Survivin基因沉默诱导宫颈癌细胞凋亡的实验设计

采用基因干扰的方法敲低Survivin蛋白表达,探究Survivin表达下调对人宫颈癌细胞凋亡的影响。实验将聚乙烯亚胺(PEI)作为siRNA传输的载体,在无血清条件下,聚乙烯亚胺有效压缩、保护和传输siRNA。PEI/siEGFP复合物高效转染Hela/EGFP细胞后,EGFP蛋白的表达量显著下降。而有血清条件下,PEI/siEGFP复合物不稳定,导致PEI/siEGFP的细胞摄取降低,影响了EGFP基因沉默的效果。Survivin基因干扰实验显示高效转染PEI/siSur复合物后,显著降低了Survivin基因表达。而Survivin表达的下调激活了凋亡信号通路中关键性激酶Caspase-3,从而诱导Hela细胞凋亡。该实验为宫颈癌的治疗提供了新的策略。

RNA干扰Survivin基因沉默对卵巢癌SKOV3及SKOV3/ADM细胞凋亡的影响

背景与目的:RNA干扰技术被广泛应用于肿瘤基因治疗、抗病毒感染、基因药物筛选等许多领域。Survivin基因在卵巢癌细胞株SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM中高表达,是进行卵巢癌基因治疗理想的靶点。本研究探讨Survivin基因沉默后对卵巢癌细胞SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM凋亡的影响。方法:将重组质粒pshRNA鄄Survivin以脂质体转染至SKOV3、SKOV3/ADM细胞。分别用半定量RT鄄PCR、Westernblot检测细胞内SurvivinmRNA和蛋白表达的变化,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色法、TUNEL及流式细胞仪检测重组质粒诱导细胞凋亡的情况。结果:转染pshRNA鄄Survivin后,SKOV3、SKOV3/ADM细胞中SurvivinmRNA拷贝数明显减少,抑制率分别为83.79%和91.56%,蛋白质的表达水平显著降低;干扰组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,Survivin沉默后48h,SKOV3、SKOV3/ADM的细胞凋亡率分别为14.05%和21.02%,而在对照组未检测到明显凋亡。结论:重组质粒pshRNA鄄Survivin可明显抑制SKOV3、SKOV3/ADM细胞内SurvivinmRNA和蛋白的表达,介导卵巢癌细胞凋亡。

siRNA介导的survivin基因沉默诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的研究

[目的]研究siRNA(small interferenceRNA)对人膀胱癌BIU-87细胞凋亡和survivin基因表达的影响。[方法]利用Ambion公司设计软件,设计并体外转录合成针对survivin基因的3个特异性siRNA,通过脂质体将siRNA转入BIU-87细胞,分别采用MTT和DNA原位末端标记(TUNEL)法检测siRNA对BIU-87细胞生长抑制率(IR)和凋亡指数(AI),半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和WesternBlotting检测siRNA对survivinmRNA及其蛋白表达的影响。[结果]转染后的siRNA1～3组的BIU-87细胞的IR(41.84%、56.21%、54.13%)和AI(21.98%、36.54%、31.34%)均分别显著高于正常对照组(1.98%和3.17%)(P<0.05),survivinmRNA及其蛋白表达水平均显著低于对照组;其中siRNA2～3对BIU-87细胞的IR、AI和survivin表达的抑制作用均显著高于siRNA1。[结论]体外转录合成的siRNA可抑制BIU-87细胞survivin的表达,诱导BIU-87细胞凋亡,从而抑制BIU-87细胞生长,为siRNA介导的膀胱肿瘤基因沉默提供实验依据。

