滇南小耳猪肌源性因子5(MYF5)基因多态性研究

肌源性因子5(myogenic factor 5,MYF5)被认为是猪肌肉生长发育的重要基因,为探究MYF5基因的遗传变异对滇南小耳猪生长性状的影响,以期为优质滇南小耳猪肉新品种(系)培育提供有效的分子遗传标记,本试验以MYF5为候选基因,杜洛克猪(n=40)为对照组,筛选滇南小耳猪(n=18)的优势SNP位点,并对筛选的优势SNP与其主要胴体及肉质性状进行关联分析。结果显示,在滇南小耳猪MYF5基因检出的16个SNP位点中,1个位于编码区,为同义突变,并筛选到4个优势SNP。关联分析结果表明,滇南小耳猪MYF5基因1486、1574、1629以及1701位点间突变频率一致且有相近的遗传图距,连锁紧密。A1486G位点分别为GG、AG、AA基因型;G1574A位点分别为AA、GA、GG基因型;C1629T位点分别为TT、CT、CC基因型;T1701C位点分别为CC、TC、TT基因型。就肌内脂肪含量而言,MM基因型极显著高于MN基因型(P<0.01),MM基因型显著高于NN基因型(P<0.05),NN基因型显著高于MN基因型(P<0.05)。就大理石纹评分而言,MM基因型极显著高于NN基因型(P<0.01),MM基因型极显著高于MN基因型(P<0.01),MN基因型极显著高于NN基因型(P<0.01)。因此,本研究可基本推断在有关作用于滇南小耳猪种肉质性状的基因中,MYF5基因较为关键。该试验结论可为滇南小耳猪育种中改善肉品质等性状给予分子标记支撑。

赤水乌骨鸡Myf5基因SNPs与周龄体重的关联性分析

为了探究Myf5基因的多态性及对赤水乌骨鸡周龄体重的影响,试验通过PCR扩增、基因测序分析Myf5基因SNPs,使用SPSS 21.0分析SNPs基因型与赤水乌骨鸡周龄体重的关联性。结果:赤水乌骨鸡Myf5基因存在3个SNP位点,均位于第一外显子,其中G.40098586 T>C、G.40098595 T>C 2个位点突变导致终止子(TGA)突变为精氨酸(CGA),G.40098901A>G突变导致赖氨酸(AAG)突变为谷氨酸(GAG)。G.40098595 T>C位点CC基因型2、8周龄体重极显著高于TT型(P<0.01),6、12周龄体重显著高于TT型(P<0.05),CT基因型4、10周龄体重显著高于TT型(P<0.05);G.40098901 A>G位点AG基因型4周龄体重极显著高于GG型(P<0.01)。结论:Myf5基因的3个SNP位点突变可显著影响赤水乌骨鸡的周龄体重,G.40098595 T>C、G.40098901 A>G位点可作为赤水乌骨鸡体重选育的候选分子标记。

植物药组方MYF-20的抗马拉色菌活性及初步作用机制探究

目的以糠秕马拉色菌(Malassezia furfur)为目标菌株,对本实验室研发的植物药组方MYF-20的乙醇提取物进行抗菌活性及初步作用机制研究。方法采用改良CLSI-M27A法确定组方对马拉色菌的最小抑菌浓度,电导率法以及扫描电镜形态学观察研究MYF-20对马拉色菌细胞完整性的影响,铜皂法检测组方对马拉色菌脂肪酶活性影响,构建大蜡螟感染模型评价MYF-20的体内药效。结果MYF-20对马拉色菌的最小抑菌浓度为7.83 mg/mL(生药干重),MYF-20处理后,菌液相对电导率显著上升(P<0.01);扫描电镜证实了菌体芽孢断裂、细胞破裂内陷的发生;脂肪酶活性被显著抑制(P<0.01)。大蜡螟体内实验证明,MYF-20可以显著提高大蜡螟马拉色菌感染模型的存活率与黑化健康评分,降低体内真菌负荷(P<0.01)。结论MYF-20对马拉色菌在体内外均具有强抗菌活性,可通过多途径发挥其抑菌功能,具有成为抗马拉色菌植物类新药的一定潜力。

