5种免疫增强剂对猪PBMC增殖反应的影响

采用胸腺素、黄芪多糖、人胎盘组织液、人重组白细胞介素 2 ( r IL-2 )及左旋咪唑 ,以不同浓度刺激体外培养不同时间的猪外周血单个核细胞 ( PBMC) ,结果证明这几种佐剂均对猪 PBMC有明显刺激作用 ,且与浓度有依赖关系 ,浓度过高时对其有抑制作用 ,适宜的浓度为 1 0 4倍稀释度。时间因素的影响较小 ,但培养 36h加入各种佐剂后 PBMC增殖反应未见增强。 PBMC代表机体总的细胞免疫水平 ,通过佐剂对体外培养的PBMC增殖反应水平影响的测定 ,为动物用免疫佐剂和免疫增强剂的筛选提供了一种有效方法。

猪外周血单个核细胞增殖反应影响条件的探讨

应用 Ｌ１６ （４５） 正交试验， 对影响猪 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖反应的几个因素， 包括培养时间、 Ｐ Ｈ Ａ 浓度、细胞浓度等三个因素四个水平进行了比较和探索。试验表明几个因素对 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 的增殖反应均有显著的影响（ Ｐ＜ ００５） ， Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖反应的 Ｍ Ｔ Ｔ 比色法的最佳反应条件组合为 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 浓度为１ ×１０６／ｍｌ， 植物血凝素 Ｐ Ｈ Ａ 的浓度为１２５μｇ／ ｍｌ， 细胞培养时间为２４ 小时； 影响增殖反应的先后顺序为 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 浓度、 Ｐ Ｈ Ａｐ 浓度及细胞培养时间。同时确定了最有利于 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖的犊牛血清浓度为１０ ％ 。

猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选

为研究猪瘟病毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA。纯化双链cDNA并与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187,经同源重组构建PBMC cDNA酵母表达文库。以CSFV E2蛋白为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证。结果显示筛选到17个与CSFV E2蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,基因注释(GO)分析表明这些蛋白分别参与免疫、代谢、细胞生长与增殖、生物调节等过程,为研究它们与CSFV E2的相互作用奠定了基础。

小型猪外周血单个核细胞产生IFN-γ频率研究

通过检测不同日龄小型猪外周血单个核细胞产生IFN-γ的频率,探讨小型猪免疫细胞功能的发育时限。分别取2日龄、1月龄、4月龄、10月龄及3周岁小型猪的外周血,提取单个核细胞,进行胞内细胞因子IFN-γ染色,流式细胞仪检测不同日龄小型猪外周血单个核细胞产生IFN-γ的频率。结果显示,2日龄、1月龄、4月龄、10月龄及3周岁小型猪的外周血单个核细胞产生IFN-γ的频率分别为0.85%、1.43%、1.87%、28.76%和29.62%。表明4月龄以下小型猪具有明显的Th2极化倾向,10月龄以上小型猪的免疫细胞功能发育基本成熟。

猪流感病毒毒株感染对猪外周血淋巴细胞炎性因子转录时相的影响

试验用猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）（毒株）体外感染猪外周血淋巴细胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC），利用real—timePCR方法对病毒感染不同时间细胞中的病毒量和炎性细胞因子mRNA表达量进行检测。结果显示，感染后1h就可检测到病毒，但病毒量相对较小；在24h时病毒开始大量增殖；在72h病毒量达到最高峰，为1h时20倍以上。IL-1βmRNA的表达量在48h增加到最高；IL-6mRNA的表达量在感染后1h内显著增加；IL-8mRNA的表达量在12h时达到最大量；IL-12P35mRNA的表达量在72h迅速上升，为对照的56．1倍；IL-12P40mRNA的表达量在1～2h表达量较高；IL-13在72h达到最大值，为对照的30．7倍；IL-17mR—NA的表达量在72h达到最大值，为对照的4．9倍；IL-18mRNA的表达量在12h达到对照的1．9倍。结果表明，SIV感染PBMC后，随着病毒的大量复制，多种炎性细胞因子表达量显著增加。