Synaptotagmin 1基因敲除对小鼠行为的影响

目的:研究Synaptotagmin 1基因敲除(Syt1^(+/-))对小鼠情绪行为的影响并初步探讨其可能机制。方法:选取8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠及同窝野生型(WT)小鼠各5只,采用免疫荧光染色方法观察小鼠前额叶皮层、海马、杏仁核、伏隔核、纹状体和腹侧被盖区等6个脑区中Syt1的表达;选用8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠9只,以及WT小鼠10只为对照,通过旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验检测比较成年Syt1^(+/-)小鼠和WT小鼠的焦虑样行为;另选用8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠及WT小鼠各5只,检测小鼠前额叶皮层、海马和杏仁核的谷氨酸含量。结果:与WT小鼠相比,Syt1^(+/-)小鼠在前额叶皮层、海马、杏仁核、伏隔核、纹状体和腹侧被盖区Syt1阳性细胞数目显著减少(P<0.01);Syt1^(+/-)小鼠在旷场中总移动距离显著减少(P<0.01),并更偏爱在外周区域活动(P<0.01),对中心区域的探索欲望显著下降(P<0.01);Syt1^(+/-)小鼠更偏好待在封闭安全环境中(P<0.01),开臂探索次数(P<0.05)和在其中运动的时间显著减少(P<0.01);Syt1^(+/-)小鼠在强迫游泳实验中不动时间明显增加(P<0.01);同时,Syt1^(+/-)小鼠杏仁核中谷氨酸的含量显著增加(P<0.01)。结论:Syt1基因敲除可以引起小鼠显著的焦虑样行为,推测与杏仁核中谷氨酸含量增加有关。

Synaptotagmin 1在成年期甲减大鼠海马内表达变化及甲状腺素治疗效应

目的研究成年期甲状腺功能减退症(甲减)大鼠海马突触小体内突触结合蛋白1(syt1)的表达量及甲状腺素替代治疗后的恢复状况,探讨甲减脑损伤及恢复的分子基础。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)建立成年期大鼠甲减模型,采用Western blot方法分析甲减组、小剂量甲状腺素替代治疗组、大剂量甲状腺素替代治疗组、正常对照组大鼠海马内syt1的表达情况。结果甲减组大鼠血清T3、T4水平显著低于正常对照组(P<0.05);背侧海马突触小体内syt1的蛋白表达水平显著低于正常对照组(P<0.05)。小剂量甲状腺素替代治疗后,血清T3、T4恢复至正常水平;syt1蛋白表达水平与甲减组比较未见明显改变(P>0.05)。经大剂量替代治疗后血清T3、T4高于正常;syt1的蛋白表达恢复到正常水平(P<0.05)。结论成年期甲减大鼠海马内syt1蛋白表达降低,甲状腺素治疗能使其恢复,且恢复的程度与甲状腺素的治疗剂量有关,大剂量替代治疗较小剂量效果好。

青春期双酚A暴露对老年CD-1小鼠海马齿状回Synaptotagmin 1含量的影响

探讨青春期双酚A暴露对老年期齿状回Synaptotagmin 1(Syt 1)含量的影响。结果显示,18月龄CD-1小鼠齿状回Syt 1相对含量显著高于6月龄小鼠(Ps<0.05);青春期双酚A暴露高剂量小鼠齿状回Syt 1表达量显著高于同年龄对照小鼠(Ps<0.05),雌鼠更明显。这些结果进一步支持小鼠海马Syt 1呈年龄相关性增加的结论,青春期双酚A暴露可加剧这种增加。

低甲状腺素血症对发育期大鼠行为及海马synaptotagmin 1表达的影响

目的研究低甲状腺素血症对发育期大鼠行为及海马内突触结合蛋白1(synaptotagmin 1,syt1)表达量的影响。方法双侧甲状腺切除1日龄(P1)SD新生大鼠建立低甲状腺素血症模型,SD大鼠数字表法分成两组:假手术对照(control,C)组(n=36)和低甲状腺素血症(hypothyroxinemia,HT)组(n=36)。观察大鼠体重变化,P32行高架十字迷宫实验,P34～39行Mor-ris水迷宫实验。检测P10、21、40大鼠甲状腺功能及海马syt1的表达量。结果与C组比较,HT组大鼠体重增长缓慢(P<0.01);HT组大鼠高架十字迷宫进入臂总次数和开臂次数增多(P<0.05),闭臂时间减少(P<0.01);Morris水迷宫实验逃避潜伏期明显延长(P<0.05);HT组P10、21大鼠海马syt1表达量显著增加(P<0.01),P40大鼠海马syt1表达量减少(P<0.05)。结论发育期低甲状腺素血症导致大鼠情感及学习能力改变,并影响其海马syt1的表达量。

