建立一种survivin抗原肽诱导T淋巴细胞优势取用TCR Vβ基因的方法

目的:探讨survivin抗原肽体外诱导健康人外周血单个核细胞(PBMC)后T淋巴细胞活化情况及TCRVβ表达谱变化。方法:分离健康人PBMC经rhIL-4、rhGM-CSF诱导DCs,将成熟DCs分为阴性组(不负载肽)、未洗脱负载组(负载survivin肽)、洗脱负载组(经酸液洗脱并多聚甲醛固定后负载survivin肽),分别与自体淋巴细胞共培养诱导抗原特异性T淋巴细胞。分别于24小时、48小时、96小时和7天以Elisa法检测诱导后T淋巴细胞中IFN-γ的分泌,并于第7天通过流式细胞仪分析TCRVβ表达谱。结果:随着时间延长两实验组IFN-γ的分泌比阴性组显著增高,且洗脱负载组增加更为显著。流式细胞仪分析结果显示洗脱负载组相比于阴性组及未洗脱负载组引起TCR Vβ表达谱的改变更为明显,其中TCR亚家族Vβ7.2、Vβ12、Vβ14、Vβ16、Vβ20、Vβ22最为显著。结论:DCs经酸液洗脱表面多肽并固定的方法更能有效地诱导TCRVβ亚家族优势取用。

Survivin蛋白在子宫内膜癌中的表达及其与Ki-67抗原表达的关系

目的 探讨抗凋亡蛋白Survivin在正常子宫内膜、不典型增生性子宫内膜及子宫内膜癌中的表达及其与Ki 67抗原表达的关系, 探讨Survivin蛋白在子宫内膜癌发生、发展中的作用及其作为判断预后因子的可行性。方法 应用免疫组织化学SP法, 检测10例正常子宫内膜、10例不典型增生性子宫内膜及 33 例子宫内膜腺癌中 Survivin蛋白及Ki 67抗原的表达, 并结合临床病理特点进行分析。结果 Survivin蛋白在不典型增生的子宫内膜和子宫内膜癌阳性表达率很高, 分别为87 9%和70 .0%, 二者差异无显著性意义 (P>0 .05), 但均高于在正常子宫内膜中的表达率10 .0% (P<0. 05); 在子宫内膜癌中, Survivin的表达与手术 病理分期和组织学分级密切相关 (P<0 .05), 但与肌层浸润无明显关系。另外, Survivin的表达还与 Ki- 67 的表达呈正相关 (P<0 .05)。结论 Survivin可能通过抑制凋亡和促进增殖两方面的作用参与了子宫内膜癌的发生、发展, 其过度表达提示预后不良, 可能成为子宫内膜癌的预后判断因子。

Survivin、细胞周期素依赖激酶4、细胞增殖相关抗原在急性白血病患儿中表达的意义

目的探讨Survivin、细胞周期素依赖激酶4(Cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、细胞增殖相关抗原(Ki-67)在儿童急性白血病(AL)中的表达及其相关性,同时观察其与AL临床分型和预后的关系。方法应用免疫组织化学链霉素亲和素-生物素-过氧化酶复合物(SABC)方法检测37例AL患儿骨髓细胞Survivin、CDK4、Ki-67表达,对照组10例为非恶性血液病且骨髓正常的儿童。结果37例AL患儿中,Survivin表达阳性率为45.9%,CDK4表达阳性率为56.8%,Ki-67表达阳性率为40.5%,均显著高于正常骨髓组织(P均<0.05);Survivin与CDK4表达呈强相关(P=0.007),Survivin与Ki-67表达呈强相关(P=0.008)。结论Survivin、CDK4、Ki-67在AL患儿中均过度表达,共同参与AL患儿白血病细胞凋亡和增殖的调控过程。联合检测Survivin、CDK4、Ki-67有助于AL的诊断、预后及疗效判断。

