雷公藤红素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中RANKL、OPG及炎性因子表达的影响

目的:观察雷公藤红素(Celastrol,Cel)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A细胞中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-8(IL-8)表达的影响。方法:以白细胞介素-1β(IL-1β)刺激MH7A,不同浓度的Cel(0.1、0.5、1.0、2.0μmol/L)干预细胞24 h后,采用real-time PCR和免疫荧光的方法检测RANKL、OPG、IL-6、TNF-α及IL-8的表达。结果:IL-1β刺激MH7A细胞系24 h后,RANKL、OPG、IL-6、TNF-α及IL-8mRNA及RANKL免疫荧光明显增强,Cel呈剂量依赖性抑制MH7A中IL-1β诱导的RANKL、OPG、IL-6、TNF-α及IL-8 mRNA水平(P<0.05)和MH7A中RANKL免疫荧光表达,显著上调OPG/RANKL轴比值。结论:Cel能调节滑膜成纤维细胞中OPG/RANKL轴和抑制促炎因子、趋化因子的表达,可能在阻止类风湿关节炎"炎症"和"骨侵蚀"中发挥重要作用。

CIA大鼠滑膜成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的建立胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠滑膜成纤维细胞的培养方法并观察细胞生物学特点。方法收集CIA和正常大鼠的膝关节滑膜组织,采用组织块贴壁法培养滑膜成纤维细胞,观察细胞游出、生长情况;HE染色观察细胞形态;免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度;Masson染色观察细胞分泌胶原蛋白情况;CCK-8法检测细胞增殖情况。结果倒置显微镜及HE染色观察细胞形态及生长特征符合滑膜成纤维细胞,且98%以上的细胞表达Vimentin蛋白。模型组滑膜成纤维细胞较正常组细胞游出时间早且细胞量多;模型组细胞分泌胶原蛋白能力及细胞增殖能力较正常组强。结论本研究确立了CIA大鼠滑膜成纤维细胞原代培养体系,并且证实CIA大鼠滑膜成纤维细胞增殖与分泌功能较正常滑膜成纤维细胞强。

人骨关节炎滑膜成纤维细胞差异蛋白质谱初步分析

目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在骨关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度(immob ilized pH grad ient,IPG)双向凝胶电泳(two-d imensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest2-DE软件分析图像,比较2种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定。结果胶图差异分析显示36个表达水平存在明显差异的蛋白质,选取15个点进行质谱鉴定,鉴定出6个表达上调蛋白质。结论正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异。这些差异蛋白可能参与骨关节炎的发病。

丙酮酸乙酯对类风湿性关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖的影响

目的探讨丙酮酸乙酯对滑膜成纤维细胞增殖的影响。方法收集胶原诱导的关节炎大鼠(collagen induced arthritis,CIA)和正常大鼠滑膜组织,培养滑膜成纤维细胞。光镜及免疫荧光法检测Vimentin蛋白鉴定滑膜成纤维细胞;分别用1、2、5、10、20 mmol/L浓度的丙酮酸乙酯作用于滑膜成纤维细胞;流式细胞术及CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显微镜观察细胞形态特征符合滑膜成纤维细胞,且Vimentin蛋白表达阳性;5种剂量的丙酮酸乙酯均能抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,但是未见明显剂量依赖效应,以5 mmol/L剂量组作用效果最为明显。结论丙酮酸乙酯能够抑制滑膜成纤维细胞增殖同时促进其凋亡,且以5 mmol/L剂量组作用最为明显。

周期性牵张应力对IL-1β刺激的人膝骨关节滑膜成纤维细胞MMPs mRNA表达的影响

目的观察周期性牵张应力对IL-1β刺激的人膝骨关节滑膜成纤维细胞基质金属蛋白酶(MMP1、MMP3及MMP13)mRNA表达的影响。方法取第四代的人膝骨关节滑膜成纤维细胞,以每孔4×105接种于由Ⅰ型胶原蛋白包被超薄弹性硅胶膜表面的6孔Bio Flex细胞培养板,分为空白组(常规培养)、对照组(加入终浓度为10μg/L的IL-1β刺激)和牵张组(加入终浓度为10μg/L的IL-1β刺激,同时采用Flexcell细胞牵张拉伸应力加载系统对细胞进行周期性牵张力刺激),均连续干预3天;各组于牵张组实验结束后收集细胞,抽提滑膜细胞RNA,采用RT-PCR法检测细胞MMP1、MMP3和MMP13 mRNA的表达情况。结果与空白组比较,对照组MMP1、MMP3及MMP13 mRNA表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,牵张组MMP1、MMP13 mRNA表达量明显下降(P<0.05),MMP3 mRNA水平下降幅度不明显(P>0.05)。结论周期性牵张应力(幅度为0-12%,频率为1 Hz,加载时间为60 min/d)能抑制人膝骨关节滑膜成纤维细胞MMP1、MMP13 mRNA的表达,从而对关节滑膜炎引起的软骨损伤起到保护作用。

