miR-26a-3p靶向调控Survivin表达对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的探讨miR-26a-3p对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤的影响及其机制。方法取对数生长期H9c2心肌细胞进行缺氧(1%O 2)6 h,复氧不同时间(2、4、8、12 h)建立细胞H/R模型,另设常氧组,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性;比色法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-26a-3p和生存素(Survivin)mRNA表达水平;Western blot检测细胞中Survivin蛋白表达水平。将miR-26a-3p inhibitor及其阴性对照inhibitor NC、Survivin基因siRNA干扰质粒(si-Survivin)及其阴性对照si-NC共转染至H9c2细胞中,随后进行H/R干预,CCK-8检测各组细胞增殖水平;比色法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及上清液中LDH水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;Western blot检测各组细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、活化型半胱天冬酶-3(cleaved caspase-3)和Survivin蛋白表达水平;双荧光素酶测定miR-26a-3p和Survivin基因的靶向关系。结果与常氧组细胞比较,随着复氧时间的延长,H9c2细胞增殖活性、Survivin mRNA和蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05),而LDH及miR-26a-3p表达水平逐渐升高(P<0.05)。下调miR-26a-3p表达可提高H/R暴露下H9c2细胞增殖活性、SOD活性、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05),同时降低MDA含量、LDH释放量、凋亡率、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平(P<0.05);而Survivin缺失可明显逆转miR-26a-3p inhibitor对H/R诱导下H9c2细胞的保护作用。双荧光素酶报告基因实验表明Survivin是miR-93-5p的靶基因。结论miR-26a-3p在H/R诱导的心肌细胞损伤中高表达,抑制miR-26a-3p表达可通过靶向上调Survivin表达抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激。

胃腺体组织癌变过程中CD44和survivin表达与幽门螺杆菌感染的相关性及其在胃癌浸润和转移中的作用

目的分析胃腺体组织癌变过程中CD44、survivin表达与幽门螺杆菌(HP)感染的相关性,探讨CD44、survivin在胃腺体组织癌变过程及胃癌(GC)浸润和转移中的作用。方法选择2022年4月至2022年6月于新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的资料完整且为首次经胃镜及病理学检查后确诊慢性非萎缩性胃炎(CNAG)患者(CNAG组)、慢性萎缩性胃炎(CAG)患者(CAG组)、肠上皮化生(IM)患者(IM组)、异型增生(AH)患者(AH组)和GC患者(GC组)各50例为研究对象,收集各组患者的胃黏膜病变组织。采用快速尿素酶和碳14法分别检测CNAG、CAG、IM、AH和GC患者胃黏膜病变组织中HP感染情况,苏木精-伊红染色观察不同患者胃黏膜病变组织形态,免疫组织化学法检测不同患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin的蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应检测不同患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin mRNA表达。结果250例患者中,HP感染率为50.4%(126/250),其中CNAG、CAG、IM、AH和GC患者的HP感染率分别为10.0%(5/50)、24.0%(12/50)、44.0%(22/50)、68.0%(34/50)、80.0%(40/50),HP感染率呈显著增高趋势(χ^(2)=68.068,P<0.001)。CNAG组、CAG组、IM组、AH组和GC组患者胃黏膜病变组织中CD44蛋白阳性表达率分别为4.0%、16.0%、32.0%、62.0%、80.0%,呈逐渐升高趋势(χ^(2)=84.50,P<0.001)。CAG组、IM组、AH组和GC组胃黏膜病变组织中survivin蛋白阳性表达率分别为18.0%、38.0%、58.0%、68.0%,呈逐渐升高趋势(χ^(2)=67.63,P<0.001)。CAG组、IM组、AH组和GC组患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin mRNA相对表达量显著高于CNAG组,IM组、AH组和GC组患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin mRNA相对表达量显著高于CAG组,AH组和GC组患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin mRNA相对表达量显著高于IM组,GC组患者胃黏膜病变组织中CD44和survivin mRNA相对表达量显著高于AH组(P<0.001)。CAG组、IM组、AH和GC组HP阳性患者胃黏膜组织中CD44、survivin蛋白阳性表达率显著高于阴性患者(P<0.01)。CNAG组HP阳性患者与阴性患者胃黏膜组织中CD44、survivin蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。CD44和survivin蛋白表达与GC患者癌组织分化程度、淋巴结转移、远处转移相关(P<0.05),CD44和survivin蛋白表达与GC患者的浸润深度无相关性(P>0.05)。结论HP感染与CD44和survivin基因表达间存在正关联,胃腺体组织癌变过程中Hp感染可能诱导CD44和survivin基因表达,从而通过改变黏膜细胞的生物学活性来发挥促癌作用;CD44和survivin可促进GC的浸润和转移。