Ki-67抗原和Survivin基因在上皮性卵巢癌中表达增强且相关

目的探讨卵巢上皮性肿瘤中Ki-67抗原和Survivin的表达及其相关性。方法用免疫组织化学技术二步法检测47例上皮性卵巢癌和24例良性上皮性卵巢肿瘤中Ki-67抗原和Survivin的表达。结果Ki-67阳性染色位于细胞核,良性肿瘤中Ki-67指数为0.17±0.20,显著低于恶性的19.59±16.48(P<0.01)。Survivin在良性卵巢肿瘤中的表达率为33.33%,显著低于恶性的70.21%(P<0.01)。Ki-67和Survivin在上皮性卵巢癌中的表达均与组织学类型无关,而与临床分期及病理学分级密切相关(P<0.01)。Ki-67和Survivin的表达有相关性。结论Ki-67和Sur-vivin基因在卵巢癌中表达增强且相关。

Survivin、Ki-67核抗原在涎腺基底细胞腺瘤、癌中的意义

目的探讨涎腺基底细胞腺瘤、癌中survivin表达与Ki-67核抗原表达的相关性,了解其在肿瘤恶性增殖及良恶性肿瘤鉴别诊断中的意义。方法应用免疫组织化学方法检测15例正常涎腺组织、28例涎腺基底细胞腺瘤、23例基底细胞腺癌组织中survivin及Ki-67核抗原的表达;RT-PCR分析2例涎腺基底细胞腺瘤及2例涎腺基底细胞腺癌survivin、Ki-67的mRNA表达水平。结果 Survivin及Ki-67核抗原在正常涎腺组织、基底细胞腺瘤、基底细胞腺癌中的表达依次递增,差异有统计学意义(P<0.01);Ki-67核抗原的表达随survivin表达增加而上升(P<0.05)。涎腺基底细胞腺癌survivin mRNA表达水平高于基底细胞腺瘤。结论 Survivin、Ki-67核抗原的过度表达可能参与涎腺基底细胞腺瘤的恶性增殖过程,并且可作为基底细胞腺瘤、癌的鉴别诊断分子指标之一。

人survivin蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定

目的构建人肿瘤抗原survivin的原核表达载体,优化在大肠杆菌中的表达条件,并对survivin/His融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定。方法设计针对survivin基因序列的特异引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增人survivin全长基因序列(538 bp)克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a-survivin,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达survivin/His融合蛋白,并采用Ni亲和层析凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、ELISA鉴定其抗原活性。结果重组表达载体经BamHⅠ和HindⅢ鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(M r)24 000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90%。Western blot法和ELISA检测证实纯化的survivin蛋白能够与特异性抗体发生反应,表明其具有良好的抗原活性。结论成功构建了原核表达载体pET28a-survivin,利用大肠杆菌表达系统实现了融合蛋白的可溶性表达并进行纯化,纯化后survivin蛋白经鉴定具备较高的抗原活性。

非小细胞肺癌survivin和增殖细胞核抗原表达的意义

目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中survivin蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达及探讨其临床病理学意义。方法:采用免疫组织化学SP法,分别检测43例NSCLC组织、15例正常支气管上皮组织中survivin和PCNA蛋白的表达。43例均随访或追观5年以上。结果:NSCLC的survivin阳性表达率(79.1%,34/43)明显高于正常支气管上皮组织阳性表达率(13.3%,2/15)(P<0.01);Ⅲ期survivin表达明显高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05);Survivin++^+++组的生存期明显较survivin-^+组短;Survivin的表达与其它临床病理参数均无明显关系(P>0.05)。NSCLC的PCNA增殖指数显著高于正常支气管黏膜上皮组织(P<0.01);增殖指数与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期呈正相关(P<0.01),与生存期呈负相关(P<0.01)。增殖指数与其它临床病理参数均无明显关系(P>0.05)。Survivin蛋白++^+++组中,增殖指数明显高于survivin-^+组(P<0.05)。结论:Sur-vivin和PCNA蛋白过度表达与NSCLC的发展、预后有密切关系,可作为临床评估NSCLC的进展及判断其预后的重要指标之一。Survivin在NSCLC中表达上调,与细胞增殖关系密切,提示survivin对肺癌的发生发展起重要作用。

