消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

[目的]分析消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,探究其抑瘤机制。[方法]在Invitrogen公司的网上设计系统中设计靶向Survivin基因的siRNA序列,并将其转染A549细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测消岩汤以及转染组对A549细胞生长抑制的情况,免疫组化法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。[结果]MTT法显示消岩汤具有抑制A549细胞生长的作用,其作用具有一定的时间依赖性,转染中药组的抑制率显著高于转染对照组及非转染中药组。经免疫组化法检测,转染对照组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于非转染中药组,但显著低于转染中药组。流式细胞术检测结果显示消岩汤及重组质粒以诱导细胞晚期凋亡为主,转染中药组A549细胞凋亡率显著高于其他各组。[结论]消岩汤可诱导A549细胞的凋亡,联合应用转染靶向Survivin基因的重组质粒可增强其体外诱导A549细胞凋亡的作用。

Survivin siRNA对甲状腺乳头状癌细胞裸鼠移植瘤血管生成的影响

目的探讨凋亡抑制基因Survivin的小干扰RNA(Small interfering RNA,si RNA)对甲状腺乳头状癌细胞株K1裸鼠移植瘤血管生成的影响。方法将表达特异性Survivin si RNA序列的质粒载体,与表达无关序列si RNA的质粒载体分别转染K1细胞;G418筛选出稳定表达Survivin si RNA和表达无关序列si RNA的K1细胞,与未转染的K1细胞分别注射于裸鼠皮下,观察三组移植瘤的生长速度。SP免疫组化法检测各组移植瘤中的微血管密度(MVD)。结果 Survivin si RNA组比无关序列si RNA组肿瘤平均质量减少56%,比未转染组肿瘤平均质量减少63%;Survivin si RNA组MVD明显低于无关序列si RNA组及未转染组(P<0.05);无关序列si RNA组与未转染组MVD值差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Survivin si RNA可抑制甲状腺乳头状癌细胞K1裸鼠移植瘤的微血管生成及肿瘤生长。

厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法选用Survivin siRNA转染和厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,作用48 h后,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用,免疫组化法观察Survivin蛋白表达的变化。结果 Survivin siRNA转染和厄洛替尼两者单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549作用48 h后,两种因素单独或联合应用都对细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制率分别为(47.68±4.09)%、(60.28±3.23)%、(78.14±4.34)%,较对照组差别有统计学意义(P<0.01),并能明显降低细胞内Survivin蛋白的表达水平,联合应用较两者单独应用对细胞增殖的抑制作用更显著(P<0.01),对Survivin蛋白表达的抑制作用更强。结论应用siRNA沉默Survivin表达可以提高肺腺癌细胞对厄洛替尼的敏感性。

以量子点为载体转染Survivin siRNA至人舌鳞癌Tca8113细胞中的实时观察

目的通过量子点(quantum dot,QD)为载体将靶向Survivin基因的siRNA转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,并通过激光共聚焦显微镜实时观察转染过程,以期在肿瘤治疗的同时对其进行实时影像学观察。方法表面带正电荷的水溶性量子点,通过正负电荷的吸引力与表面带负电荷的Survivin siRNA以1∶2比例结合成QDsiRNA复合物。QD-siRNA复合物通过内吞作用进入人舌鳞癌Tca8113细胞,用激光共聚焦显微镜对QD-siRNA复合物转染至细胞中的过程和分布情况进行实时动态观察。结果激光共聚焦显微镜观察显示QD成功将Survivin siRNA转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,QD-siRNA复合物加入培养皿15 min后开始吸附至细胞膜上,并慢慢穿透胞膜到达胞浆,直至6 h可见QD-siRNA复合物充分进入细胞,QD主要分布在细胞质中,而siRNA在细胞质和细胞核中均有分布。来自QD的红色荧光强度大于来自siRNAFAM的绿色荧光。结论激光共聚焦显微镜观察QD成功将Survivin siRNA转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,QD相对于羧基荧光素更适于进行细胞动态观察。

