含Sushi重复蛋白X连锁2基因敲除对肺腺癌A549细胞生物学特性的影响

目的探讨含Sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)基因敲除对肺腺癌人类肺泡基底上皮细胞A549细胞生物学特性的影响。方法根据是否敲除SRPX2基因将对数生长期的A549细胞分为对照组和敲除组,敲除组细胞采用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)-CRISPR相关蛋白9基因编辑技术敲除SRPX2基因,对照组细胞常规传代培养。采用聚合酶链式反应法、琼脂糖凝胶电泳以及DNA测序验证是否成功敲除SRPX2基因。采用流式细胞术检测2组细胞周期,细胞计数试剂盒法检测2组细胞增殖情况,Transwell小室实验检测2组细胞迁移能力。结果琼脂糖凝胶电泳及DNA测序结果均显示敲除组细胞成功敲除68 bp SRPX2基因部分序列。培养24 h时,敲除组G_(0)/G_(1)及S期细胞所占比例显著低于对照组,G_(2)/M期细胞所占比例显著高于对照组(P<0.05);培养48 h时,敲除组S期细胞所占比例显著低于对照组,G_(2)/M期细胞所占比例显著高于对照组(P<0.05);培养48 h时,2组G_(0)/G_(1)期细胞所占比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养0、24、48、72、96 h时,对照组和敲除组细胞的增殖能力随时间的延长均呈升高趋势(F=244.463、87.198,P<0.05);培养0、24、48、72、96 h时,2组细胞的增殖能力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。培养24 h时,对照组和敲除组迁移细胞数分别为(24.200±3.899)、(6.800±1.304)个;培养48 h时,对照组和敲除组迁移细胞数分别为(92.200±6.419)、(48.800±2.280)个;培养24、48 h时,敲除组迁移细胞数显著少于对照组(t=9.464、14.247,P<0.05)。结论敲除肺腺癌A549细胞中SRPX2基因能显著抑制细胞的迁移、阻滞细胞周期,SRPX2基因可能成为肺腺癌治疗的新靶点。

分化型甲状腺癌超声造影参数与SRPX2、HSP70和MFAP2的相关性研究

目的:探讨分化型甲状腺癌(DTC)超声造影(CEUS)参数与Sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)、热休克蛋白70(HSP70)、微纤维相关蛋白2(MFAP2)的相关性,为早期评估DTC患者预后提供影像学依据。方法:选取2018年1月-2021年1月在本院就诊并行手术治疗的148例DTC患者作为研究对象,并选取同期120例良性甲状腺结节患者作为对照组。使用迈瑞RE7彩色多普勒超声诊断仪对所有患者在术前进行甲状腺检查,记录结节内增强程度(分为低、中和高度)和均匀性,测量造影剂达峰时间(TTP)、平均通过时间(MTT)和峰值强度(PI)。采用免疫组织化学SP法检测DTC患者和良性甲状腺结节患者病灶组织中SRPX2、HSP70和MFAP2的表达水平。比较良性组与恶性组之间造影特征及参数以及免疫组化指标间的差异。结果:DTC患者的SRPX2、HSP70和MFAP2表达水平均显著高于良性结节患者(P<0.05)。超声造影检查显示DTC与良性结节之间增强程度、增强均匀性的差异均具有统计学意义(P<0.05);DTC的TTP、MTT和PI均显著低于良性结节(P<0.05)。SPRX2高表达组出现低增强、强化不均匀、低水平TTP、MTT和PI的比例均显著高于SPRX2低表达者(P<0.05);HSP70高表达组出现低水平TTP、MTT和PI的比例均显著高于HSP70低表达组(P<0.05);MFAP2高表达组出现低水平TTP、MTT和PI的比例均显著高于MFAP2低表达组(P<0.05)。多元Logistic回归分析结果显示低水平PI和增强不均匀是SRPX2高表达的独立危险因素(P均<0.05);低水平PI和MTT是HSP70高表达的独立危险因素(P均<0.05);低水平TTP、MTT和PI是MFAP2高表达的独立危险因素(P均<0.05)。结论:超声造影参数值与SRPX2、HSP70、MFAP2的表达水平有关,有助于预测DTC患者的预后。