Synaptotagmin1影响小鼠卵母细胞减数分裂和皮质反应的研究

目的探讨Synaptotagmin1(Syt1)对小鼠卵母细胞减数分裂过程和皮质反应的影响。方法免疫印迹检测Syt1在小鼠卵母细胞的表达;免疫荧光分析Syt1在卵母细胞中定位以及对减数分裂过程的影响;活细胞实时拍摄系统观察皮质反应以及纺锤体、染色体在降调Syt1表达的动态变化。结果 (1)Syt1和小鼠卵母细胞皮质颗粒完全共定位;(2)降调Syt1表达,小鼠卵母细胞减数分裂进程受到阻碍;(3)活细胞实时拍摄系统证实了降调Syt1会影响中后期转换、第一极体释放以及进一步的皮质反应。结论 Syt1参与调控卵母细胞的减数分裂的成熟过程和皮质反应的发生。

Synaptotagmin1在小鼠卵母细胞体外受精过程中的作用

目的探讨小鼠受精时卵母细胞皮质颗粒胞吐的动态变化以及Synaptotagmin1(Syt1)对小鼠受精过程的影响。方法活细胞实时拍摄系统观察小鼠卵母细胞受精时皮质颗粒发生胞吐的动态变化特点。利用Syt1-Morpholino干扰方法,并设立对照,采用免疫荧光、Western blot和q RT-PCR方法分析Syt1在小鼠受精和不同时期受精卵中的作用,并统计分析Syt1对小鼠受精率的影响。结果活细胞实时拍摄系统成功显示了小鼠皮质颗粒胞吐的动态过程,未发现胞吐位置与纺锤体和染色体位置之间存在明确的位点关系,但是部分位置在卵母细胞极体附近。Syt1在小鼠受精后30 min^24 h不同时期受精卵中的表达量逐渐增加。Syt1表达降调后影响了小鼠受精及皮质颗粒分布,降低了小鼠受精率。结论用活细胞实时拍摄系统动态观察了小鼠皮质颗粒受精时胞吐的动态变化,Syt1直接参与了小鼠卵母细胞的受精过程。

Synaptotagmin1影响小鼠卵母细胞纺锤体组装和稳定

目的:确定Synaptotagmin1(Syt1)对小鼠卵细胞纺锤体组装和稳定的影响。方法:免疫荧光法检测Syt1在小鼠卵母细胞发育不同时期的亚细胞定位。用紫杉醇处理小鼠MⅠ期卵母细胞,明确Syt1与微管动力的关系。注射Syt1特定的寡聚核苷酸降调卵母细胞中Syt1的表达,免疫荧光法检测Syt1降调后卵母细胞纺锤体的形态变化、染色体异常以及中心体蛋白γ-tubulin定位变化。结果:Syt1在卵母细胞减数分裂成熟的不同发育阶段都有表达,主要集中分布皮质区和MⅠ和MⅡ期纺锤体的两极。Syt1在MⅠ和MⅡ期与中心体相关蛋白γ-tubulin共定位。紫杉醇实验发现Syt1集中定位于星体和高度集中的微管两极。降调Syt1表达后,染色体排列紊乱,纺锤体组装异常比例升高,且大多数为无极、单极或者多级纺锤体,其次有拉长纺锤体和形态各异纺锤体。并影响微管组织中心相关蛋白γ-tubulin的正确定位。结论:Syt1可能作为一种微管组织中心相关蛋白调节纺锤体的组装稳定。

