivin蛋白的降低水平优于未处理组和脂质体转染组;磁转染Survivin ASO后,肿瘤细胞凋亡比例增大,细胞内ROS升高,细胞增殖和迁移能力受到抑制。综上,GFeNMB可将Survivin ASO转染至肿瘤细胞中,能够抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。GFeNMB-ASO磁转染细胞后下调靶基因表达的情况表明,GFeNMB有望成为单链寡核苷酸的转染介质。

C646靶向KAT3b通过Survivin乙酰化调控食管癌侵袭和迁移

目的探讨乙酰基转移酶抑制剂C646靶向KAT3b通过Survivin蛋白乙酰化影响食管癌细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)、迁移和侵袭的机制。方法体外培养食管癌TE-1细胞,MTT法筛选C646最佳给药浓度;C646处理TE-1细胞为实验组(C646组),DMSO处理TE-1细胞为对照组(DMSO组);实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测KAT3b mRN表达量;免疫共沉淀法检测Survivin蛋白乙酰化;Western blot法检测KAT3b及EMT相关蛋白表达;MTT法检测细胞存活能力,细胞划痕实验观察迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力。结果C646组中KAT3b mRNA和蛋白表达量下降,且Survivin蛋白乙酰化水平下降;C646组中E-cadherin蛋白表达上调,而N-cadherin、Snail和Slug蛋白表达下降。C646组中食管癌TE-1细胞存活、迁移和侵袭能力显著下降。结论C646可能通过下调KAT3b的表达降低Survivin蛋白乙酰化水平,进而抑制食管癌细胞EMT、存活及迁移侵袭能力。

RNAi沉默Survivin与ER-α36基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响

目的:靶向沉默人乳腺癌细胞Survivin与雌激素受体-α(ER-α)36双基因的表达,探讨其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用生物信息学技术设计并构建RNAi片段(siRNA-ER-α36),转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株。采用噻唑蓝染色法检测细胞增殖情况。采用RT-PCR、Western blot方法检测细胞中Survivin、ER-α36与凋亡蛋白Caspase-3的mRNA及蛋白表达情况;流式细胞术检测转染细胞凋亡率。结果:RNAi片段成功转染MDA-MB-231细胞,24 h转染率的平均值为68%,48 h转染效率可达76%(P<0.01)。与空白对照组比较,RNAi片段转染后MDA-MB-231细胞Survivin和ER-α36基因的mRNA和蛋白含量明显下降(P<0.05),而上调Caspase-3凋亡蛋白的表达;MDA-MB-231细胞增殖能力降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05)。结论:RNAi靶向沉默并下调Survivin与ER-α36基因的表达,上调Caspase-3凋亡蛋白的表达,从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进细胞凋亡,提示RNAi沉默可成为对乳腺癌相关基因功能研究的主要技术之一。

宫颈癌组织中Survivin、ICAM-3的表达及与放疗敏感性的关系

目的 探究宫颈癌组织中Survivin、ICAM-3的表达及与放疗敏感性的关系。方法 选取宫颈癌患者50例,根据放疗敏感性的不同将患者分为放疗敏感组(n=28)和放疗抵抗组(n=22)。采用免疫组化分析宫颈癌患者的Survivin、ICAM-3水平,比较其和临床病理特征及放疗敏感性的关系。结果 放疗敏感组和放疗抵抗组的FIGO分期差异无统计学意义(P>0.05),放疗抵抗组肿瘤的分化程度更低,肿瘤直径更大,差异有统计学意义(P<0.05)。放疗敏感组Survivin、ICAM-3的阳性表达率明显低于放疗抵抗组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果发现,分化程度、肿瘤直径与放疗敏感性无关(P>0.05),Survivin、ICAM-3表达水平与放疗敏感性有关(P<0.05)。结论 宫颈癌患者Survivin、ICAM-3水平以及临床病理特征与放疗敏感性有关,可为今后探索宫颈癌的预后指标提供一定的参考依据。

乳腺癌手术切除患者放疗前后外周血单个核细胞中Survivin、OTUD3 mRNA变化及与预后的关系

目的研究乳腺癌手术切除患者放疗前后外周血单个核细胞中生存素(Survivin)和去泛素化酶3(OUT domain-containing protein 3,OTUD3)mRNA的表达情况及与预后的关系。方法选取79例乳腺癌并行扩大根治术的患者作为观察组,在切除手术后对观察组患者行为期2个月的放射治疗,另选取同期健康体检志愿者55例作为对照组。检测观察组放疗前后及对照组的外周血单个细胞核中Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA表达情况,并且分析其变化及其与疾病预后的关系。结果观察组放疗前后外周血单个核细胞中Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA的表达量均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组放疗后外周血单个核细胞中Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA低于放疗前,差异具有统计学意义(P<0.05);检测放疗前后外周血单个核细胞中Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA的表达情况与年龄、肿瘤大小对比差异无统计学意义(P>0.05),与肿瘤分期、肿瘤分化和淋巴结转移情况对比差异具统计学关系;放疗前后外周血单个核细胞中Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA的表达量与肿瘤分期都呈现显著正相关关系(γ=0.622,γ=0.684,γ=0.705,γ=0.714;P<0.001);与肿瘤分化呈现显著负相关关系(γ=-0.548,γ=-0.629,γ=-0.574,γ=-0.596;P<0.001);与淋巴结转移呈现显著正相关关系(γ=0.685,γ=0.711,γ=0.697,γ=0.688;P<0.001)。根据ROC曲线获得,最佳界限以Survivin-mRNA(1.67)、OTUD3-mRNA(0.49)可获得ROC曲线下最大面积,两项联合检测结果阳性,表明乳腺癌术后放疗与Survivin-mRNA、OTUD3-mRNA密切相关,且两项联合检测的敏感度(81.0%)、特异度(83.6%)均高于单项检测(P<0.05)。结论监测乳腺癌患者术后体内Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA表达情况对术后放疗短期预后存在一定评估价值。因此Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA也许能够作为癌症术后放疗评估预后的重要生物指标。