类风湿性关节炎患者关节滑膜液浸润的T细胞表达特性

目的 :为研究类风湿性关节炎 (RA)患者关节滑膜液浸润的淋巴细胞介导自身免疫病的特性 ,分析了 2 2例RA患者滑膜液中淋巴细胞的免疫表型、对II型胶原的反应频率及IL 10、IL 12的分泌格局。方法 :用流式细胞术分别测定滑膜液和外周血淋巴细胞表型 ,并采用国际标准半有限稀释法分析了关节滑膜液中浸润的淋巴细胞对II型胶原 (CII)的反应频率 ,同时用ELISA方法检测了滑膜液与外周血中IL 10与IL 12含量。结果 :滑膜液中的T淋巴细胞的表型分别为CD4 (39 6 %±10 5 % )和CD8细胞 (36 4 %± 16 4 % ) ,CD4 CD8细胞比值显著低于外周血 ,且同时表达CD16和CD5 6的活化NK细胞占15 5 %± 11 1%。T细胞受体谱取用表明仍以αβTCR为主 (6 9 6 %± 15 7% )。有意义的是 :滑膜液中的T细胞对CII的反应频率为 15 2× 10 - 6 ,远远高于外周血 (4 0× 10 - 6 )。IL 12含量为 (4 19 9± 89 2 )pg ml,IL 10含量为 (187 7± 34 5 )pg ml,与外周血中这 2种细胞因子的含量〔分别为IL 12 :(6 5 32± 34 2 )pg ml和IL 10 :(85± 12 7)pg ml〕比较 ,具有显著的统计学差异。结论 :上述实验结果表明这种具有表达特性的浸润T细胞介导了RA患者关节滑膜组织的免疫损伤。

大骨节病和骨性关节炎患者滑膜白介素-1β和肿瘤坏死因子-α的比较

目的比较大骨节病(KBD)和骨性关节炎(OA)关节滑膜和滑液中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,探讨两种病的发病机制。方法分别收集大骨节病和骨性关节炎患者关节滑膜和滑液20例和18例,以单纯半月板损伤患者的关节滑膜和滑液19例为对照;采用免疫组织化学染色法,观察大骨节病、骨性关节和半月板患者关节滑膜IL-1β和TNF-α阳性表达强度;采用ELISA法检测三种滑液标本IL-1β和TNF-α的水平。结果TNF-α在KBD和OA滑膜组织中的表达与对照组相比有显著性差异(P<0.05);IL-1β在KBD和OA滑膜组织中的表达与对照组相比也有显著性差异(P<0.01);IL-1β和TNF-α在KBD滑膜组织中的表达与OA相比无显著性差异(P>0.05)。TNF-α和IL-1β在KBD和OA滑液中的水平与对照组相比均有显著性差异(P<0.05);IL-1β和TNF-α在KBD滑液中的水平与OA相比均无显著性差异(P>0.05)。结论IL-1β和TNF-α可能在KBD和OA发生发展中扮演着重要的角色。

类风湿性关节炎患者滑膜液中IL-10、IL-12和sFasL含量的检测

为了研究细胞因子和凋亡分子在类风湿性关节炎(RA)发病中的作用,用ELISA法分析了26例RA患者滑膜液和血清中IL-12、IL-10和可溶性FasL(sFasL)的含量。结果表明RA患者滑膜液中IL-12、IL-10含量分别为(419.9±89.2)pg/ml和(187.7±34.5)pg/ml,外周血中这两种细胞因子的含量均较低,分别为(65.3±34.2)pg/ml(IL-12)和(85.0±12.7)pg/ml(IL-10)。滑膜液中sFasL的含量为266pg/ml,明显高于血清含量(36pg/ml)。这一结果提示,RA患者滑膜液中IL-12含量和sFasL增高,这些炎性细胞因子增高可能参与了关节滑膜中的自身反应性T细胞的活化,继而造成免疫损伤。