甲状腺素联合多奈哌齐对甲减大鼠乙酰胆碱酯酶活性、乙酰胆碱含量和synaptotagmin-1表达的影响

目的探讨甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲状腺功能减退模型SD大鼠的海马乙酰胆碱酯酶活性及乙酰胆碱含量和突触结合蛋白(Syt-1)表达的影响。方法将成年SD大鼠随机分为正常对照组、甲状腺功能减退组(甲减组)、单独甲状腺素治疗组和甲状腺素联合多奈哌齐治疗组(联合治疗组),每组10只。采用色度法测定各组大鼠海马乙酰胆碱酯酶活性和乙酰胆碱含量,并应用免疫组织化学法检测大鼠海马不同亚层Syt-1表达。结果与正常对照组相比,甲减组大鼠海马CA1、CA3和齿状回区乙酰胆碱酯酶活性、乙酰胆碱含量及Syt-1表达显著降低(P<0.05)。单独甲状腺素治疗组大鼠海马乙酰胆碱酯酶活性和乙酰胆碱含量恢复正常,但Syt-1蛋白表达未恢复。联合治疗组大鼠海马乙酰胆碱含量和Syt-1表达均恢复至正常。结论甲减可引起脑内乙酰胆碱酯酶活性、乙酰胆碱含量及Syt-1表达下降,甲状腺激素单独治疗对上述损伤有改善作用,但联合多奈哌齐治疗效果可能更好。

甲状腺素和多奈哌齐对甲状腺功能减退症大鼠前额叶synaptotagmin-1表达的影响

目的研究甲状腺功能减退症(甲减)大鼠前额叶突触结合蛋白-1(syt-1)的表达及甲状腺素(T4)和多奈哌齐(DON)治疗效果。方法通过饮用0.05%丙基硫氧嘧啶(PTU)水建立甲减大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照(CON)组、甲减(Hypo)组、DON治疗组、T4治疗组、联合治疗(T4+DON)组。放射免疫法测定血清甲状腺激素水平,Western blot和超敏免疫组化法分别分析各组大鼠前额叶syt-1表达及免疫反应产物分布情况。结果 Hypo组、DON组大鼠血清甲状腺激素较CON组明显降低(P<0.05),T4组、T4+DON组血清甲状腺激素恢复至正常水平;Western blot结果显示Hypo组、DON组及T4组大鼠前额叶syt-1表达均高于CON组(P<0.05),T4+DON组syt-1表达恢复正常;超敏免疫组化结果经光镜可见syt-1免疫反应产物呈棕黄色颗粒,广泛分布在大鼠前额叶分子层、外颗粒层、外锥体细胞层、内颗粒层、内锥体细胞层,Hypo组、DON及T4组在各层分布均高于CON组(P<0.05),T4+DON组在各层分布均恢复至正常。结论 Hypo组大鼠较CON组大鼠前额叶syt-1表达升高,T4替代治疗未能使损伤蛋白完全恢复,T4+DON治疗后蛋白恢复至正常水平,提示联合治疗更有利于甲减脑区损伤蛋白的恢复。

甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲减大鼠海马内超微结构及synaptotagmin-1表达的影响

目的观察甲状腺素(T4)联合多奈哌齐(DON)治疗对成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠海马内超微结构及突触结合蛋白synaptotagmin-1(syt-1)表达的影响。方法饮0.05%丙基硫氧嘧啶(PTU)水建立成年期大鼠甲减模型共6周,第5周起,T4治疗组给予腹腔注射T4 6μg/100g体重、DON治疗组饮0.005%DON水,联合治疗组给予T4+DON治疗,对照组及甲减组每日腹腔注射等量生理盐水。采用放射免疫法测定血清甲状腺素水平,透射电镜观察海马内超微结构,Western blot方法分析海马内syt-1的表达水平。结果甲减组、DON治疗组大鼠血清甲状腺激素水平明显降低(P<0.01),T4治疗组、联合治疗组与对照组差异无统计学意义;电镜下甲减大鼠海马内神经元中线粒体呈现明显空泡变性、游离核糖体稀疏、突触结构受损、突触小泡数量减少,T4或DON治疗后上述损伤有所改善,而联合治疗恢复后表现最接近对照组;甲减大鼠海马内syt-1蛋白表达量明显降低(P<0.01),单独T4或DON治疗后表达仍下降(P<0.05),联合治疗后syt-1表达恢复正常。结论成年期甲减可致大鼠海马内超微结构发生病理学损害,syt-1蛋白表达下降,T4+DON治疗有利于上述损伤的修复,作用优于单一药物治疗。