子宫内膜癌患者经阴道超声检测阻力指数与组织中Survivin和癌胚抗原相关细胞黏附分子的关系

目的观察子宫内膜癌患者经阴道超声检测阻力指数(RI)值与组织中生存素蛋白和癌胚抗原相关细胞黏附分子(CEACAM)6表达的相关性。方法子宫内膜癌患者79例作为观察组,子宫内膜复杂性增生患者40例作为对照组1,子宫内膜单纯性增生患者40例作为对照组2,均应用经阴道超声检查,并记录RI值,同时对观察组和对照组1术后标本、对照组2诊刮标本应用免疫组化检测Survivin和CEACAM6表达。结果观察组、对照组1和对照组2 RI值呈增高趋势。观察组、对照组1和对照组2中Survivin和CEACAM6表达呈下降趋势。观察组RI值与Survivin、CEACAM6表达均呈负相关,观察组RI值、Survivin和CEACAM6表达均与肿瘤最大径、肌层浸润密切相关。结论子宫内膜癌患者经阴道超声检测RI值与Survivin和CEACAM6表达具有一定相关性,RI值、Survivin和CEACAM6的表达均与肿瘤的发生和进展有关。

前列腺癌组织中p27和Survivin的表达与前列腺特异性抗原的相关性

目的:通过分析蛋白p27和Survivin在前列腺癌(PCa)组织中的阳性表达与前列腺特异性抗原(PSA)的相关性,探讨前列腺癌的治疗方法。方法:应用免疫组织化学方法检测75例前列腺癌和60例前列腺增生组织中p27、Survivin蛋白的表达和相应患者血浆中的PSA值。结果:前列腺癌组织中p27、Survivin蛋白的阳性表达率分别为37.3%(28/75)、68.0%(51/75),p27和Survivin蛋白在前列腺增生组织中的阳性表达率分别为63.3%(38/60)、0(0/60),在前列腺增生和前列腺癌组织中Survivin和p27蛋白的阳性表达率差异均具有统计学意义(P<0.05)。p27和Survivin蛋白表达与前列腺癌病理分级、临床分期、转移情况和PSA值具有统计学意义(P<0.05)。结论:临床中联合检测p27及Survivin表达与前列腺特异性抗原的关系和相互作用机制,为前列腺癌的防治和治疗提供新的思路。

Survivin、Ki-67核抗原在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达意义

目的探讨生存素(Survivin)、Ki-67核抗原在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达及生物学意义。方法采用免疫组化S-P法,检测26例宫颈癌,78例宫颈上皮内瘤变(CINⅠ28例,CINⅡ23例,CINⅢ27例)及12例正常宫颈组织中Survivin、Ki-67的表达水平。结果 Survivin、Ki-67核抗原在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中的表达依次递增,Ki-67核抗原的表达随Survivin表达增加而上升,统计学上差异有显著意义(P<0.05)。结论 Survivin、Ki-67核抗原在宫颈癌中的异常表达,可能与宫颈癌发生、发展过程中凋亡抑制和增殖能力增强有关。

Survivin基因与早期分化抗原在急性白血病中的表达及其相关性的临床研究

目的探讨Survivin基因与CD34、CD90及CD133在急性白血病(AL)中表达、相关性及其与临床预后的关系。方法对68例初发AL患者,20例AL完全缓解患者,10例健康者应用半定量RT-PCR方法检测Survivin基因的表达,及应用流式细胞术(FCM)测定患者白血病细胞膜上CD34、CD90及CD133抗原的表达。结果①AL初发组与CR组患者的Survivin基因表达阳性率均显著高于对照组(P<0.05);②初发组的CD34及CD133表达高于CR组和对照组(P<0.01);③Survivin基因、CD34及CD133表达阳性者临床缓解率明显低于表达阴性者(P<0.05);④CD34/CD133双阳性组完全缓解率显著低于双阴性组(P<0.05);⑤Survivin基因与CD34、CD133的表达均明显相关(P<0.05)。结论①Survivin基因在急性白血病患者呈高表达;②Survivin基因与治疗效果密切相关,可作为急性白血病治疗的一个潜在靶点;③急性白血病细胞CD34及CD133的表达显著高于正常骨髓单个核细胞;④CD34与CD133高表达的白血病患者临床缓解率较低,并且CD34/CD133共同高表达可能是AL的一个不良预后因素;⑤Survivin基因与CD34和CD133的表达明显相关。