威宁鸡Myf5基因多态性与周龄体重的相关性研究

为了研究威宁鸡的Myf5基因多态性及与周龄体重的相关性,试验采用PCR扩增并测定Myf5基因序列,使用SPSS21.0软件分析Myf5不同基因型与周龄体重的关联性。结果:威宁鸡Myf5基因存在G.40098586 T>T、G.40098595 T>T、G.40098901 A>G 3个SNPs位点,均位于第一外显子;G.40098586 T>C位点的多态性对威宁鸡周龄体重无显著影响(P>0.05);G.40098595 T>C位点CC基因型2、8周龄体重极显著高于TT型(P<0.01),CC型6、12周龄体重显著高于TT型(P<0.05),CT型4、10周龄体重显著高于TT型(P<0.05);G.40098901 A>G位点AG基因型4周龄体重显著高于GG型(P<0.05)。结论:威宁鸡Myf5基因的3个突变位点均可引起氨基酸序列改变,突变位点与威宁鸡体重显著相关(P<0.05),突变位点G.40098595 T>C、G.40098901 A>G可作为威宁鸡周龄体重选育的分子标记。

新疆褐牛PPARγ、MYF5和AGPAT5基因SNP突变与体尺性状的关联分析

【目的】鉴定与牛体尺性状相关的基因,筛选PPARγ、MYF5和AGPAT5三个基因的SNP多态性,研究SNP突变对牛体尺性状的影响,为新疆褐牛的分子育种提供标记信息。【方法】采用PCR-RFLP方法对新疆褐牛PPARγ、MYF5和AGPAT5基因的突变位点进行研究,通过单倍型法构建三个目标基因的单倍型块并统计不同单倍型的基因型频率。【结果】三个基因的6个SNP位点对体尺性状均有显著影响,mRNA二级结构预测发现PPARγ-exon7(G74T)和AGPAT5-exon7(G72A)均导致mRNA二级结构和自由能发生改变,蛋白二级结构预测发现牛PPARγ基因外显子1和AGPAT5外显子7的2个SNP位点均为错义突变,改变氨基酸结构,但是蛋白质二级结构未发生改变;MYF5外显子1的SNP位点突变为同义突变,氨基酸及蛋白质二级结构均未发生改变。【结论】筛选PPARγ、MYF5和AGPAT5基因的6个SNP位点,基因PPARγ、MYF5和AGPAT5与牛体尺性状的关系。

乌蒙乌骨鸡Myf5基因多态性与生长体重的关联分析

为了探明乌蒙乌骨鸡Myf5基因与生长体重相关联的SNP位点、优异等位变异,采用PCR和基因测序方法测定乌蒙乌骨鸡Myf5基因第1外显子序列,运用SPSS 21.0软件比较分析Myf5基因各突变位点基因型对乌蒙乌骨鸡周龄体重的影响。结果:乌蒙乌骨鸡Myf5基因第1外显子存在2个与生长性状显著关联的SNP位点,分别为G.40098556(C<T)、G.40098586(A<G),2个位点的不同基因型与乌蒙乌骨鸡体重差异显著(P<0.05)。其中G.40098556(C<T)突变位点包含基因型TT、CT、CC,基因型频率分别为0.35、0.35、0.3,CT基因型个体在4周龄体重显著高于CC型个体(P<0.05),且CT基因型个体在所有周龄的平均体重均高于CC基因型和TT基因型;G.40098586(A<G)突变位点包含基因型GG、GA、AA,基因型频率分别为0.45、0.425、0.125,等位基因G基因频率为0.66,占绝对优势,AA基因型个体在14、16周龄体重显著高于GG型个体(P<0.05)。结论:Myf5基因与乌蒙乌骨鸡生长体重密切关联,可作为乌蒙乌骨鸡品种资源开发与选育的候选分子标记。