硫酸软骨素蛋白聚糖SRPX2在胃肠道肿瘤中的作用

含sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)是一种具有细胞外基质蛋白性的硫酸软骨素蛋白聚糖。研究显示SRPX2可影响细胞的迁移、黏附等生物学行为,并具有促血管成作用。SRPX2在胃癌和结肠癌组织中呈过表达,并与预后不良相关。本文就SRPX2在胃肠道肿瘤中作用的研究现状作一综述。

SRPX2真核表达载体的构建及其在SW480细胞中的表达

目的:构建人含sushi重复蛋白X连锁2(sushi repeat-containing protein,X-linked 2,SRPX2)基因真核表达载体pcDNA3.1-SRPX2,并在结肠癌细胞系SW480中瞬时表达.方法:采用逆转录PCR方法从人结直肠癌HCT116细胞总RNA中扩增出SRPX2 CDS区的cDNA片段,先后与T载体pMD19及真核表达载体pcDNA3.1连接,重组质粒经双酶切和测序鉴定无误后,采用Lipofectamine 2000瞬时转染SW480细胞,应用实时荧光定量PCR及免疫印迹法检测SRPX2 mRNA及蛋白的表达水平.结果:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-SRPX2,测序和双酶切鉴定结果均正确,载体能在SW480细胞中上调SRPX2 mRNA表达,并正确表达SRPX2蛋白.结论:成功构建SRPX2真核表达载体,为进一步研究SRPX2基因在结直肠癌中的功能奠定了基础.

SRPX2在胃癌中的表达及对细胞侵袭的影响

目的探讨含sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)在人胃癌(GC)中的表达及对胃癌MGC-803细胞侵袭能力的影响。方法收集2014年3月1日-2015年3月1日于该院消化内科行手术切除的45例胃癌及对应癌旁组织。检测SRPX2 mRNA及蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达情况,分析胃癌组织中SRPX2蛋白表达对肿瘤临床表型的影响。通过si RNA下调胃癌MGC-803细胞中SRPX2的表达,通过Transwell侵袭小室检测沉默SRPX2之后MGC-803细胞侵袭能力的变化;同时检测沉默SRPX2后MGC-803细胞内基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平的改变。结果 SRPX2在胃癌组织中表达升高,胃癌组织高表达SRPX2与肿瘤淋巴结转移及高TNM分期(Ⅲ+Ⅳ期)相关(P<0.05);沉默SRPX2表达可抑制胃癌MGC-803细胞的侵袭能力并同时下调了MGC-803细胞中MMP-2的表达。结论胃癌组织中高表达的SRPX2与肿瘤转移表型关系密切,沉默SRPX2可能通过下调MMP-2的表达而抑制胃癌细胞侵袭。

BRSK2、ZFX及CTHRC1蛋白在胃癌组织中的表达及与病理参数、预后的关系研究

目的研究脑选择性蛋白激酶2(BRSK2)、X染色体连锁锌指蛋白(ZFX)及胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在胃癌组织中的表达及与病理参数、预后的关系。方法回顾性分析我院2016年1月—2018年1月收治的58例胃癌患者的临床资料,按照部位不同分为胃癌组织组和癌旁组织组(距离胃癌组织5 cm以上的正常胃黏膜组织),每组58例。比较BRSK2、ZFX及CTHRC1蛋白在胃癌组织及癌旁组织的表达情况;随访2年,记录纳入者的存活及死亡情况,分析BRSK2、ZFX及CTHRC1蛋白对胃癌预后的影响及与各病理参数的相关性,并分析胃癌预后生存的危险因素。结果BRSK2在胃癌组织中的阳性表达率低于癌旁组织(P<0.01),ZFX和CTHRC1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织(P<0.01)。BRSK2、ZFX及CTHRC1蛋白表达与胃癌侵袭深度、淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05)。BRSK2阴性组平均生存时间短于阳性组(P<0.05)。ZFX、CTHRC1蛋白阴性组平均生存时间长于阳性组(P<0.05)。侵袭深度为T3+T4、存在淋巴结转移、BRSK2阴性、ZFX阳性、CTHRC1蛋白阳性为影响胃癌预后生存的独立危险因素(P<0.05)。结论BRSK2在胃癌组织中表达水平下降,ZFX及CTHRC1蛋白在胃癌组织中的表达水平增高;BRSK2、ZFX及CTHRC1蛋白表达水平的异常均参与了胃癌的发生和发展,并且与预后生存关系密切,可作为预测胃癌预后的分子标志物和肿瘤治疗的潜在靶点。