大肠癌组织中Survivin表达与血管生成、细胞增殖的关系

目的 探讨大肠癌组织中Survivin表达与血管生成、细胞增殖的关系。方法 采用原位杂交方法和免疫组织化学方法 ,对 46例大肠癌、2 2例大肠腺瘤和 10例大肠正常组织进行SurvivinmRNA和PCNA检测 ,并计数微血管密度 (MVD)。结果 大肠癌组织中SurvivinmRNA、PCNA指数和MVD均显著高于大肠腺瘤和大肠正常组织 (P <0 .0 5 )。SurvivinmRNA表达阳性组中 ,MVD和PCNA指数均明显高于SurvivinmRNA阴性组 (P <0 .0 5 )。结论 Survivin在大肠癌组织中表达上调 ,并与血管生成和细胞增殖关系密切 。

地塞米松对^(125)I内照射裸鼠A549肺癌细胞存AQP5及活素survivin表达的影响

目的:探讨地塞米松对^(125)I放射性粒子内照射A549肺癌细胞AQP5及存活素(survivin)表达的影响。方法:共25只A549肺腺癌皮下种植BALB/c-nu裸鼠模型随机分为实验组(n=12)和对照组(n=13),实验组进行^(125)I放射性粒子植入+地塞米松(鼠尾静脉注射),对照组进行^(125)I放射性粒子植入,7 d后处死裸鼠行AQP5及survivin免疫组化检测。结果:实验组的AQP5阳性表达率高于对照组(分别为91.6%和53.8%,P=0.046),survivin的阳性表达率低于对照组(分别为33.3%和76.9%,P=0.036)。结论:地塞米松可能通过上调AQP5的表达进而增加A549肺癌细胞对^(125)I的辐射敏感性,其机制与survivin表达抑制相关。

蛋白印迹法与免疫荧光法检测白血病患者Survivin表达

目的 比较蛋白印迹法和免疫荧光法检测Survivin表达结果,以探寻临床上切实可行的检测方法。方法 应用蛋白印迹(Western blots)和免疫荧光法检测18例白血病患者和10例正常对照组外周血中单个核细胞Survivin的表达。结果 Western blots 法检测Survivin 表达阳性13 例(72. 2%);免疫荧光法检测Survivin 表达阳性11 例(61.1%)。两种方法检测10例正常对照组外周血单个核细胞中Survivin的表达均为阴性。两种检测方法的符合率为88.89%。结论 Survivin是否表达可能成为白血病临床诊断、预后判断的有效指标。两种检测方法具有良好的一致性,免疫荧光法操作比较简单,适于在临床上应用。

胃癌组织中Survivin表达的临床病理学意义

目的研究凋亡抑制蛋白Survivin在胃癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学染色方法(SP法)检测92例胃癌组织中Survivin的表达,分析Survivin表达与各临床病理因素的关系;应用Kaplan-Meier法分析Survivin表达对胃癌生存率的影响。结果Survivin在胃癌组织中的表达率为37.0%(34/92例),正常胃黏膜未见Survivin表达;Survivin表达与胃癌细胞分化、浸润深度、淋巴结转移、TMN分期明显相关,(P<0.05)。Survivin阳性表达的胃癌患者5年生存率为26.5%(9/34),而Survivin阴性表达患者5年生存率为51.7%(30/58),经log-rank检验,差异有统计学意义,(P<0.05)。结论胃癌组织中凋亡抑制蛋白Survivin表达可作为判断胃癌恶性程度和预后的辅助指标。