鲮Myf5基因克隆及其SNPs分析

提取新鲜鲮(Cirrhinus molitorella)肌肉总RNA,采用RT-PCR技术分段克隆鲮Myf5基因核心序列,获得1104bp的目的片段,其中开放阅读框为723bp,编码240个氨基酸。分析表明,鲮Myf5蛋白具有MRF家族基因的典型性碱性bHLH螺旋-环-螺旋(Basic helix-loop-helix,bHLH)结构。设计特异性引物扩增获得2个内含子,大小分别为1311bp和90bp。用单链构向多态性SSCP的方法分析了Myf5基因在珠江水系3个不同江段鲮中的遗传变异,分布及群体杂合性等群体遗传信息。发现其编码区非常保守,仅在外显子412位点处发生突变C→T。对该位点进行基因型分析,结果表明:珠江北江段鲮中该位点符合Hardy-Weinberg平衡,而东江和西江段种群不符合Hardy-Weinberg平衡,3个江段种群总体上符合Hardy-Weinberg平衡,并存在较大基因流。以Myf5基因该位点的多态性分析表明,3个种群未出现明显分化;通过该位点的遗传结构分析表明:3个江段种群杂合度都较高,中度信息含量(PIC)及多态信息指数,即该位点有较好的变异性及遗传多态性。3个江段种群总体上该位点在不符合Hardy-Weinberg的情况下AA>BB,并由该位点群体杂合性及中性分析表明该位点突变群体具体良好的多态性且不遵循中性选择模式,说明BB型个体受到自然选择。本研究结果表明,鲮Myf5基因的C412T与个体生长有相关性,可作为候选基因标记,用于鲮生长相关分子标记辅助育种研究。

Myf5、Myf6基因在黔北麻羊与努黔F1代不同组织表达差异性的研究

实验旨在探究Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F_1代各组织间的相对表达水平。应用实时荧光定量PCR法检测Myf5、Myf6基因在黔北麻羊(3只)和努黔F_1代(3只)的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌和臂三头肌等组织间的相对表达量。结果表明:各组织Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F_1代间表达差异不显著;2种基因在黔北麻羊臂三头肌、股二头肌和背最长肌相对表达量均极显著高于肾脏、肝脏、心脏、脾脏、肺脏(P<0.01),其中Myf5基因在肾脏相对表达量显著高于脾脏和肺脏(P<0.05),Myf6基因在心脏和肝脏相对表达量均显著高于脾脏(P<0.05);2种基因在努黔F_1代臂三头肌、股二头肌和背最长肌相对表达量均极显著高于肝脏、肾脏、心脏、脾脏、肺脏(P<0.01),心脏和肝脏相对表达量均显著高于肺脏(P<0.05)。综上,Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F_1代8种组织中均有表达且表达量不等,在肌肉组织中的表达量最高。

牛myf6基因真核表达载体的构建及在成肌细胞中的表达

【目的】构建牛myf6基因真核表达载体,并观察myf6真核表达载体转染鲁西黄牛成肌细胞后基因的表达和细胞形态的变化。【方法】在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入myf6基因构建真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6,用脂质体技术转染鲁西黄牛成肌细胞,通过G418筛选出稳定转染的细胞株。利用Western印记、Real-time PCR技术检测成肌细胞转染前后myf6基因、肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的表达量。【结果】与对照组相比,转染质粒的成肌细胞myf6蛋白和mRNA的表达量提高(P<0.01),肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量提高(P<0.01)。细胞形态观察显示成肌细胞融合为肌管。【结论】构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6能在成肌细胞中高效表达,myf6基因促进了成肌细胞向肌肉细胞分化。