Survivin、增殖细胞核抗原和Bcl-2在乳腺癌组织中的表达

目的探讨乳腺癌组织中survivin、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2的表达及其与临床病理因素的关系。方法采用免疫组化法检测64例乳腺癌标本中survivin、PCNA、Bcl-2的表达,并分析其与临床病理因素的关系。结果survivin和Bcl-2表达阳性率分别为71.87%和62.5%,且淋巴结转移组survivin表达阳性率高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。PCNA指数(PI)平均为(61.5±10.1)%,并与淋巴结有无转移、肿块大小、临床TNM分期、组织学分级、survivin表达相关(P<0.05)。结论乳腺癌患者survivin与Bcl-2的表达不相关,有各自不同的机制;PCNA促进肿瘤细胞增殖和进展。

Survivin基因和增殖细胞核抗原在大肠癌组织中表达及其意义

目的:探讨Survivin和增殖细胞核抗原PCNA在大肠癌组织中的表达和意义。方法:采用免疫组织化学方法检测正常大肠粘膜、腺瘤和腺癌组织中Survivin和PCNA表达。结果;Survivin在正常大肠粘膜无表达,在大肠腺癌和腺瘤组织中表达的阳性率分别为70.9%和62.5%;大肠癌组和大肠腺瘤组OD值显著高于正常大肠粘膜组;大肠癌组中PCNA-LI为(50.2±13.2)%,显著高于正常大肠粘膜组(12.6±3.1)%和大肠腺瘤组(33.2±7.9)%;大肠癌组中Survivin阳性的PCNA-LI为(61.3±9.3)%,显著高于Survivin阴性的PCNA-LI(36.4±6.6)%。结论:Survivin和PCNA的高表达在大肠癌的发生、发展中起重要作用,PCNA可反映大肠癌的增殖状况,两者可作为判断其预后的参考指标。

结直肠腺癌患者术后组织真核翻译起始因子3h、Survivin和增殖细胞核抗原表达及意义

目的应用免疫组化方法检测结直肠腺癌患者术后组织中真核翻译起始因子(EIF)3h、生存素(Survivin)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,探讨三者在不同临床病理特征中的表达意义。方法 94例结直肠腺癌术后组织作为观察组,56例结肠腺瘤上皮内瘤变组织作为对照组,距肿瘤边缘>5 cm的正常黏膜组织56例作为正常对照组。应用免疫组化方法检测3组中EIF3h、Survivin和PCNA的表达。结果 3组中EIF3h、Survivin和PCNA表达的阳性率差异显著。观察组中EIF3h、Survivin和PCNA表达的阳性率均与肿瘤的肌层浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移密切相关,EIF3h、Survivin表达的阳性率均与分化程度密切相关。观察组中EIF3h和PCNA、Survivin和PCNA的表达均呈正相关性。结论 EIF3h、Survivin和PCNA高表达在结直肠腺癌病变发生和进展中有重要作用,EIF3h、Survivin均可能通过调节PCNA表达增殖过程发挥生物学功能。