雷公藤单体T_4对IL-1刺激引起的类风湿患者关节滑膜成纤维细胞增殖和产生IL-6的影响

目的 探讨雷公藤单体 T4对经 IL- 1刺激的体外培养的类风湿关节炎 (RA)患者的关节滑膜成纤维细胞增殖和产生 IL- 6的影响。方法 关节滑膜组织来自行关节置换术或滑膜切除术的类风湿患者。滑膜组织经体外消化使细胞分散后 ,传代培养。以培养 3代后的滑膜成纤维细胞为对象 ,先给予 IL- 1刺激 ,再加入雷公藤 T4单体。结果 T4可抑制由 IL- 1刺激的滑膜成纤维增殖 ,但不影响 IL- 6的产生。结论 T4的上述作用可能是其治疗RA的机制之一 ,本研究结果为 T4早日应用于临床治疗

GANT61通过减缓滑膜细胞增殖抑制Balb/c小鼠关节炎发展

目的探讨GANT61对小鼠关节炎的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为3组:正常对照组、胶原诱导的关节炎(CIA)组和GANT61组。CIA组和GANT61组运用牛Ⅱ型胶原诱发小鼠关节炎模型,GANT61组于二次免疫后第0、3、6、9、12、15、18、21天尾静脉注射GANT61。同时观察四肢关节及脚掌情况,并进行临床评分。于初免后第39天,处死小鼠,收集外周血及血清,检测中性粒细胞及细胞因子变化,收集一侧关节,病理学检查,收集另一侧关节滑膜组织,培养滑膜成纤维细胞。流式细胞术及CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 GANT61能够减轻关节肿胀程度,降低关节临床评分,同时关节炎症细胞浸润程度降低。中性粒细胞数量降低,细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量也低于CIA组。滑膜细胞增殖程度降低,凋亡数量增加。结论 GANT61能够通过抑制滑膜细胞增殖,减轻Balb/c小鼠关节炎病理进程。

胭脂枝叶中化学成分及其抑制滑膜成纤维细胞增殖活性研究

综合运用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及制备型HPLC等多种色谱分离技术对桑科波罗蜜属植物胭脂Artocarpus tonkinensis枝叶中的化学成分进行系统研究。根据分离得到化合物的波谱数据和理化性质,并通过与文献中已经报道的相应化合物的波谱数据和理化性质进行对比,鉴定了从胭脂枝叶的90%乙醇提取物中分离得到的11个化合物,分别鉴定为artocatonkine(1)、5,6,7,4′-四甲氧基黄酮(2)、芹菜素-4′-O-β-D-葡萄糖苷(3)、rayalinol(4)、psorachalcone A(5)、4-ketopinoresinol(6)、ficusesquilignan B(7)、pinnatifidanin AI(8)、pinnatifidanin A(9)、O-methylmellein(10)、trans-4-hydroxymellein(11)。其中化合物1为1个新异戊烯基取代黄酮,化合物2~11为首次从胭脂属植物中分离得到。此外,为了评价化合物1~11的抗类风湿性关节炎活性,采用MTS法对分离得到的化合物1~11的体外抑制滑膜细胞增殖的活性进行了测定。活性评价结果表明黄酮类化合物1~3、5以及木脂素类化合物8、9表现出了较为显著的抗类风湿性关节炎活性,它们对MH7A滑膜成纤维细胞增殖抑制活性的IC_(50)为(6.38±0.06)^(168.58±0.28)μmol·L^(-1)。

桂皮醛对人膝骨关节炎滑膜成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨不同浓度桂皮醛对人膝关节骨性关节炎（KOA）滑膜成纤维细胞的影响。方法：关节镜术中取KOA患者验证滑膜组织用I型胶原酶消化后进行原代培养，取传代3～5代的滑膜成纤维细胞进行不同浓度桂皮醛药物干预。应用四唑盐（MTT）法检测KOA滑膜细胞的增殖水平。结果：中高浓度桂皮醛作用24、48和72h，能明显抑制人KOA滑膜成纤维细胞的增殖（P〈O．05），且呈时间、剂量依赖性。结论：中高浓度桂皮醛能明显抑制KOA炎性滑膜细胞的增殖活性而较低浓度桂皮醛能促进KOA炎性滑膜细胞的增殖。