高邮鸭和金定鸭发育早期骨骼肌MyoG和Myf 6基因的表达分析

【目的】研究生肌调节因子肌细胞生成素(MyoG)和生肌决定因子(Myf 6)基因表达对鸭胚胎期及初生早期骨骼肌发育的影响。【方法】采用Real-time PCR方法研究MyoG、Myf6基因在不同鸭品种(高邮鸭和金定鸭)胚胎期(13,17,21,25,27胚龄)及初生早期(出雏后7日龄)骨骼肌发育中的表达差异,并分析其表达变化与胸、腿肌发育的相关性。【结果】MyoG和Myf6基因在2个品种鸭胸肌、腿肌组织发育早期均有表达,但不同组织存在不同的表达模式。MyoG在鸭胚胸肌、腿肌组织中均呈现"前高后低"的表达模式,21胚龄以前表达量相对较高,随后表达量下降,并维持相对较低水平;而Myf6基因在胸肌组织中在21胚龄时表达量最高,随后表达量下降,但仍维持相对较高的表达水平;在腿肌组织中在13胚龄时表达量较高,在17胚龄时达到最高,随后表达量有所降低,并在21胚龄后急速下降至极低水平,但其表达在胚胎期后期(27胚龄)以及初生期(7日龄)又有缓慢上升趋势。二元变量相关性分析结果表明,2个品种鸭胸肌、腿肌MyoG mRNA表达与胸肌、腿肌发育呈强负相关;胸肌中Myf6mRNA的表达与胸肌发育无显著相关性,腿肌中Myf6mRNA的表达与腿肌发育呈强负相关。【结论】骨骼肌中MyoG和Myf6基因表达具有显著的时空性,性别差异不显著,骨骼肌中MyoG和Myf6基因表达与鸭发育早期骨骼肌质量变化呈现负的线性相关。

Myf5基因8个SNPs位点与京海黄鸡生长和繁殖性状的关联分析

旨在探讨Myf5基因与鸡生长繁殖性状的关联性。本研究采用PCR-SSCP方法,检测Myf5基因在京海黄鸡群体中的多态性,并对这些多态位点进行单倍型关联分析。结果表明:在Myf5基因外显子处共检测到8个SNPs位点。在379只京海黄鸡的群体中形成了9种单倍型。最小二乘分析结果显示,在生长性状方面,单倍型组合H1H5对8和12周龄体重影响显著(P<0.05),单倍型组合H2H6则对12和14周龄体重影响显著(P<0.05);在繁殖性状方面,单倍型组合H1H5在开产体重上为优势单倍型组合,显著高于单倍型组合H1H4和H2H4(P<0.05),极显著高于单倍型组合H1H3(P<0.01)。就300d蛋重均值来说,单倍型组合H1H3为劣势单倍型组合;对300d的产蛋数数据分析显示,单倍型组合H1H3的300d产蛋数极显著高于H1H4(P<0.01)。因此,京海黄鸡Myf5基因外显子的多态性对其生长和繁殖性状都有一定影响,为探索鸡育种过程中的标记辅助选择提供了参考资料。

五指山猪不同组织中肌细胞生成素基因Myf4及生肌调节因子Myf6的表达

本文通过运用Real-time PCR技术,检测肌细胞生成素基因Myf4和生肌调节因子Myf6在出生后的第30天、第210天、第360天(出生到体成熟)的五指山猪肌肉组织中的表达变化,以及Myf4、Myf6在体成熟五指山猪肌肉、心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠组织中mRNA相对表达情况。结果表明:Myf4及Myf6基因在五指山猪出生后在肌肉组织中的mRNA表达水平随着五指山猪的生长年龄生长而显著增长(p<0.05);Myf4及Myf6基因在成年五指山猪以上8种组织中均有表达,其中在肌肉组织中相对表达量最高。本研究结果将为五指山猪肌肉生长发育及矮小性状形成机理提供参考。