Survivin siRNA对肝癌种植瘤survivin基因表达及生长的影响

目的观察Survivin siRNA对裸鼠肝癌种植瘤Survivin基因表达以及肿瘤生长的影响。方法利用肝癌细胞株构建动物模型,将脂质体包裹的Survivin siRNA经静脉注入裸鼠种植瘤体内,以无关siRNA为对照组,观察动物及瘤体的变化,RT-PCR法检测瘤组织survivin mRNA水平,Western blot法检测瘤组织survivin蛋白表达情况。结果Survivin siRNA注射组(SU-IV组)在注射后10 d肿瘤体积较对照组明显缩小,差异有显著性(P<0.05)。SU-IV组survivin mRNA及蛋白表达水平均低于对照组(P<0.001)。结论 Survivin siRNA能抑制裸鼠肝癌种植瘤的生长,注射后瘤组织Survivin mRNA及蛋白表达下调。

Survivin siRNA纳米脂质体体内抗结肠癌活性研究

目的观察Survivin siRNA纳米脂质体对裸鼠结肠癌种植瘤Survivin基因表达以及肿瘤生长的影响。方法利用结肠癌细胞LOVO细胞株构建动物模型,将脂质体包裹的Survivin siRNA经静脉注入裸鼠种植瘤体内,以无关siRNA为对照组,观察动物及瘤体的变化,RT-PCR法检测瘤组织Survivin mRNA水平,Western blot法检测瘤组织survivin蛋白表达情况。结果 Survivin siRNA注射组(SU-IV组)在注射10剂后肿瘤体积较对照组明显缩小,差异有显著性(P<0.05)。SU-IV组Survivin mRNA及蛋白表达水平低于对照组(P<0.001)。结论 Survivin siRNA纳米脂质体能抑制裸鼠结肠癌种植瘤的生长,注射Survivin siRNA纳米脂质体后肿瘤组织Survivin mRNA及蛋白表达下调。

厄洛替尼联合survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的:探讨厄洛替尼联合survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549的作用。方法:survivin siRNA转染、厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察对A549细胞的增殖抑制作用,免疫组化染色法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况。结果:survivin siRNA转染联合厄洛替尼对A549细胞具有明显的抑制作用,且可明显降低A549细胞Survivin蛋白的表达,与单独应用survivin siRNA转染和厄洛替尼比较均有统计学意义(P<0.01)。结论:应用siRNA沉默survivin表达可提高人肺腺癌细胞A549对厄洛替尼的敏感性。

脂质体转染survivin siRNA对A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨脂质体转染survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法:人工合成抑制survivin基因的siRNA片段,通过脂质体转染到A549细胞内,倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化;用四氮唑盐(MTT)法观察转染后24h,48h,72h对细胞增生的影响;流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数;RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果:转染siRNA后的A549细胞,细胞增殖受到显著抑制,细胞明显出现凋亡,survivin基因mRNA表达显著下降。结论:应用RNA干扰靶向抑制survivin基因可以显著抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。survivin可能成为肺癌基因治疗的一个新靶点。

Survivin siRNA提高人结肠癌HT-29细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究

目的以siRNA抑制结肠癌HT-29细胞内survivin的表达,探讨HT-29细胞对顺铂(cisplatin,cDDP)的增敏效果。方法转染siRNA于HT-29,检测survivin siRNA处理对survivin、Bax、Bcl-2蛋白表达及胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性的影响。cDDP处理后,以四甲基偶氮唑蓝比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)及酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法分析HT-29细胞增殖抑制及凋亡情况。结果 Survivin siRNA下调survivin、Bcl-2蛋白表达,上调caspase-3活性及Bax蛋白表达。Survivin siRNA还可增强cisplatin对HT-29的生长抑制效果及提高cisplatin所诱导的HT-29凋亡发生水平。结论 Survivin siRNA可提高HT-29对化疗药物cisplatin的敏感性。抑制survivin可能是一个重要的、可行的结肠癌治疗标的。