SRPX2的功能及其在肿瘤发生发展中的作用

含sushi重复蛋白X连锁2(sushi repeat-containing protein X-linked 2,SRPX2)是一种分子质量约为53 k D,具有细胞外基质蛋白属性的硫酸软骨素蛋白聚糖,在大脑语言中枢的发育过程中发挥重要作用。目前研究发现,SRPX2在多种恶性肿瘤组织中呈高表达,参与肿瘤细胞的增殖、迁移、黏附和侵袭等生物学行为,促进肿瘤的发生和发展,与肿瘤患者的不良预后密切相关。另有研究显示,SRPX2可通过诱导内皮细胞迁移和血管网形成,从而促进血管生成。因此认为,SRPX2是一个潜在的肿瘤治疗靶点。本文对SRPX2的结构、生物学特征、相关疾病以及在肿瘤中的生物学作用及其机制进行综述。

SRPX2在子宫内膜癌中的表达及对HEC-1A细胞增殖凋亡的影响

目的:探讨SRPX2在人子宫内膜癌中的表达及生物学功能。方法:收集50例子宫内膜癌及癌旁组织,免疫组化染色法检测SRPX2的表达,分析SRPX2表达与患者临床特点的关系。通过si RNA下调HEC-1A细胞中SRPX2的表达,检测HEC-1A细胞增殖及凋亡改变。检测沉默SRPX2后细胞内FAK及Cyclin D1表达改变。结果:SRPX2在子宫内膜癌组织中表达明显升高并与肿瘤直径增大及高FIGO分期(Ⅲ+Ⅳ期)显著相关(P<0.05);沉默SRPX2表达可显著抑制HEC-1A细胞的增殖并促进凋亡,并导致细胞中FAK及Cyclin D1的表达降低。结论:子宫内膜癌组织中高表达的SRPX2与肿瘤增殖关系密切,沉默SRPX2可能通过下调FAK/Cyclin D1的表达而抑制子宫内膜癌细胞增殖并促进凋亡。

重组硫酸软骨素蛋白SRPX2减轻小鼠葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎的作用

目的评价sushi重复蛋白X连锁2蛋白(SRPX2)在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的实验性结肠炎小鼠中的作用及其可能机制。方法 DSS+SRPX2组,DSS组小鼠各5只,自第1天起给予5%DSS溶液自由饮用,分别给予SRPX2重组蛋白及0.9%氯化钠溶液腹腔注射5 d,至第6天处死小鼠。另设正常对照组(不予处理)。记录各组小鼠疾病活动度(DAI)评分、结肠组织学评分;检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性;分离固有层单个核细胞(LPMC),酶联免疫吸附实验法检测LPMC中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)的表达;比色法试剂盒检测N6-腺苷酸甲基化(m~6A)修饰的RNA的水平。结果 DSS组小鼠第5天的DAI评分较正常对照组明显升高(P <0.01),DSS+SRPX2组DAI评分较DSS组均明显降低(P <0.05)。处死小鼠后,DSS组小鼠结肠组织学评分及MPO活性较正常对照组均明显升高(P <0.05),DSS+SRPX2组小鼠结肠的组织学评分及MPO活性均较DSS组明显降低(P <0.05)。DSS组小鼠LPMC中TNF-α、NF-κB水平较正常对照组均明显升高(P <0.05),DSS+SRPX2组小鼠LPMC中TNF-α、NF-κB水平均较DSS组明显降低(P <0.05)。DSS组小鼠LPMC中m~6A修饰的RNA的比例较正常对照组明显升高(P <0.05),而DSS+SRPX2组小鼠LPMC中m~6A修饰的RNA的比例较DSS组明显降低(P <0.05)。结论 SRPX2重组蛋白具有减轻DSS诱导的小鼠实验性结肠炎的作用,其作用可能与改变结肠组织LPMC中m~6A甲基化RNA的水平有关。