皮下滑膜囊动物模型的建立及其生物学特性实验研究

目的 建立动物皮下滑液囊模型 ,研究其功能结构特点 ,探讨形成的可能机制。方法 在兔皮下埋置硅胶气囊 ,经扩张按摩刺激 ,逐渐形成包裹囊腔 ,通过对大体形态、组织学和超微结构、细胞表型、UDPGD功能性酶以及滑囊液HA浓度的研究 ,与正常滑膜囊比较。结果 术后 2周时 ,皮下形成“滑囊腔”结构 ,肉眼见囊腔内表面光滑 ,扫描电镜见囊壁内表面有微绒毛结构 ,囊壁表层有A、B型细胞的超微结构特征 ;细胞分别表达CD68、VCAM 1和UDPGDmRNA ,囊壁表层UDPGD酶活性高于深部 (P <0 .0 1) ;囊内液体清亮透明 ,未发现细胞成分 ,透明质酸近似浓度 160ng ml,高于血清水平 (P<0 .0 1)而接近关节滑液 (P >0 .0 5 )。结论 皮下形成的滑囊腔模型 ,其功能结构在一定程度上类似关节滑囊腔 ,囊壁表层细胞具有滑膜细胞的表型特征。

类风湿性关节炎患者抗胶原蛋白Ⅱ抗体及其自身反应性T淋巴细胞的检测

目的:分析类风湿性关节炎(RA)患者T淋巴细胞免疫应答及抗胶原蛋白Ⅱ(CⅡ)抗体的异常表现。方法:应用流式细胞仪分析22例RA及6例骨关节炎(OA)患者外周血和关节滑膜液(SF)中T淋巴细胞免疫表型和趋化因子受体的表达。选用HSP-65和胶原蛋白Ⅱ(CⅡ)抗原诱导和分析患者自身反应性T淋巴细胞克隆频率,采用经典的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者外周血和SF中抗CⅡ抗体以及IFN-γ、IL-10、IL-4和IL-12的含量。结果:RA患者关节SF中CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值为1.09,显著低于外周血中CD4+/CD8+T淋巴细胞比值(2.02);SF中CD3+/CD25+双阳性的活化T淋巴细胞占(15.9±9.6)%。SF中T淋巴细胞表面趋化因子受体CCR5表达较低,与外周血相比无统计学意义,但趋化因子受体CD25+/CXCR3+表达量较高,为(16.0±4.0)%,远远高于外周血T淋巴细胞[仅为(0.5±0.3)%](P<0.01)。ELISA检测结果表明RA患者关节SF中抗CⅡ抗体阳性率明显高于其血清以及OA患者SF和血清;RA患者SF中IFN-γ、IL-12的含量高于外周血。来自RA患者病灶关节SF单个核细胞(SFMC)较外周血单个核细胞(PBMC)对HSP-65抗原和CⅡ的诱导具有更高的自身反应性T淋巴细胞应答频率(分别为8.5×10-6和11.5×10-6)。结论:RA患者关节SF中存在高活化状态的T淋巴细胞,其对CⅡ的高克隆反应频率以及SF中高表达抗CⅡ抗体,均提示自身反应性T淋巴细胞的浸润是造成患者病灶区组织损伤的关键因素。

膝骨性关节炎患者滑膜和滑液中基质金属蛋白酶-3表达水平的研究

目的比较骨性关节炎和半月板损伤患者关节滑膜和滑液中基质金属蛋白酶-3的表达,探讨OA的发病机制。方法收集骨性关节炎患者关节滑膜和滑液43例,以单纯半月板损伤患者的关节滑膜和滑液45例为对照;采用免疫组织化学染色法,观察骨性关节和半月板损伤患者关节滑膜MMP-3阳性表达强度;采用ELISA法检测两种滑液标本基质金属蛋白酶-3的水平。结果MMP-3在OA滑膜组织中的表达与对照组相比差异有统计学意义(P(0.01);MMP-3在OA滑液中的水平与对照组相比差异也有统计学意义(P(0.05);MMP-3在OAX线分级为I度的关节滑膜和滑液中的表达和II度相比无统计学意义(P>0.05)。结论MMP-3在OA发生发展中扮演着重要的角色。

