川西獐牙菜SmC4H基因的生物信息学分析和表达分析

由Sm C4H基因编码的肉桂酸-4-羟基化酶是川西獐牙菜苯丙烷途径的关键酶。本研究从川西獐牙菜的转录组数据中获得了SmC4H基因的全长cDNA序列,通过RT-PCR进行该基因的克隆鉴定,利用生物信息学软件对该基因进行预测分析,并通过RT-qPCR检测该基因的组织表达差异和不同胁迫处理条件下的表达情况。生物信息学分析结果显示SmC4H基因c DNA全长1 518 bp,编码505个氨基酸,相对分子质量为51.83 kD,为亲水性较强的不稳定蛋白,二级结构由47.52%α-螺旋、14.06%延伸链、4.95%β-转角和33.47%无规则卷曲构成,预测该蛋白可能不具有跨膜结构,不含有信号肽,属于p450超家族。SmC4H蛋白的相似性与其他植物的C4H蛋白较高,其中与美女樱(Glandularia×hybrida)的相似性最高。RT-qPCR结果显示,SmC4H基因在根、茎、花、叶中均有表达,表达量根>茎>花>叶,硝普钠(SNP)、赤霉素(GA3)和脱落(ABA)在一定程度上能使SmC4H基因的表达上调。此结果为进一步研究该基因在川西獐牙菜苯丙烷途径中的功能和通过基因工程手段提高呫吨酮化合物产量奠定了基础。

川西獐牙菜中抗炎活性组分提取纯化工艺研究

目的:建立川西獐牙菜中环烯醚萜苷抗炎活性组分快速高效的提取纯化工艺。方法:以獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷3种环烯醚萜苷为研究对象,采用响应面法和Box-Behnken优化提取工艺参数。筛选大孔树脂柱填料,对环烯醚萜苷组分进行纯化富集,并进行体外抗炎活性研究。结果:最优提取工艺参数为:提取次数2次,提取时间60 min,液料比46 mL/g,乙醇浓度73%,提取温度50℃;在该条件下3种环烯醚萜苷的得率为0.47%。筛选得到DM301大孔树脂柱富集纯化环烯醚萜苷类化合物,富集的组分中环烯醚萜苷总含量可达62.30%。结论:建立了川西獐牙菜环烯醚萜苷活性组分的最佳提取和分离纯化工艺,提高了活性组分中环烯醚萜苷含量和药材利用率。

川西獐牙菜抑菌活性部位的制备及其谱效关系的分析

目的制备川西獐牙菜的抑菌活性部位并建立其HPLC谱效关系指纹图谱。方法采用三相萃取法制备川西獐牙菜的活性部位,体系1用乙腈-二氯甲烷-石油醚-水(5:1:5:5)、体系2用乙腈-乙酸乙酯-石油醚-水(1:1:2:1)萃取;通过牛津杯法测定各部位的抑菌活性,采用Pearson相关性分析与正交偏最小二乘判别分析研究HPLC指纹图谱的谱效关系。结果川西獐牙菜抑菌活性成分主要富集于体系1、2的中相,6个不同部位共有峰20个,其中,7、12、15、16、19、20号峰与抑菌活性呈显著正相关。结论所用方法可有效富集川西獐牙菜的活性成分,可为川西獐牙菜抑菌活性成分的制备及质量控制与评价提供参考。

川西獐牙菜及其提取物质量标准研究

目的:完善川西獐牙菜药材及其提取物的质量标准。方法:参照2020年版《中华人民共和国药典》四部相关方法,测定川西獐牙菜药材及其提取物中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量,分别采用薄层色谱法和高效液相色谱法进行定性鉴别和含量测定研究。结果:川西獐牙菜药材及其提取物中芒果苷在紫外光灯(254 nm)下检视,能得到较好的分离,荧光斑点清晰;川西獐牙菜药材及其提取物的含量测定结果显示獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷线性关系良好,精密度、稳定性、重复性的RSD值均<5%。结论:本研究建立的标准具有较好的专属性和准确性,可用于川西獐牙菜药材及其提取物的质量控制。