鸡Myf6基因遗传多态性及其遗传效应研究

采用测序和单链构象多态(SSCP)的方法分析了Myf6基因在5个优质肉鸡纯系和3个杂交配套系中的遗传分布、遗传变异及群体杂合性等群体遗传信息,并分析了Myf6基因对胴体性状及肉质性状的遗传效应。结果发现该基因的CDS区域非常保守,仅在外显子1的47位处发生点突变由G→A,由于人工选育的原因,该基因不同基因型的分布在2个优质肉鸡纯系中偏离了Hardy-Weinberg平衡,并且杂合度较低,遗传一致性较高,但在3个杂交配套系中仍都服从Hardy-Weinberg平衡,杂合度较高,达到了配套杂交的目的。野生型A基因可显著地提高活重、屠体重、胸肌重和腿肌重(P<0.05),同时也会降低肉的嫩度。具体地讲,A基因对增加活重、屠体重、胸肌重和腿肌重的加性效应值分别为45.54g,41.03g,6g和9.775g;对增加肌纤维直径和肌纤维密度的加性效应值分别为1.025μm和-29.99mm2。

鸭胚骨骼肌不同组织Myf6基因表达的发育性变化研究

为研究Myf6基因对鸭肌肉发育的影响,本试验利用实时荧光定量PCR绝对定量技术检测Myf6基因在高邮鸭和金定鸭胚胎期第13、17、21、25、27天及出生后7日龄胸肌、腿肌发育过程中的表达量。结果显示,Myf6基因在2个品种的胸肌和腿肌中均有表达,在不同品种同一肌肉组织中的表达变化规律一致,而在不同肌肉组织中的表达模式不同,其中在胸肌组织中21胚龄时表达量最高,随后表达量下降,维持相对较高表达水平;在腿肌组织中13胚龄时表达量较高,17胚龄时达到最高,随后表达量有所降低,并在21胚龄后急速下降至极低水平,但其表达在胚胎期后期(27胚龄)及初生期(7日龄)又有缓慢上升趋势。上述结果表明,Myf6基因参与了胸、腿肌组织的发育,在胸、腿肌中表达模式不同,推测Myf6基因在胸、腿肌中的调控存在差异,可能与其胸、腿肌不同肌纤维的发育与分化有关。

牛myf6基因克隆及在成纤维细胞中的表达

克隆了牛的myf6基因并构建真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6,用脂质体技术转染鲁西黄牛成纤维细胞,通过G418筛选出稳定转染的细胞株,利用Western印记、Real-time PCR技术检测myf6对成纤维细胞的影响。结果表明,与对照组相比,稳定转染后的成纤维细胞myf6蛋白和mRNA的表达量提高(P<0.01),肌肉肌酸激酶基因mRNA表达量升高(P<0.05),肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量也提高(P<0.01)。细胞形态观察显示转染后的成纤维细胞未融合为肌管。由此可知,牛myf6基因可以在成纤维细胞中表达并且有促进成纤维细胞向肌肉细胞分化的功能。

五指山猪不同组织中Myf5与MyoD1基因的表达研究

MRFs家族成员包括Myf5、MyoD1、Myf4和Mfy6,利用Real-time PCR技术,检测Myf5、MyoD1基因在从出生到体成熟(30d、210d、360d)五指山猪背部肌肉组织中的表达变化趋势,以及Myf5、MyoD1基因在体成熟五指山猪心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、肌、胃和小肠以上组织中的mRNA表达水平。结果表明:Myf5和MyoD1基因在出生后五指山猪背部肌肉组织中的mRNA表达水平与五指山猪的生长年龄成正比(P<0.05);Myf5及MyoD1基因在成年五指山猪以上8种组织中均有表达,其中在肌肉组织中相对表达量最高。

Myf5基因在马身猪和大白猪背最长肌中的发育性表达研究

本研究旨在分析猪背最长肌中Myf5基因的发育性表达规律。采用实时荧光定量PCR和Western-blot技术检测了马身猪和大白猪从初生~180日龄7个阶段(初生、30、60、90、120、150和180d)背最长肌中Myf5基因mRNA和蛋白质发育性表达规律。结果表明,马身猪和大白猪背最长肌中Myf5基因mRNA相对表达量均表现出初生时最高,30日龄次之,60日龄时突然降低,此后基本维持稳定状态的规律。马身猪背最长肌中Myf5蛋白的相对表达量初生时最高,30日龄时最低,60~180日龄阶段,表达量呈现波动变化的不稳定趋势;在大白猪中,Myf5蛋白60日龄前的相对表达量极显著高于60日龄后的表达量(P<0.05),60日龄前各阶段间的表达量及60日龄后各阶段间的表达量差异不显著(P>0.05)。在同一日龄阶段,马身猪Myf5蛋白的表达量均显著或极显著地高于大白猪(60日龄阶段除外)。Myf5在mRNA和蛋白质水平上的表达与猪的遗传背景和发育阶段有关。