成年期甲减大鼠海马Synaptotagm in 1改变及甲状腺素的治疗效应

观察成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠海马突触蛋白synaptotagmin 1(syt 1)改变及替代治疗和冲击治疗的影响。结果显示,甲减大鼠血清T3及海马CA1、CA3区和齿状回(dentate gyrus,DG)syt 1水平显著性降低,替代治疗后血清T3恢复正常,但syt 1水平仅DG分子层显著性增加,而经冲击治疗后血清T3、T4高于正常,海马CA1区和DG区各层及CA3区锥体细胞层syt 1的水平几乎均恢复正常。这些结果提示,成年期甲减可致海马内syt 1蛋白表达减少,甲状腺素治疗能使其恢复,短期冲击治疗较替代治疗效果好。

敲减突触结合蛋白1通过抑制 IL-6/STAT3信号通路改善结肠炎病变

突触结合蛋白1 (synaptotagmin 1,Syt1)属于突触结合蛋白家族一员,在神经递质囊泡转运和胞吐中发挥作用。Syt1在肠道上皮中有表达,但其在结肠炎中的生物学功能尚不明确。本工作以Syt1转基因小鼠结合葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导型溃疡性结肠炎模型,通过qRT-PCR、免疫染色及Western印迹检测Syt1在生理状态及肠炎状态下在结肠中表达的动态变化;采用H&E染色、免疫染色、Western印迹等方法,观察Syt1在结肠炎的炎症反应及肠道上皮再生修复中的作用。结果显示:正常野生小鼠的结肠上皮及结直肠癌患者癌旁组织的肠上皮细胞中均有较高水平的Syt1表达;DSS处理使Syt1在结肠中表达显著升高(P<0.01)。DSS诱导小鼠肠炎模型中,相较于对照组,Syt1敲减小鼠体重降低情况、结肠炎性红肿和长度缩短等均显著减轻(P<0.05),而再生隐窝数量则增多、Ki67增殖细胞也增多(P<0.01);结肠组织中的CD45免疫细胞、F4/80巨噬细胞浸润减少(P<0.001),炎症性肠病相关的促炎因子IL-1β、IL-6和TNFα分泌也减少(P<0.05)。免疫组化及Western印迹结果进一步显示,Syt1敲减小鼠中,IL-6和p-STAT3表达显著下调(P<0.05)。以上研究结果表明,敲减Syt1可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路改善结肠炎病变程度。

突触结合蛋白1在神经病理性疼痛小鼠前扣带回表达的变化

目的探讨突触结合蛋白1（synaptotagmin 1，Syt1）在神经病理性疼痛小鼠前扣带回表达的变化及与痛行为的关系。方法将20～25 g的小鼠随机分为4组：假手术（Sham）＋Syt1抗体（Syt1-Ab）组，Sham＋对照抗体（Con-IgG）组，坐骨神经结扎（CCI）＋Syt1-Ab组，CCI＋Con-IgG组。在CCI第7天给每组小鼠前扣带回立体定位注射相应药物（0.1 μg/0.5 μl），按Hargreaves法用热辐射刺激仪测定小鼠热痛的变化，用电子测痛仪测定小鼠机械痛缩足阈值的变化，免疫印迹法检测各组小鼠前扣带回Syt1的表达。结果免疫印迹显示神经病理性疼痛小鼠前扣带回Syt1表达明显升高，在神经病理性疼痛小鼠前扣带回立体定位注射Syt1-Ab可明显改善痛行为。结论神经病理性疼痛小鼠前扣带回Syt1表达显著升高，在神经病理性疼痛小鼠前扣带回立体定位注射Syt1-Ab可缓解疼痛。

Syntaxin-1蛋白的多重功能(英文)