Survivin基因沉默对结直肠癌细胞增殖、迁移能力的影响

目的观察结直肠癌细胞中Survivin的表达情况,及Survivin基因沉默对结直肠癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法培养正常结肠上皮细胞系NCM460及结直肠癌细胞株SW480,将SW480细胞分为实验组和对照组(留取部分细胞待测Survivin mRNA及蛋白),实验组转染Survivin siRNA,对照组转染control siRNA。检测NCM460细胞、SW480细胞、实验组及对照组细胞中的Survivin mRNA及蛋白;实验组及对照组转染48 h后,采用MTT实验检测两组细胞增殖能力,Transwell实验和划痕实验检测细胞迁移能力。结果 NCM460细胞中Survivin mRNA、蛋白相对表达量分别为0.16±0.10、0.20±0.15,SW480细胞中Survivin mRNA、蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.00±0.00,二者相比,P均<0.05。转染48 h后,实验组细胞中Survivin mRNA、蛋白相对表达量分别为0.20±0.13、0.31±0.12,对照组细胞中Survivin mRNA、蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.00±0.00,两组相比,P均<0.05。两组转染48 h后,继续培养12、24、48、72 h实验组细胞增殖能力低于对照组(P均<0.05)。实验组每视野穿膜细胞数为(140±15)个,对照组为(27±6)个,两组相比,P<0.05。结论 Survivin基因沉默可抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移能力。

Survivin基因沉默对裸鼠人卵巢癌细胞移植瘤凋亡的影响

目的探讨survivin基因沉默对人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠移植瘤凋亡的影响。方法将重组survivin shRNA plasmid转染人卵巢癌细胞株SKOV3细胞,通过裸鼠移植瘤实验比较survivin基因沉默对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测与凋亡密切相关的cytochrome-c、caspase-9和caspase-3基因的表达。结果裸鼠移植瘤实验显示,与对照组(空载体组和未转染组)相比,survivin shRNA plasmid转染组人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长速度减慢,肿瘤体积缩小(P<0.05);荧光定量PCR和蛋白印迹法结果都显示,与对照组相比,survivin shRNA plasmid转染组cytochrome-c、caspase-9和caspase-3的表达明显升高(P<0.05)。结论 survivin基因沉默可通过促进肿瘤细胞的凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长。

辣椒CaDXS和CaPDS基因沉默的表型比较

【目的】沉默辣椒CaDXS和CaPDS基因,比较分析两者白化表型的差异,寻找新的辣椒沉默标记基因。【方法】利用双酶切克隆技术构建CaDXS和CaPDS基因的沉默载体;通过农杆菌介导转化侵染辣椒,观察辣椒的沉默表型;采用实时荧光定量PCR技术检测CaDXS和CaPDS基因的沉默效率。【结果】农杆菌浸润21 d后,沉默CaDXS基因的辣椒叶片出现褪绿症状,沉默CaPDS基因的辣椒叶片出现白化。农杆菌浸润30 d后,沉默CaDXS基因的辣椒叶片出现较为明显的白化;沉默CaPDS基因的辣椒叶片白化程度加剧,新叶近乎白化。与CaDXS基因相比,沉默CaPDS基因导致的辣椒白化表型更明显和高效。沉默组辣椒叶片中CaDXS和CaPDS基因的表达量均显著降低(P<0.05),沉默效率分别为86.80%和93.08%,表明辣椒CaDXS和CaPDS基因被成功沉默。【结论】CaDXS基因可以作为辣椒的沉默标记基因,但沉默CaPDS基因的辣椒白化表型出现更早且明显,因此,CaPDS基因比CaDXS基因更适合作为辣椒沉默标记基因。

三物白散对Survivin-RNA基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞的影响

目的观察中药三物白散对含存活素(Survivin)基因沉默的慢病毒颗粒(Survivin-RNAi-LV)转染人胃癌SGC-7901细胞的影响。方法分别采用RT-PCR(聚合酶链式反应)、Western blot方法检测人胃癌SGC-7901细胞中Survivin m RNA和蛋白的表达;采用甲基噻唑基四唑(MTT)方法检测胃癌SGC-7901细胞的增殖情况、流式细胞仪检测凋亡率及三物白散对其增殖抑制率及凋亡率的影响。结果重组慢病毒颗粒介导的Survivin基因沉默转染人胃癌SGC-7901细胞可有效使Survivin m RNA和蛋白的表达沉默;三物白散对人胃癌SGC-7901细胞的生长具有抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡;Survivin基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞组应用三物白散,其细胞增殖弱于、细胞凋亡率高于三物白散+空白对照组和三物白散+阴性对照组(P<0.05)。结论含Survivin基因沉默的重组慢病毒颗粒转染人胃癌SGC-7901细胞,能够抑制SGC-7901细胞Survivin的表达,三物白散对Survivin基因沉默转染后胃癌细胞的杀伤力较未转染细胞有明显的提高。