NS-398对骨肉瘤细胞的作用及其对Survivin表达的影响

目的:观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人骨肉瘤细胞系MG-63的凋亡的影响及其对survivin基因表达的影响。方法:体外培养骨肉瘤细胞系MG-63,应用MTT法研究不同浓度NS-398对骨肉瘤细胞系MG-63的凋亡诱导作用,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡率的变化,RT-PCR法分析NS-398对骨肉瘤细胞系MG-63中sur-vivin基因表达的影响。结果:NS-398可诱导骨肉瘤细胞系MG-63发生凋亡,并具有剂量依赖性,在NS-398浓度为200μmol/L时,对细胞生长有明显的抑制作用。流式细胞仪检测显示NS-398引起MG-63细胞凋亡率增加。RT-PCR分析显示经NS-398作用后的骨肉瘤细胞系MG-63表达survivin较用药前明显下降。结论:NS-398对骨肉瘤细胞系MG-63有杀伤作用,其作用可能通过抑制survivin的表达,促进肿瘤细胞的凋亡而实现。

胃淋巴瘤组织Survivin表达与幽门螺杆菌感染的关系

目的:探讨Survivin基因在胃淋巴瘤中的表达及其与幽门螺杆(H pylori)感染的关系. 方法:用免疫组化法检测30例胃淋巴瘤和30例正常胃组织Survivin的表达,同时用碱性品红染色法检测30例胃淋巴瘤及30例对照组H pylori感染情况. 结果:30例胃淋巴瘤中14例Survivin表达阳性,而正常胃组织均无表达(46.67%vs 0%,P=0.0002).Survivin表达与淋巴瘤分化程度、淋巴结转移及预后相关.胃淋巴瘤组织中H pylori阳性检出率11例,正常胃组织7例(36.7%vs 23.33%,P=0.26).胃MALT型淋巴瘤Survivin阳性表达与H pylori感染有显著相关性(r=0.644,P=0.04). 结论:Survivin基因在胃淋巴瘤中表达上调,而且与分化程度、淋巴结转移及预后有关.H pylori感染与胃MALT型淋巴瘤和Survivin表达有关.

失巢凋亡过程中整合蛋白α5β1过表达对人肝癌细胞Survivin表达的影响

目的:探讨整合蛋白α5β1过表达引起肝癌细胞凋亡的机理。方法:利用poly-hema使细胞非贴壁生长12 h、18 h、24 h,诱导失巢凋亡。通过Western印迹法检测Survivin表达量。结果:随着Poly-hema诱导时间的增加,α5β1-7721和β1-7721细胞凋亡和死亡率也随之增加而Survivin表达量则减少,β1-7721细胞的减少程度显著大于α5β1-7721,在18h时减少了55％。结论:Survivin在β1-7721细胞的凋亡过程中所起的作用大于α5β1-7721细胞。

放疗前后宫颈癌中Survivin表达及凋亡研究

目的研究放疗前后宫颈癌组织Survivin表达水平及凋亡,探讨其与放疗效果的相关性。方法选取38例接受放疗的宫颈癌患者,用免疫组化法分别检测放疗前后Survivin的表达及TUNEL法检测细胞凋亡的情况,并评价放疗效果。结果 Survivin表达阴性和阳性相比,前者的放疗效果优于后者,差异有统计学意义(P<0.05);放疗后获得临床稳定的患者与获得临床部分缓解的患者相比,Survivin上调的比例明显高于后者,差异有统计学意义(P<0.05);放疗后Survivin阴性表达者的细胞凋亡明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Survivin基因有望成为宫颈癌逆转放疗抵抗的新靶点。

小鼠移植性肝癌不同局部治疗后p27、bcl-2及survivin表达的变化

目的探讨氩氦冷冻和局部乙醇注射治疗作用于小鼠移植性肝癌后,小鼠的生存情况及残存肝癌细胞生物学特性的差异。方法采用氩氦冷冻和局部乙醇注射治疗小鼠移植性肝癌,比较各组之间生存时间和残存组织p27、bc l-2及survivin免疫组织化学染色阳性单位的差异。结果治疗组与空白组之间生存时间存在显著性差异。氩氦冷冻治疗与乙醇注射组p27表达存在显著性差异,而bc l-2和survivin表达差异不显著。结论经局部治疗后小鼠生存时间延长,细胞生物学特性发生变化,氩氦冷冻治疗后肝癌细胞较乙醇注射后组织可能出现增殖能力下降。