松辽白鹅Myf5基因多态性与生产性能相关研究

采用测序和单链构象多态(SSCP)的方法分析了Myf5基因在3个品种中的遗传分布、遗传变异及群体杂合性等群体遗传信息,并分析了Myf5基因对酮体性状及肉质性状的遗传效应。结果发现:(1)在此扩增片段存在多态性,得到AA、AB和BB等3种基因型。3个品种中等位基因A占绝对优势,且主要以AA型存在。(2)在Myf5基因外显子1第1344处发生了单碱基的改变(A→G),第1410处发生了单碱基改变(G→C)。方差分析结果表明,不同基因型的宰前活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、腿肌重、翅膀重与屠宰率性状间有显著差异,其它大部分生长和屠体性状无显著差异。

鸭胚骨骼肌成肌细胞中MyoD1和Myf5基因的表达与分析

以高邮鸭和金定鸭为研究对象,采用实时荧光定量PCR方法测定生肌调节因子MyoD1和Myf5基因在不同发育阶段鸭胚(13、15、17、19、21和23胚龄)骨骼肌成肌细胞中的表达水平,分析MyoD1和Myf5基因在鸭胚胎期骨骼肌成肌细胞中的表达模式和差异.结果表明,Myf5和MyoD1基因在胸腿肌成肌细胞中呈现不同的表达规律:胸肌成肌细胞中,Myf5基因的表达呈"低→高→低→较高"的趋势,类似反"∽"形;MyoD1基因的表达呈"低→高→低"的趋势,在金定鸭17胚龄时达到高峰后迅速下降(P<0.01),并维持在低水平,类似"∧"形,而在高邮鸭17胚龄时达到高峰后维持高水平至19胚龄(P>0.05),再下降并维持在低水平(P<0.05),类似"∩"形.腿肌成肌细胞中,Myf5基因的表达呈"低→高→低"的趋势,类似"∧"形;MyoD1基因的表达呈"较高→低→高→低"的趋势,类似"∽"形.结果提示:Myf5和MyoD1基因在骨骼肌成肌细胞中的表达具有时间和品种依赖性;两基因在两品种鸭胸腿肌中均在17胚龄时达到高峰,表明17胚龄可能是成肌细胞分化和增殖的一个重要时期.

鸭胚骨骼肌生肌调节因子MyoD1和Myf5发育性变化研究

本研究采用Real-timePCR分析生肌调节因子MyoD1和Myf5在不同鸭品种(高邮鸭和金定鸭)胚胎期及初生早期(13、17、21、25、27日胚龄和出雏后7日龄)骨骼肌发育中的表达模式以及表达差异。结果表明,MyoD1mRNA和Myf5mRNA在两个品种鸭胸肌早期发育中表现出一致的表达规律,均呈"波浪"型;在腿肌早期发育中均呈近似"反√"型的表达趋势,在27日胚龄时表达量最低,出生后7日龄表达量又上升,但MyoD1mRNA的表达量仅有小幅增加,与27日胚龄的表达量差异不显著(P>0.05),而Myf5mRNA的表达量有大幅增加,与27日胚龄的表达量差异极显著(P<0.01),胸肌和腿肌中两基因的mRNA表达量在同一胚龄不同品种间差异均不显著。结果提示:骨骼肌中MyoD1和Myf5基因表达具有显著的时空性,但不存在品种差异,为进一步深入研究MyoD1和Myf5基因在胚胎期骨骼肌发生过程及其调控机理中的功能提供一定的理论依据。