Survivin基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖、克隆形成的影响

探讨Survivin基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖、克隆形成的影响 方法:采用Survivin基因沉默的重组慢病毒颗粒感染人胃癌SGC-7901细胞;以空载体慢病毒颗粒转染人胃癌SGC-7901细胞作为阴性对照组;空白对照组常规培养胃癌SGC-7901细胞,不作任何处理。采用MTT法检测胃癌SGC-7901细胞的增殖情况;Giemsa染色法检测胃癌SGC-7901细胞的克隆形成。结果:与阴性组和空白对照组比较,Survivin-RNAi-LV组胃癌SGC-7901细胞的增殖明显受到抑制,克隆形成显著降低(P<0.05)。结论:慢病毒介导Survivin基因沉默抑制胃癌SGC-7901细胞增殖和克隆形成。

利用siRNA靶向沉默Jeko-1细胞survivin mRNA基因的实验研究

本研究旨在探讨Survivin基因在淋巴瘤细胞中的生物学作用,为将来以Survivin为靶点治疗套细胞淋巴瘤提供实验室证据。体外化学合成针对survivin mRNA基因的siRNA片段,通过DMRIE-C转染Jeko-1细胞,以无关siRNA、未转染的细胞为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测siRNA的抑制效果,利用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用CCK-8法检测转染24、48、72 h对细胞增殖的影响。结果表明,与未转染的空白组相比,siRNA转染Jeko-1细胞后24、48、72 h survivin mRNA的相对表达量分别为0.49±0.03、0.38±0.02和0.17±0.02;细胞增殖抑制率分别为(31.2±2.1)%、(43.3±3.4)%和(52.6±2.5)%;细胞凋亡率分别为(6.3±0.5)%、(13.5±1.1)%和(23.6±1.6)%;survivin蛋白表达水平逐步减低。结论:靶向survivin的siRNA能在体外特异性下调目的基因survivin mRNA和蛋白的表达,表现出抑制Jeko-1细胞增殖和促使其凋亡的生物学效应,survivin基因有望成为淋巴瘤治疗的一个药物靶点。

CRISPR/dCas9-KRAB系统沉默猪LncRNA-NEAT1基因

本研究利用RT-PCR检测LncRNA-NEAT1基因表达在细胞中的亚定位,采用5′RACE获得LncRNA-NEAT1基因的转录起始位点;利用CRISPOR软件对-300~0 bp区域的LncRNA-NEAT1启动子序列设计sgRNA并构建到px330载体,通过转染细胞与T7E1酶切验证sgRNA效率;利用酶切和亚克隆方法将dCas9-KRAB-BSD片段替换px330载体的Cas9序列,形成重组px330-dCas9-KRAB载体;将验证有效的sgRNA构建到px330-dCas9-KRAB载体,形成px330-sgRNA-dCas9-KRAB载体。添加不同质量浓度的Blasticidin S处理细胞,以最小致死质量浓度来确定筛选质量浓度。转染px330-sgRNA-dCas9-KRAB载体并用Blasticidin S筛选细胞7 d后进行LncRNA-NEAT1基因的表达检测,同时对sgRNA在LncRNA-NEAT1基因启动子上的结合位点进行Sanger测序,以进一步验证上述结合位点是否发生切割。结果显示LncRNA-NEAT1主要表达于细胞核,而在细胞质中几乎不表达。5′RACE获得了LncRNA-NEAT15′端大约270 bp的序列。qPCR检测结果显示,与对照组相比,sgRNA1和sgRNA2能够显著抑制LncRNA-NEAT1的表达(P<0.05)。Sanger测序结果表明sgRNA1和sgRNA2所在的位点并没有发生碱基缺失和插入。研究结果为后续进一步研究LncRNA-NEAT1在先天性免疫反应中的功能奠定了基础。