宫颈组织病变与Ki-67 Survivin表达的关系研究

本实验拟采用免疫组织化学法和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测正常宫颈、宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈浸润癌组织中Survivin及Ki-67蛋白表达情况,并分析宫颈组织病变与Ki-67,Survivin蛋白表达、宫颈上皮内瘤变之间的相关性,从而探讨它们对宫颈病变普查的临床价值。

茶多酚对小鼠Lewis肺癌移植瘤中NF-κB、COX-2、Survivin表达的影响

背景与目的肺癌是全球第一大恶性肿瘤,前期研究表明茶多酚具有一定的抗肺癌新生血管生成作用,本研究旨在观察茶多酚对小鼠Lewis肺癌移植瘤中NF-κB、COX-2、Survivin表达的影响,进而探讨茶多酚抗新生血管生成的效应机制。方法建立C57BL/6小鼠肺癌移植瘤模型,测定模型对照组、沙利度胺组、茶多酚组以及茶多酚联合沙利度胺组的肿瘤抑制率,并且采用免疫组化法检测各组NF-κB、COX-2、Survivin表达水平,以探讨其抗肿瘤的分子机制。结果实验表明,茶多酚具有如下作用:①沙利度胺组、茶多酚组以及茶多酚联合沙利度胺组的肿瘤抑制率分别为17.26%、20.81%和44.32%,茶多酚联合沙利度胺组与模型组瘤重比较,差异具有统计学意义(P<0.05);②NF-κB表达在茶多酚组及联合用药组有所降低,与模型对照组相比,联合用药组NF-κB表达明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);③COX-2表达在各治疗组均有所下降,与模型对照组相比,联合用药组表达明显下降(P<0.05);④Survivin表达在各治疗组均较模型对照组明显降低(P<0.05),其中茶多酚组下降最为明显(P<0.01)。结论茶多酚联合沙利度胺组对肺癌有明显抑制作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路的异常激活、抑制NF-κB活化、降低COX-2表达、并降低内皮细胞Survivin表达从而抗肺癌新生血管生成相关。

周围T细胞淋巴瘤survivin表达的临床意义

背景与目的:周围T细胞淋巴瘤(peripheralT-celllymphoma,PTCL)约占NHL的10%～15%,临床表现进展快、预后差。survivin是凋亡蛋白抑制因子之一,在多种恶性肿瘤患者中都有过表达,是一个预后不良指标。本研究通过检测周围T细胞淋巴瘤肿瘤组织survivin表达情况,探讨其表达与临床预后的关系。方法:采用免疫组化SP法检测51例初治周围T细胞淋巴瘤肿瘤组织survivin表达情况。应用SPSS10.0软件行生存分析并对各临床指标与预后的关系进行单因素和多因素分析。结果:51例周围T细胞淋巴瘤肿瘤组织survivin阳性表达为82.3%(42/51),survivin表达与性别、年龄、分期、结外病灶数目、PS、LDH、B症状、IPI无显著性相关(P>0.05)。本组病例总的5年生存率为32.67%,而survivin阳性组和survivin阴性组患者的5年生存率分别为25.0%和75.0%,差异有显著性(P=0.03)。多因素分析显示survivin表达是周围T细胞淋巴瘤的独立预后指标。结论:survivin表达是周围T细胞淋巴瘤的一个有价值的预后指标,与IPI结合可于早期筛选出常规治疗预后不良的病例,有助于指导治疗及改善预后。