Syntaxin-1是特异性地分布在神经细胞突触前质膜上的蛋白。它早期被作为分子量为35 kD的synaptotagmin-1结合蛋白,但很快就被认识到是细胞质膜融合的关键蛋白。Syntaxin-1通过与SNAP25和Synaptobrevin/VAMP蛋白聚合,进而形成被认为是神经突触囊泡融合必要因子的SNARE核心复合体。作为一个多结构域的蛋白,syntaxin-1与多个突触蛋白相互作用,其作用远超出了仅作为SNARE核心复合体中一个蛋白质成员的作用。本文着重介绍了有关syntaxin-1与其它SNARE组份蛋白、munc18蛋白和钙离子通道的相互作用及其功能的最新研究进展。全面揭示syntaxin-1作为SNARE核心复合体成员的功能以及超越这一功能的作用,还有待于对其结构以及与其它突触蛋白相互作用特性的进一步深刻理解。

清心开窍方3种提取部位改善阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的机制研究

目的探讨清心开窍方3种提取部位(皂苷成分、挥发油成分、多糖成分)改善阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆能力及其机制研究。方法动物实验采用对照观察法。雄性SD大鼠56只,称体重后按随机数字表法分为7组:正常组、假手术组、模型组、安理申组、皂苷组、挥发油组及多糖组,每组8只。采用双侧海马注射Aβ1-402μL(2.5μg/μL)制备AD大鼠模型,造模后第2天开始灌胃,连续灌胃2周(每天上午10:00开始),皂苷组、挥发油组、多糖组剂量分别为9 m L/(kg·d)(2.1 g/m L)、3.33m L/(kg·d)(5.7 g/m L)、8.33 m L/(kg·d)(2.28 g/m L),安理申组给药剂量为1.67 mg/(kg·d),对照组和模型组予等体积生理盐水。2周后,采用水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,采用免疫组化法检测AD大鼠皮层及海马区突触结合蛋白-1(Syt-1)、白介素-1β(IL-1β)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-APP)表达。结果清心开窍方3种提取部位能改善AD大鼠学习记忆能力;定位航行试验(逃避潜伏期),多糖组大鼠逃避潜伏期与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05),其余治疗组大鼠逃避潜伏期均缩短(P<0.05);与安理申组比较,各有效成分组大鼠逃避潜伏期均延长(P<0.05,P<0.01)。空间搜索试验(穿台次数),与模型组比较,安理申组及皂苷组大鼠平均穿台次数显著增加(P<0.05);与安理申组比较,有效成分组大鼠平均穿台次数显著减少(P<0.01)。与假手术组比较,模型组皮层及海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,皂苷组、挥发油组皮层Syt-1表达增加,挥发油组、多糖组皮层IL-1β表达增加,3种提取部位组海马区GFAP表达增加(P<0.05,P<0.01),其余治疗组皮层及海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与安理申组比较,皂苷组、挥发油组、多糖组皮层与海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方3种提取部位可能是通过降低大鼠皮层及海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达发挥抗AD的作用。

昆明小鼠学习记忆能力的年龄效应及其与海马突触囊泡蛋白的相关性

为了探讨昆明小鼠(Mus musculus)年龄相关性空间学习记忆能力改变及其与海马突触前囊泡蛋白1(synaptotagmin 1,SytⅠ)含量之间的关系。选取3个年龄段的昆明小鼠,①青年组:6月龄,28只;②中年组:11月龄,22只;③老年组:22月龄,17只。利用六臂辐射状水迷宫(RAWM)任务检测其空间学习记忆能力;制作组织微阵列,采用免疫组化技术检测SytⅠ在海马中的的表达;采用方差分析方法对六臂辐射状水迷宫实验参数和SytⅠ的相对含量进行统计学分析,使用Spearman秩相关检测这二者之间的相关性。结果发现,老年组昆明小鼠在学习期及记忆期的平均错误数及潜伏期均高于中年和青年鼠(P<0.05),中年昆明小鼠与青年鼠之间的差异不显著(P>0.05);老年组昆明小鼠在海马CA3区及齿状回(dentate gyrus,DG区)中SytⅠ的相对含量显著高于中年鼠和青年鼠(P<0.05);昆明小鼠海马CA3、DG区SytⅠ的相对含量与学习期和记忆期的错误数及潜伏期均成正相关(P<0.05)。由此推断,昆明小鼠可出现年龄相关性空间学习记忆能力降低,其海马CA3和DG的SytⅠ相对含量出现年龄相关性升高,海马SytⅠ升高可能与昆明小鼠年龄相关性空间学习记忆能力减退有关。