沉默survivin基因以增加骨髓瘤细胞对阿霉素敏感性的研究

背景与目的:Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一,在多种恶性肿瘤中高表达,但在正常成人分化组织中无表达。其表达与多种肿瘤的预后及肿瘤对放、化疗的耐受有关。本研究采用RNA干扰技术下调survivin基因在人骨髓瘤细胞系KM3中的表达,观察其诱导KM3细胞凋亡的作用,及是否增加KM3细胞对阿霉素的敏感性。方法:针对survivinmRNA体外化学合成小干扰RNA(siRNA),采用脂质体介导转染KM3细胞,以RT-PCR和Westernblot方法检测转染后24h、48h和72hKM3细胞survivinmRNA和蛋白的表达,荧光显微镜观察干扰前后细胞的凋亡情况,细胞毒分析方法比较转染前后对阿霉素敏感性的变化。结果:转染survivinsiRNA后24h、48h和72h,与阴性对照组相比,KM3细胞survivinmRNA水平分别下调了(47.0±4.3)%、(81.4±6.2)%和(49.1±7.9)%,蛋白质表达下调了(39.6±3.8)%、(56.4±6.7)%和(68.2±5.1)%。荧光显微镜下可见转染survivinsiRNA48h后的KM3细胞,凋亡率为(28±7)%,明显高于转染阴性对照siRNA的细胞。转染后细胞对阿霉素的敏感性增加,IC50由(1.12±0.14)μmol/L下降至(0.31±0.03)μmol/L。结论:以siRNA下调survivin的表达可有效诱导KM3细胞凋亡,并增加其对阿霉素的敏感性。

应用RNAi技术沉默survivin基因对肺腺癌A549细胞的影响

目的探讨RNA干扰（RNAi）沉默survivin基因对肺腺癌A549细胞的影响。方法应用RNAi技术，以化学合成的survivin小干扰RNA（siRNA）体外转染A549细胞，采用MTT法及流式细胞仪检测转染前后A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的变化，通过RT-PCR及Western blot分析survivin mRNA和蛋白的表达情况。结果survivin siRNA对A549的生长抑制作用呈浓度依赖性（P〈20．05），并能引起G1期细胞比率的增加和S期细胞相应的减少，诱导一定数量的细胞凋亡，转染后36、60、84、108、132h的IC50值分别为152．4、151．2、136．0、144．0、150．4nmol／L。100～200nmol／L siRNA转染组细胞的survivin表达在蛋白及RNA水平都显著低于对照组（P〈0．01），但空白对照组与空质粒组间无明显差异（P〉0．05）。结论应用siRNA沉默survivin基因可以下调肺腺癌A549细胞survivin的表达，进而抑制细胞生长、增殖并诱导细胞凋亡。RNAi的抑制效果具有特异、高效和持久的特点。

靶向Survivin基因沉默对胰腺癌细胞Patu8988增殖和凋亡的影响

Survivin基因是近年来发现的一种细胞凋亡抑制基因,几乎所有常见人类肿瘤中皆高表达,而在正常分化成熟组织中多无表达.因此,针对Survivin的靶向治疗具有良好的特异性.

10～23脱氧核酶沉默Survivin基因表达诱导人肝癌细胞的凋亡

目的研究脱氧核酶沉默Survivin表达对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的影响。方法合成针对Survivin基因的"10～23"型脱氧核酶及其类似物;转染肝癌细胞;RT-PCR检测脱氧核酶细胞内Survivin mRNA的切割作用;荧光免疫法测定脱氧核酶对Survivin蛋白表达影响;流式细胞术检测脱氧核酶对肝癌细胞凋亡的影响。结果"10～23"型脱氧核酶及其类似物成功转染入肝癌;非修饰脱氧核酶(DzT)和修饰的脱氧核酶(DzTi)能有效抑制肝癌细胞的生长(P<0.05);DzT和DzTi在胞内能有效地切割Survivin mRNA,DzTi比DzT的切割活性更显著;荧光免疫法测的DzT和DzTi能显著的下调Survivin蛋白水平(P<0.01);流式细胞术结果提示,DzT和DzTi细胞凋亡率明显升高出现凋亡峰(P<0.05);DzT和DzTi组细胞出现细胞周期阻滞,表现为G0/G1细胞所占比例上升,S期细胞所占比例下降。结论脱氧核酶能有效沉默Survivin mRNA表达,抑制Survivin蛋白表达和促进肝癌细胞凋亡。