膝骨关节炎关节液和滑膜中微小RNA-140-5p的表达及临床意义

目的研究膝骨关节炎(KOA)病人关节液和滑膜中微小RNA(miR)-140-5p的表达及临床意义。方法选取2018年5月至2019年5月于北京中医药大学东方医院就诊的51例KOA病人为观察组,依据凯尔格伦-劳伦斯(K-L)分级标准将观察组分为3个亚组:KOAⅡ组(12例)、KOAⅢ组(24例)、KOAⅣ组(15例),另外选取55例同期该院因骨折、截肢等手术治疗的无骨关节炎病人为对照组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测并比较各组关节液和滑膜中miR-140-5p的表达,分析miR-140-5p与KOA病情进展的关系;采用受试者工作曲线(ROC)分析miR-140-5p对KOA的诊断价值。结果观察组关节液(0.51±0.16)、滑膜(0.67±0.21)中miR-140-5p均比对照组[(1.08±0.38)、(1.54±0.35)]低(P<0.05);KOAⅡ组、KOAⅢ组、KOAⅣ组相比,关节液[(0.65±0.17)、(0.51±0.14)、(0.42±0.12)]、滑膜[(0.86±0.22)、(0.69±0.15)、(0.49±0.13)]中miR140-5p均呈依次降低趋势,两两相比差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,KOA病人关节液、滑膜中miR-140-5p与K-L分级均呈负相关(P<0.05);ROC结果显示,关节液、滑膜miR-140-5p诊断KOA的曲线下面积(AUC)分别为0.913、0.931,截断值分别是0.78、1.05,灵敏度、特异度、准确度、约登指数、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比分别为98.04%、78.18%、87.74%、0.76、80.65%、97.73%、4.49、0.03;96.08%、89.09%、92.45%、0.85、89.09%、96.08%、8.81、0.04。结论miR-140-5p在KOA病人关节液及滑膜中均呈低表达,与K-L分级均呈负相关,可能成为KOA病人病情发展的监测指标及治疗靶点。

RA患者滑膜液及血清中IFN-γ、IL-10、IL-12与TRAIL的病理学意义

目的:研究IFN-γ、IL-10、IL-12及TRAIL在类风湿关节炎(RA)病理过程中的作用。方法:采用夹心ELISA法检测46名RA患者关节滑膜液和血清中IFN-γ、IL-10、IL-12及TRAIL的浓度。结果:RA患者关节滑膜液中IFN-γ、IL-12及TRAIL浓度(ng/L)分别为(106.2±7.8)、(57.7±3.5)和(166.5±12.3);RA患者血清中IFN-γ、IL-12及TRAIL浓度(ng/L)分别为(56.3±7.4)、(35.1±12.7)和(69.5±8.3);正常对照血清中IFN-γ、IL-12及TRAIL浓度(ng/L)分别为(31.1±4.4)、(25.2±2.6)和(41.2±4.8);RA患者关节滑膜液IFN-γ高于其血清含量(P<0.05)及正常对照组(P<0.01);RA患者关节滑膜液和血清中IL-10浓度和正常对照差异无统计学意义。结论:在RA疾病中IFN-γ和IL-12浓度明高于正常人,表明RA发病过程中细胞因子分泌格局以Th1型为主,并且滑膜液比外周血更为典型。RA患者关节滑膜液和血清中TRAIL浓度增高,说明RA疾病过程中伴随有凋亡分子的参与。

类风湿关节炎患者外周血与病变部位自身反应性T细胞的免疫学特征

目的研究类风湿关节炎(RA)外周血与病变部位自身反应性T细胞亚群的差异性。方法分析了35例RA患者滑膜液中与外周血T细胞的免疫表型、表面活化标志、Ⅱ型胶原和热休克蛋白70(HSP70)的反应频率与V茁的限制性取用。用流式细胞术分别测定滑膜液和外周血淋巴细胞表型和活化标志;采用标准3H-TdR掺入法分析了关节滑膜液中浸润的淋巴细胞对Ⅱ型胶原(CⅡ)和HSP70的反应频率,用半定量聚合酶链反应(PCR)检测了RA患者的V茁的限制性取用。结果滑膜液中CD4+T细胞与外周血中CD4+T细胞百分比相同,分别为40.0%和41.0%,滑膜液中CD8+T细胞比例升高,CD4/CD8细胞比值显著低于外周血。同时滑膜液中表达CD3和CD25的活化T细胞占(16±6)%,比外周血高。这群CD3/CD25双阳性T细胞对CⅡ和HSP70的反应频率增高。虽然外周血和滑膜液中T细胞受体均以琢茁TCR为主(70±16)%。但是进一步用流式细胞术分型检测其BV亚家族的取用特征,发现滑膜液中T细胞受体表现出限制性取用V茁14、16和17。结论在RA滑膜液中T细胞亚群明显不同于外周血;表现为活化细胞增多,对自身抗原的反应频率增高及T细胞受体的限制性取用。