Survivin siRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响

目的:探讨Survivin siRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响。方法:肺癌A549细胞分为siRNA转染组、吉西他滨组、siRNA转染+吉西他滨组和正常对照组;噻唑蓝比色法(MTT法)检测各组细胞增殖率的变化,流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期和存活率。结果:Survivin siRNA+吉西他滨组细胞的增殖率和存活率均明显低于siRNA转染组和吉西他滨组(P<0.01);且siRNA+吉西他滨组与siRNA转染组、吉西他滨组比较,更高比率的A549细胞被阻滞于S期(P<0.01)。结论:siRNA沉默Survivin表达,增加了肺癌A549细胞对吉西他滨的化疗敏感性。

一链双靶siRNA对皮肤鳞状细胞癌NET-1和Survivin基因表达及增殖和凋亡的影响研究

目的:探讨一链双靶siRNA对人皮肤鳞癌细胞株(A431)NET-1和Survivin基因的抑制作用以及对细胞增殖、凋亡的影响。方法:构建siRNA NET-1、siRNA Survivin以及同时靶向NET-1和Survivin基因的一链双靶siRNA。采用免疫共沉淀法检测NET-1和Survivin蛋白在A431人皮肤鳞癌细胞中的相互作用。将A431细胞分为siRNA-NET-1组、siRNA-Survivin组、siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NC组和control组,分别进行细胞转染。qRT-PCR和Western Blot法分别检测细胞内NET-1、Survivin mRNA和蛋白表达,细胞免疫荧光法观察NET-1、Survivin蛋白在细胞内的表达及定位。CCK-8法和流式细胞仪分别检测细胞增殖与凋亡情况。结果:免疫共沉淀法证实NET-1和Survivin蛋白有相互作用。qRT-PCR和Western Blot结果显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组细胞中NET-1和Survivin mRNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组及control组,siRNA-NET-1&Survivin组低于siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CCK-8法检测显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组细胞增殖水平低于siRNA-NC组和control组,siRNA-NET-1&Survivin组低于siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组细胞凋亡率高于siRNA-NC组和control组,siRNA-NET-1&Survivin组高于siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光显示,siRNA-NET-1&Survivin组、siRNA-NET-1组和siRNA-Survivin组NET-1和Survivin蛋白表达阳性细胞百分率低于control组,siRNA-NET-1&Survivin组低于siRNA-NET-1和siRNA-Survivin组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:NET-1和Survivin蛋白存在相互作用,靶向NET-1和Survivin的一链双靶siRNA能同时下调A431细胞NET-1和Survivin基因表达,并能抑制A431细胞增殖,促进细胞凋亡,一链双靶siRNA作用效果优于单靶siRNA。

SiRNA-Survivin增强鼻咽癌细胞对放射敏感性的实验研究

目的研究Survivin表达抑制对鼻咽癌放射敏感性的影响,探讨Survivin基因为靶的分子干预在鼻咽癌放疗中作用。方法采用脂质体将Survivin特异性siRNA转染鼻咽癌5-8F细胞系,半定量RT-PCR、流式细胞仪检测Survivin基因表达;Survivin特异性siRNA转染5-8F细胞,培养24h后,用6GY的放射线处理细胞,继续培养24h后,收集细胞。流式细胞仪、镜下计数检测细胞增殖、凋亡与细胞周期。结果Survivin特异性的siRNA能有效地阻断5-8F细胞系中Survivin基因表达。特异性SiRNA加放射组,细胞抑制率(33.7±1.5%)显著高于特异性SiRNA组([23.8±4.3)%,(P<0.05)]和随机序列的siRNA加放射组([15.5±1.7)%,(P<0.01)]。特异性SiRNA加放射组,细胞凋亡率(24.67±0.50)显著高于特异性SiRNA组([20.30±0.44),(P<0.05)]和随机序列的siRNA加放射组([6.58±0.38),(P<0.01)]。特异性siRNA加放射组,S/G1比率(2.76±0.186)显著高于特异性siRNA组([1.91±0.067),(P<0.01)]与随机序列的siRNA加放射组([0.585±0.066),(P<0.01)]。结论有效干预Survivin基因表达能提高鼻咽癌细胞的放射敏感性,增强鼻咽癌的放疗效果。

siRNA抑制肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的研究

目的 研究siRNA对肝癌细胞株HepG2中Survivin基因表达的抑制作用。方法 设计、合成一对Survivin编码基因的反向重复序列 ,中间间隔 9个核苷酸序列 ,通过定向克隆至载体Psilencer2 1,构建siRNA真核表达载体 ,经稳定转染HepG2细胞后应用RT PCR及流式细胞术检测肝癌细胞中Survivin基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况。结果 测序证实siRNA真核表达载体构建成功。通过RT PCR及流式细胞术检测 ,siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制Sur vivin基因表达分别达 73%和 75 %。结论 构建的Psilencer (+) Survivin重组质粒能有效抑制Survivin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。