小干扰RNA沉默survivin基因对结肠癌Caco-2细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察survivin在人结肠癌细胞Caco-2中的表达及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默survivin基因对survivin蛋白表达、细胞增殖及凋亡的影响。方法:以脂质体LipofectAMINE 2000为载体,将针对特异靶点survivin基因的siRNA转染入人结肠癌细胞Caco-2。应用免疫细胞化学SP法和Western印迹法检测survivin蛋白表达的变化,MTT法检测细胞增殖,FCM法检测细胞凋亡。结果:免疫细胞化学检测结果显示,survivin蛋白在Caco-2细胞空白对照组、脂质体对照组及阴性错配对照组的细胞质中均呈强阳性表达,而在survivin-siRNA转染组细胞质中呈弱阳性表达;Western印迹法检测结果显示,survivin-siRNA转染组细胞的蛋白条带亮度明显低于空白对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组;MTT检测结果显示,与阴性错配对照组相比,survivin-siRNA转染组细胞生长出现明显的抑制(P<0.05),且不同时段(24、48和72 h)的肿瘤细胞增殖抑制率之间差异有统计学意义(P<0.05);FCM检测结果显示,survivin-siRNA转染组细胞出现明显的亚二倍体峰,细胞凋亡率(9.72%)明显高于空白对照组(P<0.01)。结论:siRNA沉默survivin基因可抑制结肠癌细胞增殖,促进细胞凋亡。推测survivin基因可能成为结肠癌基因治疗的一个新靶点。

沉默survivin对增加晚期宫颈癌基因放疗效果的实验研究

目的探讨survivin表达抑制与晚期宫颈癌放疗敏感性的关系。方法设计并构建靶向survivin的shRNA真核表达载体(psh-svv),转染宫颈癌Hela细胞,用实时PCR法检测RNA干扰(RNA interference,RNAi)后survivin mRNA的表达,用Western blot检测survivin蛋白表达,观察survivin基因沉默后放射线对Hela细胞生长活性的作用,转染psh-svv对Hela细胞凋亡的影响,裸鼠移植瘤生长速度及对放射线敏感性的变化。结果测序结果证实载体构建成功。转染psh-svv的实验组survivin mRNA表达明显低于3个对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组survivin蛋白表达亦明显低于3个对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。放疗后72h实验组细胞生长抑制率明显高于3个对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组caspase-3活性显著高于其他3组(P<0.05)。survivin基因沉默后,裸鼠移植瘤生长速度减慢,survivin低表达的实验组小鼠对放射线敏感。结论 psh-svv通过RNAi有效降低宫颈癌Hela细胞survivin的表达,抑制Hela细胞增殖,诱导凋亡,增加Hela细胞对放射线的敏感性。

HIF-1α基因沉默对人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长及survivin表达的影响

目的观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默对肺癌的抑瘤效应和survivin表达的影响。方法将实验用肺腺癌A549细胞分为空白对照组、无意义序列转染组和实验组,接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-MiRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用和对survivin表达的影响。采用免疫组化SP法,检测HIF-1α和survivin蛋白在裸鼠移植瘤中的表达。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HIF-1α和survivin mRNA的表达。采用原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组、无意义序列转染组明显减慢(P<0.05)。接种60 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为(0.59±0.28)g,明显轻于空白对照组[(1.90±0.18)g]和无意义序列转染组[(1.66±0.24)g,P<0.01]。实验组肿瘤组织中HIF-1αmRNA和蛋白的相对表达量分别为(0.45±0.04)%和(24.56±5.83)%,survivin mRNA和蛋白的相对表达量分别为(0.32±0.02)%和(29.08±3.99)%,均明显低于空白对照组、无意义序列转染组(P均<0.05)。但实验组肿瘤组织中凋亡细胞的数量显著高于对照组。结论以HIF-1α为靶点的基因治疗,可能通过下调靶基因survivin的表达促进肺癌细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长的作用。