乳腺癌患者凋亡抑制蛋白Survivin表达与血清糖类抗原153检测的临床意义

目的探讨乳腺癌患者凋亡抑制蛋白Survivin表达与血清糖类抗原153(CA153)检测的临床意义及二者的关系。方法分别应用免疫组织化学法和化学发光免疫法检测65例乳腺癌中Survivin表达情况与血清CA153的水平,采用SPSS13.0统计软件,Survivin表达与临床病理学指标的关系用χ2检验,Survivin和CA153的关系采用Sperman等级相关性分析。结果乳腺癌患者治疗前血清CA153浓度为(35.6±11.3)U/ml,治疗后为(11.8±3.6)U/ml,差异有统计学意义(t=2.915,P<0.05);乳腺癌Survivin阳性率在不同肿瘤大小、组织学分级和临床分期中差异无统计学意义(P>0.05);Survivin阳性表达患者中腋窝淋巴结转移率为68.0%(24/50),Survivin阴性表达患者腋窝淋巴结转移率为6.7%(1/15),差异有统计学意义(χ2=17.465,P<0.001);乳腺癌患者CA153浓度越高,Survivin表达阳性强度越大,二者呈正相关(r=0.425,P<0.05);Survivin表达阳性强度越大,腋窝淋巴结转移率越高。结论乳腺癌中Survivin、CA153的联合检测可以判断预后,二者升高明显提示患者可能有腋窝淋巴结转移,预示患者预后不良。

联合检测尿膀胱癌抗原和survivin诊断膀胱癌的临床应用

目的临床评价联合检测尿液中尿膀胱癌抗原(urinary bladder cancer antigen,UBC)和survivin基因诊断膀胱癌的临床应用价值。方法对64例膀胱癌患者、20例泌尿系其他良性疾病患者,在膀胱镜检查之前留尿将尿样分为3份,分别进行UBC、survivin和脱落细胞检测,分析比较三种方法诊断膀胱癌的临床应用价值。结果 UBC和survivin诊断膀胱癌的敏感度分别为85.9%(55/64)和93.8%(60/64),与脱落细胞学(40.6%)比较,差异有统计学意义(P<0.01〉,三种方法诊断膀胱癌的特异度分别为85.0%(17/20)、95%(19/20)和95%(19/20)。各分级和分期UBC和survivin诊断膀胱癌的敏感度均高于尿脱落细胞学检查;UBC值和survivin检测的敏感度在各分级和分期中差异无统计学意义(P>0.05);而尿脱落细胞学检查,肿瘤的分级越高,其敏感度越高(P<0.01),各分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。联合运用UBC和survivin,敏感度和特异度均达到100%。结论尿液中的UBC和survivin是早期诊断膀胱癌较好的肿瘤标志物,联合检测能提高诊断的敏感度和特异度。

禽白血病病毒p27抗原ELISA检测试剂盒的比较与评估

为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)p27抗原ELISA检测试剂盒(国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX)进行比较。结果显示:从分析特性上看,试剂盒分析特异性均较好,未观察到与其他常见禽源病毒的交叉反应;与IDEXX相比,DA、IA的分析敏感性较高,DB、IC其次,DC、IB较低,对于ALV不同亚群,各种试剂盒分析敏感性差异可达2~3个稀释度;从诊断特性上看,与IDEXX相比,DB、DC和IC的诊断敏感性和诊断特异性均高于90%;DA、IA和IB与IDEXX的诊断敏感性和诊断特异性均高于80%;各试剂盒对于不同类型样品(DF-1细胞培养物、蛋清、胎粪)的诊断敏感性和诊断特异性存在差异;从重复性上看,DA和IA的批内变异系数均在15%以内。综上所述,与IDEXX相比,当前国产p27抗原ELISA检测试剂盒DA和DB、进口p27抗原ELISA检测试剂盒IA和IC的各项性能可满足禽白血病净化各阶段对不同类型样品的检测需求。

