目的应用小干扰RNA（siRNA）干扰人急性髓系白血病细胞株KG-1细胞SUV39H1（suppressor of variegation 3-9 homolog1）基因的表达，研究SUV39H1基因沉默对KG一1细胞增殖、抑癌基因p15表达及组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响，探寻白血病...目的应用小干扰RNA（siRNA）干扰人急性髓系白血病细胞株KG-1细胞SUV39H1（suppressor of variegation 3-9 homolog1）基因的表达，研究SUV39H1基因沉默对KG一1细胞增殖、抑癌基因p15表达及组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响，探寻白血病基因治疗的新靶点。方法用Lipo．feetamineTM2000将体外合成针对SUV39H1基因的siRNA片段转染到KG-1细胞后，采用RT—PCR方法检测siRNA对SUV39H1mRNA表达的抑制效果，用四唑氮化合物（MTS）法绘制细胞增殖抑制曲线，Westernblot法检测目的基因SUV39H1和抑癌基因p15的表达及对组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响。结果SUV39H1siRNA转染KG-1细胞可沉默该基因；沉默SUV39H1基因表达可抑制细胞增殖，30、60、120、240nmol／LSUV39H1siRNA转染48h后，KG-1细胞的增殖抑制率分别为（23．57±1．98）％、（48．69±1．84）％、（62．69±1．61）％、（81．06±3．22）％，差异有统计学意义（P〈0．05）；沉默SUV39H1基因可上调p15基因的表达，下调组蛋白H3K9三甲基化，上调组蛋白H3K9、H3的乙酰化。30、60、120nmol／LSUV39H1siRNA处理KG-1细胞48h后，组蛋白H3K9三甲基化水平较对照组分别减少25％、33％、49％；组蛋白H3K9乙酰化水平增强，分别为对照组的1．83、2．16、3．07倍；组蛋白H3乙酰化水平逐渐升高为对照组的1．35、1．87、2．37倍；p15表达水平呈递增趋势，分别为对照组的1．52、2．89、3．08倍；而组蛋白H4、H3K14、H3K27的乙酰化水平未见显著变化。结论沉默SUV39H1基因表达可能通过改变抑癌基因启动子区域的组蛋白修饰，即上调组蛋白H3K9乙酰化及下调H3K9甲基化，使p15基因重新表达，从而抑制细胞增殖。展开更多
文摘目的应用小干扰RNA（siRNA）干扰人急性髓系白血病细胞株KG-1细胞SUV39H1（suppressor of variegation 3-9 homolog1）基因的表达，研究SUV39H1基因沉默对KG一1细胞增殖、抑癌基因p15表达及组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响，探寻白血病基因治疗的新靶点。方法用Lipo．feetamineTM2000将体外合成针对SUV39H1基因的siRNA片段转染到KG-1细胞后，采用RT—PCR方法检测siRNA对SUV39H1mRNA表达的抑制效果，用四唑氮化合物（MTS）法绘制细胞增殖抑制曲线，Westernblot法检测目的基因SUV39H1和抑癌基因p15的表达及对组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响。结果SUV39H1siRNA转染KG-1细胞可沉默该基因；沉默SUV39H1基因表达可抑制细胞增殖，30、60、120、240nmol／LSUV39H1siRNA转染48h后，KG-1细胞的增殖抑制率分别为（23．57±1．98）％、（48．69±1．84）％、（62．69±1．61）％、（81．06±3．22）％，差异有统计学意义（P〈0．05）；沉默SUV39H1基因可上调p15基因的表达，下调组蛋白H3K9三甲基化，上调组蛋白H3K9、H3的乙酰化。30、60、120nmol／LSUV39H1siRNA处理KG-1细胞48h后，组蛋白H3K9三甲基化水平较对照组分别减少25％、33％、49％；组蛋白H3K9乙酰化水平增强，分别为对照组的1．83、2．16、3．07倍；组蛋白H3乙酰化水平逐渐升高为对照组的1．35、1．87、2．37倍；p15表达水平呈递增趋势，分别为对照组的1．52、2．89、3．08倍；而组蛋白H4、H3K14、H3K27的乙酰化水平未见显著变化。结论沉默SUV39H1基因表达可能通过改变抑癌基因启动子区域的组蛋白修饰，即上调组蛋白H3K9乙酰化及下调H3K9甲基化，使p15基因重新表达，从而抑制细胞增殖。