靶向沉默786-O细胞Survivin基因表达降低肾癌侵袭能力的研究

目的探讨Survivin基因影响肾癌侵袭能力的机制。方法利用RNA干扰转染技术靶向沉默肾癌786-O细胞Survivin基因表达,通过RT-PCR及Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达水平变化,并检测MMP-2蛋白表达情况。结果成功制备转染Survivin siRNA质粒的低Survivin表达的786-O/low-Survivin细胞系,细胞表达绿色荧光,转染效率超过90%。RT-PCR电泳条带灰度值显示,Survivin siRNA/786-O组的Survivin mRNA表达水平(0.233±0.044)明显低于Control siRNA/786-O组(0.628±0.093)以及Non-siRNA/786-O组(0.657±0.079)(P<0.01)。Control siRNA/786-O组和Non-siRNA/786-O组的Survivin mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。Survivin siRNA转染786-O细胞后,抑制了Survivin基因的转录活性。Western Blot实验显示:Survivin siRNA/786-O组的Survivin蛋白表达水平(2.424±0.303)明显低于Control siRNA/786-O组(15.483±0.343)以及Non-siRNA/786-O组(15.513±0.407)(P<0.01)。Survivin siRNA/786-O组MMP-2蛋白表达水平(0.484±0.111)明显低于Control siRNA/786-O组(10.861±1.347)以及Non-siRNA/786-O组(10.947±1.744)(P<0.01)。Control siRNA/786-O组和Non-siRNA/786-O组的Survivin蛋白及MMP-2蛋白表达水平均差异无统计学意义(P>0.05)。Survivin siRNA转染786-O细胞后,显著下调了Survivin蛋白水平,并下调了MMP-2蛋白表达水平。结论靶向沉默Survivin基因能显著下调肾癌786-O的SurvivinmRNA和蛋白分子表达,并干扰了MMP-2蛋白的表达,揭示出Survivin基因参与调控肾癌侵袭转移的潜在调控机制。

沉默Survivin人耐药肺癌细胞凋亡相关基因表达变化及临床意义

目的探讨沉默Survivin基因后人耐药肺腺癌(A549DDP)细胞系凋亡相关基因表达变化及临床意义。方法应用RT-PCR法及Western印迹法比较Survivin在人肺腺癌A549细胞系及其耐药A549DDP细胞系的表达水平;通过小分子RNA干扰沉默Survivin基因,并采用微阵列PCR基因芯片(PCR-Array)技术比较沉默Survivin后A549DDP细胞凋亡相关基因表达水平变化。结果 (1)Survivin mRNA、Survivin蛋白在人耐药非小细胞肺癌细胞系呈现高表达。(2)沉默Survivin后A549DDP细胞部分抗/促凋亡基因表达发生改变,促凋亡基因TP53、CASP3、CASP7呈高表达,抗凋亡基因bcl-2、TRAF1、BFAR呈低表达。结论 (1)Survivin与部分抗/促凋亡基因共同参与了非小细胞肺癌耐药的发生。(2)封闭Survivin可改变耐药肺癌细胞的促/抗凋亡基因的表达,Survivin可能作为上游调控点参与调控部分促/抗凋亡基因组的表达。(3)Survivin可能成为逆转肺癌耐药的一个新靶点。

应用RNAi技术沉默survivin基因对肾癌786-O细胞的影响

目的运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异性阻断肾癌786-O细胞系中survivin基因的表达,并研究survivin沉默后对786-O细胞的影响。方法用真核转录载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR构建针对survivin基因的干扰载体,用脂质体法转染肾癌786-O细胞,通过RT-PCR、免疫组化分别检测survivin基因的mRNA和蛋白水平的表达,MTT法检测细胞生长的影响。结果干扰载体有效地阻断了786-O细胞中survivin基因在mRNA与蛋白水平上的表达,细胞活性受到抑制。结论RNAi技术沉默survivin基因可以下调肾癌786-O细胞survivin基因的表达,抑制细胞的活性。