Hp抗原联合血清总唾液酸和胃黏膜Survivin检测对胃腺癌诊断的意义

目的探讨Hp抗原联合血清总唾液酸和胃黏膜Survivin检测对胃腺癌诊断的意义。方法选取该院收治的90例胃腺癌(恶性肿瘤组)、90例消化系统良性疾病患者(良性疾病组)及同期入院体检的60例健康人(健康对照组)为研究对象。比较3组受试者Hp抗原、血清总唾液酸阳性检出率及胃黏膜Survivin的阳性率,并评估单独检测Hp抗原、血清总唾液酸及二者联合诊断胃腺癌的灵敏度与特异度。结果 Hp抗原、血清总唾液酸阳性率检测结果显示,恶性肿瘤组受试者明显高于良性疾病组以及健康对照组,良性疾病组明显高于健康对照组,3组受试者间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。线性相关分析表明,Hp抗原、血清总唾液酸联合检测与胃黏膜Survivin检测的结果呈正相关(r=0.94,P<0.05)。Hp抗原、血清总唾液酸联合诊断胃腺癌的灵敏度为80.1%,明显高于单独检测其中一项,但特异度降低。结论 Hp抗原、血清总唾液酸联合检测与胃黏膜Survivin检测的结果呈正相关,其相关度较高,可以作为胃腺癌诊断的敏感指标。

为提升IPTR患者血小板输注后CCI值建立分级规避HLA抗体对应抗原方法及HLAMatchmaker的应用研究

目的:建立分级规避HLA抗体MFI阈值对应抗原方法,联合应用HLAMatchmaker表位计算法,选择供患者表位最小错配评分值,评估两种方法为免疫性血小板输注无效(Immune platelet transfusion refractoriness,IPTR)患者选择HLA相容性血小板供者,在提升血小板输注后校正增加值(CCI)的应用价值。方法:采用SPRCA法完成51例IPTR患者的7807次血小板交叉配型实验,判断其免疫反应阴/阳性结果。采用Luminex单抗原流式微珠法检测患者的HLA-I类抗体,获得不同特异性抗体对应HLA-I类抗原MFI值,并将其分组及分级,强阳性组(MFI>4000,1级)、中阳性组(1000中阳性组>弱阳性组)。强阳性和中阳性组与阴性对照组之间的SPRCA实验免疫反应阳性结果检出数存在统计学差异(P<0.001),弱阳性位组和阴性对照组之间的SPRCA实验免疫反应阳性结果检出数无统计学差异(P>0.05)。设置强阳性组为相应特异性HLA位点对应抗原1级规避阈值,中阳性组为2级规避阈值,弱阳性组为3级规避阈值,在供者血小板紧缺情况下,可以不需要规避弱阳性组。规避1和2级HLA-I类抗体对应供者抗原及选择HLAMatchmaker表位错配评分数≤7血小板供者策略,24 h内CCI值均>4.5×109/L,均可获得临床血小板输注有效。结论:在为IPTR患者选择HLA-I类相容性供者时,分级规避HLA-I类抗体对应供者抗原,综合选择供受者HLAMatchmaker表位错配评分数≤7,经血小板交叉配型实验确认为阴性结果的供者选择策略,对提升IPTR患者血小板计数具有一定实际应用价值。

survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)在鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤(SNM)中的表达及其临床意义

目的探讨survivin和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤(sinonasal melanoma,SNM)中的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2004年3月至2011年8月在本院治疗的42例SNM患者的石蜡标本。采用免疫组织化学方法检测survivin和PCNA在SNM组织中的表达情况,分析survivin和PCNA表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。结果 survivin和PCNA表达水平与性别、年龄、肿瘤部位、淋巴转移部位及个数无明显相关性(P>0.05);肿瘤组织中survivin蛋白表达率为73.8%(31/42),PCNA蛋白表达率为100%(42/42);单因素分析结果显示,survivin高表达患者无瘤生存期(disease free survival,DFS)及总生存期(overall survival,OS)明显低于survivin低表达者(P<0.05);患者临床分期及survivin表达水平与患者预后相关(P<0.05),差异有统计学意义;多因素分析结果显示临床分期和survivin表达水平是SNM患者的独立不良预后因素。PCNA表达与SNM患者DFS、OS无明显统计学差异。结论 survivin表达水平与SNM患者预后相关,可作为评估SNM患者预后的一项重要指标。