癌症转移相关基因Syntenin1多克隆抗体的制备与鉴定

目的获得原核表达GST-Syntenin1融合蛋白,制备高效价的抗Syntenin1多克隆抗体。方法RT-PCR扩增Syntenin1 cDNA开放阅读框(CDS)序列,亚克隆到编码GST的pGEX-4T-2原核表达载体上,将编码Syntenin1的pGEX-4T-2-Syntenin1重组质粒化学转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导GST-Syntenin1融合蛋白表达,对融合蛋白亲和纯化。SDS-PAGE鉴定后,将纯化的融合蛋白辅以弗氏佐剂,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blot检测抗体效价及特异性。结果成功制备GST-Syntenin1融合蛋白及多克隆抗体。Western blot结果表明Syntenin1兔多克隆抗体效价可达到1∶20 000,且与Syntenin1蛋白特异结合。结论成功制备Syntenin1多克隆抗体,为进一步研究Syntenin1基因的功能奠定了基础。