SRPX2和淋巴结转移密度对乳腺癌的预后价值研究

目的:探讨细胞外基质蛋白含sushi重复蛋白X连锁2(sushi repeat containing protein X-linked 2,SRPX2)和淋巴结转移密度(lymph node metastasis density,ND)在乳腺癌中的临床意义及其相关性。方法:回顾性分析乳腺癌110例患者的临床病理资料,采用组织芯片技术及免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中SRPX2蛋白的表达情况,分析SRPX2、ND与临床病理特征及预后之间的关系。结果:(1)乳腺癌组织中SRPX2高表达、ND>40%均与患者TNM分期及人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)的阳性表达呈正相关(rs=0.335、0.363、0.416、0.261,均P<0.05),与其他临床病理特征均无关(均P>0.05)。(2)乳腺癌组织中SRPX2高表达与ND>40%呈正相关(rs=0.494,P<0.05)。(3)Kaplan-Meier生存曲线分析显示SRPX2蛋白表达越多及ND越高,患者的无瘤生存时间越短(P<0.05)。结论:细胞外基质蛋白SRPX2及ND与乳腺癌的侵袭和预后密切相关,联合检测SRPX2及ND对判断乳腺癌细胞的生物学行为和患者预后评估具有一定的价值。

SRPX2通过巨噬细胞促进人脐静脉内皮细胞血管生成能力的作用

目的:探究含sushi重复蛋白X连锁2蛋白(sushi repeat-containing protein X-linked 2,SRPX2)是否可通过巨噬细胞对血管生成产生影响及其可能的机制。方法:用shRNA-SRPX2及shRNA空载体转染HCT116细胞,并收集以上两种细胞和空白HCT116的细胞培养基作条件培养基,用3种条件培养基作用于人源单核细胞(THP-1)诱导的巨噬细胞,而后巨噬细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养,并以Transwell迁移实验检测HUVEC迁移能力,以Matrigel基质胶管腔形成实验检测管腔形成能力。用Western blot检测巨噬细胞中局部黏着斑激酶(FAK)的表达水平。结果:在Transwell迁移实验中,HCT116敲降SRPX2基因的条件培养基与巨噬细胞作用,并与HUVEC共培养后,HUVEC迁移细胞数明显减少(P <0. 01)。而在Matrigel管腔形成实验中,HCT116敲降组形成的管腔的交叉点数、成网数、节点数也有所减少(P <0. 05)。FAK蛋白检测发现,SRPX2重组蛋白作用后的巨噬细胞总FAK表达量和FAK蛋白磷酸化水平有所增高。结论:SRPX2可能通过FAK相关通路影响巨噬细胞,进而间接影响血管内皮细胞的血管生成能力。

西妥昔单抗联合FOLFIRI方案治疗结直肠癌疗效及对血清ESM1、SRPX2、VEGF水平的影响

目的:探讨西妥昔单抗联合FOLFIRI方案治疗结直肠癌的疗效及对血清内皮细胞特异性分子-1(ESM1)、含sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)、血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法:回顾性分析某院接受治疗的162例经病理学确诊的结直肠癌患者的临床资料,按照治疗方法的不同分为观察组(n=88)与对照组(n=74)。对照组予以单纯FOLFIRI化疗方案(伊立替康+亚叶酸钙+5-氟尿嘧啶)治疗,观察组加以西妥昔单抗联合治疗,均持续治疗4~6个周期后按实体瘤疗效判定标准评估2组患者近期临床疗效,并记录其治疗前后的免疫功能(CD^(3+)、CD^(4+)、CD^(8+)、CD^(4+)/CD^(8+))、血清肿瘤标志物〔ESM1、SRPX2、VEGF、CEA、糖类抗原199(CA199)〕变化、毒副反应发生及生存情况。结果:观察组总有效率、总获益率明显高于对照组(P<0.05);治疗后,观察组患者CD^(3+)、CD^(4+)及CD^(4+)/CD^(8+)水平高于治疗前及同期对照组,CD^(8+)、ESM1、SRPX2、VEGF、CEA、CA199水平低于治疗前及同期对照组(P<0.05);观察组皮疹过敏及骨髓抑制发生率、1年生存率明显高于对照组(P<0.05),2组患者恶心呕吐、肝功能损害、肾功能损害发生率、6个月生存率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:西妥昔单抗联合FOLFIRI方案治疗结直肠癌效果理想,可有效降低血清ESM1、SRPX2、VEGF水平,提高免疫功能,并有利于短期生存率的提高,值得推广。