乳腺癌中GRP78、Survivin表达的相关性及与预后的关系

目的:探讨乳腺癌中GRP78、Survivin表达的相关性及其与乳腺癌患者预后的关系。方法:采用免疫组化Envision法检测169例乳腺癌石蜡标本中GRP78、Survivin的表达状况,并对其表达的相关性以及与乳腺癌患者预后的关系进行了统计分析。结果:在169例乳腺癌标本中,GRP78强表达为68例(40.2%),弱表达为101例(59.8%);Survivin强表达为96例(56.8%),弱表达为73例(43.2%)。对二者相关性的分析表明二者表达的吻合度具有统计学意义,但吻合程度较弱。单因素生存分析结果表明GRP78(+)Survivin(+)组(1组)、GRP78(-)Survivin(+)组(2组)、GRP78(+)Survivin(-)(3组)之间的无病生存时间差异无显著性(P>0.05),但与GRP78(-)Survivin(-)组(4组)相比,其无病生存时间均较差,差异有显著性(P<0.05);1、2、3组间的总生存时间差异无显著性(P>0.05),但与4组相比,其总生存时间均较差,差异有显著性(P<0.05)。多因素Cox回归分析表明GRP78、Survivin的表达状况是影响乳腺癌患者无病生存时间的独立预后因素(P<0.05),但不是总生存时间的独立预后因素(P>0.05)。结论:乳腺癌中GRP78与Survivn存在着相关性,GRP78和/或Survivn强表达提示患者预后不良,GRP78、Survivin的表达状况对判断乳腺癌患者的预后具有一定的参考价值。

食管鳞状细胞癌survivin表达与其CpG岛甲基化的研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)肿瘤组织survivin基因的表达与其CpG岛甲基化状态的关系。方法采用RT-PCR的方法检测ESCC细胞株、ESCC肿瘤组织及对应的远癌组织中的sur-vivin基因mRNA的表达;采用亚硫酸氢钠修饰后测序法(BSP)检测survivin基因CpG岛甲基化状态。结果ESCC肿瘤组织survivin mRNA表达阳性率为65.5%,而绝大部分远癌组织表达阴性;20例survivin表达阳性的肿瘤组织、survivin表达阴性的远癌组织及5株ESCC细胞所扩增片段中的CpG位点均呈非甲基化状态。结论ESCC组织中survivin的表达与否与其CpG岛的甲基化状态无关,提示该区域的甲基化修饰未参与调控survivin基因的转录。

survivin短发夹状RNA真核表达载体的构建及其对宫颈癌细胞survivin表达的影响

目的:构建survivin基因短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其对宫颈癌细胞survivin表达的抑制作用。方法:设计、合成2对survivin特异性微小片段RNA引物(s1、s2),退火连接后利用DNA重组技术,将其分别克隆入真核表达载体pSilencer 2.1-U6 neo,酶切、鉴定测序后,经脂质体转染宫颈癌HeLa细胞,G418筛选阳性克隆,半定量RT-PCR检测survivin mRNA表达,Western blot检测survivin蛋白表达。结果:成功构建了survivin shRNA真核表达载体pSilencer2.1-s1和pSilencer2.1-s2,G418筛选24 d后出现阳性克隆,转染pSilencer2.1-s1和pSilencer2.1-s2的HeLa细胞中,survivin表达呈现不同程度下调,pSilencer2.1-s2的干涉效果较好。结论:成功构建并筛选出干涉效果较好的survivin shRNA真核表达载体,为进一步研究其对宫颈癌细胞生物学行为的影响奠定了实验基础。

维生素C对A549细胞增殖、凋亡及Caspase-3、Survivin表达的影响

背景与目的维生素C作为一种抗氧化剂,对多种肿瘤均有抑制作用,本研究旨在探讨维生素C对肺癌细胞株A549的增殖、凋亡的影响及其诱导A549细胞凋亡的可能机制。方法在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的维生素C,采用细胞生长曲线及克隆形成实验检测细胞生长情况;用流式细胞仪检测细胞周期的影响及凋亡率;用RT-PCR方法检测肺癌细胞株A549中Caspase-3、Survivin的表达差异。结果400μg/mL、4mg/mL浓度组维生素C明显抑制A549细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞被阻止在G0/G1期及S期,且随着时间的延长细胞凋亡逐渐增多,RT-PCR检测维生素C可以上调Caspase-3mRNA的表达,并且随着时间的延长Caspase-3mRNA的表达逐渐增强,对Survivin mRNA的表达无确切作用。结论维生素C呈时间和剂量依赖性抑制A549细胞的增殖,并使A549细胞阻止在G0/G1期及S期,并呈时间依赖性诱导A549细胞凋亡,其机制可能是通过上调Caspase-3的表达。