靶向Survivin基因siRNA诱导肝癌细胞凋亡的实验

目的探讨靶向survivin的siRNA转染肝癌细胞阻抑survivin表达,及其对肝癌细胞凋亡、增殖与细胞化疗敏感性的影响。方法设计合成特异性靶向survivin的siRNA序列。肝癌细胞株HepG2接种于6孔培养板内,分为5组:空白对照组、阴性对照组和低、中、高浓度转染组(分别给予50,100和200nmol.L-1siRNA转染)。作用36h后收集各组细胞。Westernblot法检测各组细胞survivin蛋白表达情况,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivinmRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数,四氮唑盐(MTT)法检测氟尿嘧啶(5-FU)和顺铂(DDP)对各组细胞的生长抑制率。结果各浓度siRNA转染组细胞survivin蛋白和mRNA表达有不同程度减弱。各浓度siRNA转染组细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。各浓度siRNA转染组细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。等浓度化疗药物5-FU和DDP对各浓度siRNA转染组细胞的抑制率明显高于对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。结论不同浓度survivinsiRNA转染能下调survivin蛋白和mRNA表达,诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性。

Survivin-siRNA对骨肉瘤MG-63细胞药物敏感性的研究

目的研究特异性Survivin-siRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后对骨肉瘤细胞药物敏感性的影响。方法应用两种特异性Survivin-siRNA(Survivin-siRNA1,Survivin-siRNA2)转染骨肉瘤MG-63细胞,RT-PCR检测MG-63细胞Survivin-mRNA表达,流式细胞术检测MG-63细胞的凋亡,MTT法检测顺铂、多柔比星对转染前后MG-63细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果特异性Survivin-siRNA转染骨肉瘤MG-63细胞24h后SurvivinmRNA表达水平明显抑制;流式细胞术显示转染Survivin-siRNA的MG-63细胞48h后凋亡率明显高于非特异性siRNA组和空白对照组(F=17.32,P<0.01);特异性Survivin-siRNA增强了MG-63细胞对多柔比星的敏感性5倍,增强了MG-63细胞对顺铂的敏感性9倍。结论化学合成的Survivin-siRNA能有效抑制Survivin基因在骨肉瘤MG-63细胞中的表达,并提高MG-63细胞对多柔比星、顺铂的敏感性。

夏枯草三萜类提取物联合Survivin-siRNA对食管癌Eca-109细胞抑制作用研究

目的观察Survivin-siRNA能否增强夏枯草三萜类提取物对食管癌Eca-109细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用,并探讨机制。方法将食管癌Eca-109细胞分为空白对照组、阴性对照组、夏枯草单独处理组、siRNA转染单独处理组,夏枯草+siRNA转染联合作用组。各组食管癌Eca-109细胞培养48 h后,采用RT-PCR、Western blot法检测Survivin mRNA与Survivin蛋白表达水平,采用CCK-8法检测食管癌细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果夏枯草单独处理组、siRNA转染单独处理组、夏枯草+siRNA转染联合作用组的食管癌Eca-109细胞Survivin mRNA及Survivin蛋白表达水平均低于空白对照组与阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);夏枯草单独处理组、siRNA转染单独处理组、夏枯草+siRNA转染联合作用组的食管癌Eca-109细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均高于空白对照组与阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);夏枯草+siRNA转染联合作用组的食管癌Eca-109细胞Survivin mRNA及Survivin蛋白表达水平均低于夏枯草单独处理组、siRNA转染单独处理组,差异有统计学意义(P<0.05);夏枯草+siRNA转染联合作用组的食管癌Eca-109细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均高于夏枯草单独处理组、siRNA转染单独处理组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Survivin-siRNA能增强中药夏枯草对食管癌Eca-109细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用。

