含Syntaxin 1A基因的SFV表达载体的构建与表达

用绿色荧光蛋白 (EGFP)标记了Syntaxin 1A(Syn1A)蛋白 ,构建了含有EGFP Syn1A融合蛋白的森林脑炎病毒表达载体 pSFV1 EGFP Syn1A ,测序结果表明表达载体构建正确 .用荧光显微成像技术研究了Syn1A在原代大鼠胰腺 β细胞中的定位 ,结果表明Syn1A主要定位于细胞质膜上 .

Syntaxin1A与Munc18a在细胞内的相互作用和定位研究(英文)

Syntaxin 1A (Syn1A) 和Munc18a蛋白在囊泡转运和分泌中起着至关重要的作用,然而它们在细胞中分选和转运的分子机制目前尚不清楚. 我们用绿色荧光蛋白(EGFP) 和红色荧光蛋白(TDimer2) 分别标记Syn1A和Munc18a,并用荧光显微技术观察它们在BHK-21和HEK293细胞中的转运和定位. 实验结果表明Syn1A主要定位在细胞质膜上,而Munc18a主要分布在胞浆中,但是与Syn1A共表达时能定位到细胞质膜上. 删除胞浆部分的Syn1A蛋白不能上膜,提示其胞浆结构域在分选和定位过程中起着重要的作用.

基于酵母产孢的syntaxin家族蛋白SNARE区域功能分析

真核细胞中大部分膜融合过程由SNARE蛋白介导,但其功能和调节机制尚未完全清楚。酵母孢子形成是研究囊泡融合机制包括SNARE蛋白的理想模型系统。在该过程中涉及t-SNARE蛋白Sso1,它是突触囊泡融合所需蛋白syntaxin 1A的同源物,两者SNARE区域有51%的同源性。尽管如此,将SSO1的SNARE区域完全替换成syntaxin 1A,而构建的嵌合体却无法回补sso1△突变的产孢缺陷。为了确定哪些残基为Sso1功能所必须,作者进行了嵌合体和突变分析,发现Sso1/syntaxin 1A嵌合体中syntaxin 1A的SNARE区域的220位丙氨酸换成谷氨酸后获得产孢功能。另外,Sso1发生相应的突变-218位谷氨酸突变成丙氨酸后失去其功能。因此,218位谷氨酸残基为Sso1产孢功能所必须。

SNAP-25、STX1A基因多态性与小儿注意缺陷多动障碍易感性的关系及交互作用分析

目的:探究突触关联蛋白-25(SNAP-25)、突触融合蛋白-1A(STX1A)基因多态性与小儿注意缺陷多动障碍(ADHD)易感性的关系及交互作用。方法:将我院2020年6月到2022年4月门诊就诊的98例ADHD患儿纳入观察组,同期健康体检儿童65例作为对照组。采集研究对象外周静脉血3 ml,采用聚合酶链式反应(PCR)-限制性片段长度多态性法(RFLP)对SNAP-25基因位点(rs3746544)、STX1A基因位点(rs2228607、rs875342)进行分型,比较两组研究对象一般资料、ADHD筛查量表(SNAP-IV)评分、SNAP-25与STX1A基因型及等位基因分布,采用二元Logistic回归模型分析SNAP-25、STX1A基因多态性与ADHD易感性的关联性及交互作用。结果:观察组患儿SNAP-IV中的注意缺陷、多动/冲动评分及平均分均高于对照组(P<0.05);SNAP-2 rs3746544位点携带T/T基因型的儿童多动/冲动评分及平均分均高于G/G、G/T基因型儿童(P<0.05),STX1A rs2228607与rs875342位点携带A/A基因型的儿童注意缺陷评分及平均分均高于G/G、A/G基因型儿童(P<0.05);SNAP-25 rs3746544位点上携带T等位基因及STX1A rs2228607、rs875342位点上携带A等位基因可增加小儿ADHD患病风险(P<0.05);交互携带rs3746544位点GT/TT基因型、rs2228607与rs875342位点GA/AA基因型的小儿ADHD患病风险高于交互携带GG基因型者(P<0.05)。结论:SNAP-25 rs3746544位点与STX1A rs2228607、rs875342位点的突变基因均可增加小儿ADHD易感性,且两基因及不同位点间存在交互作用,共同参与ADHD的发生、发展过程。

利用人源化酵母系统模拟tomosyn在囊泡运输过程中的功能

突触囊泡融合是由syntaxin-1A, synaptobrevin-2和突触小体相关蛋白25(SNAP-25)三个突触N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(SNARE)蛋白共同介导完成的.这些突触SNARE蛋白之间的相互作用受到包括tomosyn在内的多种辅助蛋白的调控. tomosyn是一个syntaxin结合蛋白,并且它是一个突触囊泡融合的负调控因子.然而, tomosyn的具体作用方式并不完全清楚.本研究在酵母细胞中重构了tomosyn的抑制作用模型. SNARE蛋白是一种保守的蛋白,在酵母中,突触SNARE蛋白的同源蛋白参与了分泌囊泡和细胞膜的融合. Sso1是酵母中syntaxin-1A的同源蛋白.在之前的实验中,我们构建了一个SNARE嵌合体,命名为Sso1/187k-STX1A^(D133V),其中将Sso1的一部分替换为syntaxin-1A的相应部分.这个SNARE嵌合体可以取代Sso1在酵母细胞中的功能.过表达tomosyn对野生型酵母细胞的生长没有影响.然而, tomosyn的过表达干扰了含有Sso1/187K-STX1A^(D133V)的细胞的生长.酵母双杂交试验结果表明,在酵母细胞中, tomosyn与syntaxin相互作用,而不是与Sso1相互作用.因此,我们可以使用含有Sso1/187K-STX1A^(D133V)的酵母细胞作为分析tomosyn功能的工具.