不同类型细胞对A型肉毒毒素效价检测的可行性分析

目的 分析4种连续细胞和1种人神经元细胞对A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin type A,BoNT/A)效价检测的适用性,为高敏感性BoNT/A细胞检测方法的建立提供依据。方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(quantitative reverse transcriptase chain reaction, qRT-PCR)对4种连续细胞中BoNTs毒性相关蛋白受体和N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor, SNARE)进行定量检测,并用Western blot评估4种连续细胞和1种人神经元细胞对BoNT/A的敏感性。结果 qRT-PCR结果显示,4种连续细胞中除突触囊泡蛋白2B(synaptic vesicle protein 2B,SV2B)不表达或表达量较低外,其他BoNTs相关蛋白受体和SNARE蛋白均有较高的表达。Western blot结果显示,4种连续细胞对BoNT/A的敏感性依次为人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)、大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)、人神经母细胞瘤细胞(SH-5Y5Y)、人神经母细胞瘤细胞[BE(2)-M17]。在SK-N-SH中,孵育0.1 mg/mL的三唾液神经节苷脂GT1b(Trisialoganglioside GT1b, GT1b),5 000 U/mL BoNT/A可切割45%突触小体相关蛋白25(synaptosome-associated protein of 25 000,SNAP25)。Western blot检测发现,1种人神经元细胞对BoNT/A较敏感,在约100 U/mL时达到50%的SNAP25裂解。结论 人神经元细胞敏感性优于其他4种连续细胞,在建立BoNT/A细胞学检测方法中具有一定的潜力。