siRNA腺病毒抑制Survivin基因表达诱导肝癌细胞凋亡

目的为改进质粒siRNA载体的不足,建立siRNA的病毒性载体系统,并探讨凋亡抑制因子Survivin基因在肝癌细胞中的作用。方法通过已建立的Survivin质粒siRNA,构建Survivin的腺病毒siRNA载体系统,筛选重组病毒并感染肝癌细胞HepG2细胞,应用Western blot和RT-PCR检测Survivin基因表达变化,用流式细胞仪观察肿瘤细胞凋亡。结果成功构建Survivin基因的腺病毒siRNA载体及重组腺病毒,感染肝癌细胞明显抑制Survivin蛋白表达,抑制率66.32%;降低Survivin基因的mRNA转录水平达72.04%;应用流式细胞仪观察肿瘤细胞凋亡明显增加。结论腺病毒siRNA载体系统可作为抑制目的基因,进而研究其功能和作用的技术平台,并为其他基因的相关研究打下基础;抑制Survivin基因表达可诱导肿瘤细胞HepG2的凋亡,为今后腺病毒siRNA载体应用于肿瘤动物实验和肿瘤基因治疗提供实验资料。

siRNA沉默survivin增强hNIS转染的鼻咽癌细胞株对^(131)碘的敏感性

目的:研究Survivin特异性小片段干扰RNA(siRNA)能否增强人钠碘同向转运体(hNIS)转染的鼻咽癌细胞株(CNE-2-hNIS)对131碘的放射敏感性.方法:设计并合成针对survivin基因的特异性siRNA,利用脂质体法转染CNE-2-hNIS细胞,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Westernblot方法检测细胞survivin基因沉默效果.CCK-8、克隆形成实验和Annexin VFITC/PI双染流式细胞仪检测131碘孵育后对细胞增殖和凋亡的影响.结果:SurvivinsiRNA转染CNE-2-hNIS细胞72h后,细胞的survivin基因mRNA和蛋白表达明显降低,Si-survivin组较SiRNA-NC组细胞增殖率降低,131碘孵育后,Si-survivin组较SiRNA-NC组细胞增殖率降低,凋亡率增高,差别有统计学意义(P<0.05).结论:Survivin特异性siRNA能显著沉默CNE-2-hNIS细胞的survivin基因的表达,增加CNE-2-hNIS对131碘的放射敏感性.

Survivin基因siRNA表达载体的构建及其在食管癌EC109细胞中的表达

目的为研究survivin基因的功能及食管癌的基因治疗,构建针对survivin基因的siRNA的表达载体,转染细胞EC109后观察其对survivin基因表达的抑制作用。方法利用网站选择适当位点设计并合成针对survivin基因mRNA的寡核苷酸序列,插入质粒pBAsi-hU6中形成重组载体pBAsi-survivin。重组载体经测序鉴定后转染食管癌细胞EC109,westernblot检测转染前后survivin蛋白的表达情况。结果测序结果与所合成的寡核苷酸完全一致,证实成功构建了针对survivin基因的siRNA表达载体。Westernblot检测显示转染食管癌细胞EC109后有效抑制了survivin基因的表达。结论针对surivivin基因的siRNA表达载体成功构建,并能有效抑制食管癌细胞EC109中survivin基因的表达。

靶向survivin基因的siRNA对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的向大肠癌细胞Lovo中导入靶向survivin基因的siRNA,研究其对Lovo细胞生物学效应影响。方法设计2条特异性靶向survivin基因的siRNA,体外转录法合成,通过脂质体导入Lovo细胞并检测转染后细胞内survivin基因表达水平及凋亡、增殖情况。结果细胞内survivin mRNA表达水平降低,细胞凋亡率升高,增殖能力减弱。结论所设计的靶向survivin基因的siRNA能有效降低目的基因的mRNA表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞生长。为大肠癌基因治疗的可行性提供了有力的证据。