细胞基质蛋白SRPX2促血管生成作用及其调控因素

SRPX2是一种具有细胞外基质蛋白属性的硫酸软骨素蛋白多糖,该基因最早发现于白血病细胞中,后来进一步的研究发现其同时也具有参与癫痫发作、血管生成、细胞黏附等多种生物学行为。该基因正常表达于脑神经元、心、肺、气管等多种正常的组织中,该基因发生突变会导致癫痫发作、言语缺失等,影响正常神经系统的发育。后续研究发现该基因同时具有促血管生成、细胞黏附的作用。多项相关研究报道SRPX2参与了早期的血管生成,并主要通过与uPAR的相互作用参与血管生成早期阶段的血管内皮结构重塑。研究发现新生血管内皮细胞中存在SRPX2和uPAR共表达,通过siRNA沉默SRPX2基因可以特异性抑制小鼠t.End.1V内皮细胞迁移及早期出芽的形成;SRPX2高表达可激活整合素αvβ3/FAK信号通路参与调节血管内皮细胞迁移、黏附等生物学行为,并具有促管腔形成作用。深入研究其在促进血管生成过程中的相关调节因素,为后期进一步研究通过体外基因转染优化内皮细胞结构、生物学功能,促进缺血组织血管新生,对防治下肢缺血性疾病具有重要参考意义。

X连锁犰狳重复蛋白3在甲状腺乳头状癌组织的表达及其临床意义

目的探讨甲状腺乳头状癌中X连锁犰狳重复蛋白3(ALEX3)的表达及意义。方法收集郑州大学第一附属医院2018年6月至2018年9月60例甲状腺乳头状癌患者(男10例,女50例)手术新鲜癌组织及正常甲状腺组织,应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测甲状腺乳头状癌组织及配对正常甲状腺组织中ALEX3 mRNA和蛋白的表达,以ALEX3表达水平的中位值作为截断值,将60例甲状腺癌乳头状癌患者分为ALEX3高表达组和ALEX3低表达组。采用t检验分析甲状腺乳头状癌组织和正常甲状腺组织ALEX3表达量差异,采用χ^2检验分析ALEX3 mRNA表达水平与甲状腺癌患者临床病理学特征的相关性。结果ALEX3 mRNA在甲状腺乳头状癌组织相对表达量(2.125±0.755)显著高于正常甲状腺组织(1.156±0.426,t=8.663,P<0.05),差异有统计学意义,其表达水平与TNM分期和淋巴结转移密切相关(χ^2=5.963、15.152,P<0.05)。ALEX3蛋白在甲状腺乳头状癌组织相对表达量(0.332±0.145)明显高于正常甲状腺组织(0.204±0.132,t=2.252,P<0.05),差异有统计学意义。结论ALEX3在甲状腺乳头状癌组织中显著高表达,可能在其发生、发展中起重要作用。

结肠腺癌组织中ARMCX1的表达及临床意义

目的探讨结肠腺癌组织中ARM重复X连锁蛋白1(ARMCX1)的表达及临床意义。方法收集65例结肠腺癌患者癌组织(研究组)及其癌旁正常结肠黏膜组织(对照组),应用免疫组化染色和Western blot检测两组ARMCX1蛋白的表达,应用实时荧光定量PCR检测两组ARMCX1 mRNA的表达。分析结肠腺癌组织ARMCX1阳性表达与临床病理特征的相关性。随访5年,观察结肠癌患者生存情况。结果研究组ARMCX1阳性表达率高于对照组(53.8%vs.9.2%)(P<0.05)。研究组ARMCX1蛋白和mRNA表达高于对照组(1.15±0.21 vs.0.69±0.19和0.85±0.12 vs.0.72±0.14)(P<0.05)。发生脉管和神经累犯以及有淋巴结转移的结肠腺癌患者癌组织ARMCX1阳性表达率高于未发生者(P<0.05)。增殖指数≥25%的结肠腺癌患者癌组织ARMCX1阳性表达率高于增殖指数<25%者(P<0.05)。随访期间,存活20例,死亡42例,失访3例;死亡患者术后的生存时间为8~60(35.3±8.9)个月。与结肠腺癌组织ARMCX1阴性表达患者相比,阳性表达患者5年生存率低(P<0.05)。结论ARMCX1在结肠腺癌组织中表达增高,可能对病变形成和进展有促进作用。