IL-33介导Treg细胞功能参与布鲁氏菌病免疫调节机制研究

目的分析白细胞介素(IL)-33和调节性T(Treg)细胞在布鲁氏菌病(简称布病)患者中的变化特点,验证IL-33对Treg细胞的调节作用,阐明布病中IL-33对Treg细胞调节的免疫机制。方法采集2021年1-12月在新疆维吾尔自治区人民医院就诊的39例布病患者(布病组)和同期体检的42例健康对照者(健康对照组)的外周血,使用AimPlex试剂盒检测血清IL-33水平,使用流式细胞术检测Treg细胞比例,提取外周血单个核细胞(PBMC)进行体外培养试验观察IL-33刺激后和阻断后叉头框蛋白P3(Foxp3)比例和mRNA表达水平变化。结果与健康对照组比较,布病组IL-33水平与Treg细胞比例均显著增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。体外试验显示,两组PBMC在IL-33刺激后Foxp3比例和mRNA表达水平显著增高,IL-33阻断后Foxp3比例和mRNA表达水平显著回落,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论布病患者IL-33和Treg细胞显著增多,IL-33促进Treg细胞的免疫功能,阻断IL-33有望成为免疫治疗布病的潜在靶点。

基于决策曲线分析抗RA33、IL-6及hs-CRP水平对类风湿关节炎治疗反应性的预测价值

目的基于决策曲线分析抗类风湿关节炎-33(抗RA33)、白细胞介素-6(IL-6)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平对类风湿关节炎(RA)患者治疗反应性的预测价值。方法选取2021年1月至2023年8月该院收治的102例RA患者,收集患者临床资料并检测其血清抗RA33、IL-6及hs-CRP水平。使用甲氨蝶呤与依那西普治疗半年后,根据治疗反应性分为反应良好组与无反应组。采用Pearson相关分析RA患者抗RA33、IL-6、hs-CRP水平与RA疾病活动评分(DAS28)的相关性,多因素Logistic回归分析RA患者治疗无反应的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析抗RA33、IL-6、hs-CRP在RA无反应中的效能。采用决策曲线分析抗RA33、IL-6、hs-CRP单独与联合预测RA患者治疗无反应的净收益情况。结果治疗半年后,反应良好和中度的患者共80例(反应良好组),无效22例(无反应组)。反应良好组病程短于无反应组,DAS28评分低于无反应组(P<0.05)。反应良好组血清抗RA33、IL-6、hs-CRP水平低于无反应组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,血清抗RA33、IL-6、hs-CRP水平与DAS28评分均呈负相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,DAS28评分及抗RA33、IL-6、hs-CRP水平为RA患者治疗无反应的影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清抗RA33、IL-6、hs-CRP单独及联合预测患者治疗无反应的曲线下面积分别为0.729、0.814、0.831、0.948,三者联合的预测价值更高。决策曲线分析显示,在大多合理阈值范围内,血清抗RA33、IL-6、hs-CRP联合预测对RA患者治疗反应性的总体净收益高于单独预测的净收益。结论抗RA33、IL-6、hs-CRP水平与RA患者治疗反应性密切相关,三者联合预测治疗无反应的临床价值及净收益较高。

妊娠期糖尿病患者血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平表达对妊娠结局预测价值研究

目的 探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者血清长链非编码核糖核酸分化拮抗非蛋白编码RNA (long noncoding RNA differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,LncRNA DANCR)、微小RNA-33a-5p (miR-33a-5p)水平表达对妊娠结局的预测价值。方法 选取2021年8月~2023年2月于衡水市第四人民医院产检和分娩的154例GDM患者为GDM组,并根据妊娠结局分为良好结局组(n=115)和不良结局组(n=39);同期收集24周葡萄糖耐量试验正常的149例健康孕产妇作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p预测GDM患者不良妊娠结局的价值;采用Pearson相关性分析GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR,miR-33a-5p与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;Logistic回归分析GDM患者不良妊娠结局的影响因素。结果 GDM组血清LncRNA DANCR水平(0.69±0.15)显著低于对照组(1.01±0.22),miR-33a-5p (1.59±0.40)及不良妊娠结局总发生率(25.34%)显著高于对照组(1.02±0.23,5.36%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=14.835,15.140,23.011,均P<0.05)。不良妊娠结局组血清LncRNADANCR水平(0.50±0.14)显著低于良好结局组(0.75±0.18),miR-33a-5p (2.00±0.58),FBG (8.97±0.66mmol/L),FINS (18.63±1.31pmol/ml)和HOMAIR (7.42±0.98)显著高于良好结局组(1.45±0.26,8.01±0.59mmol/L,14.32±1.29pmol/ml,5.10±0.86),差异具有统计学意义(t=7.895~17.961,均P<0.05)。LncRNA DANCR,miR-33a-5p单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.820,0.819和0.897。GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR与FBG,FINS,HOMA-IR呈负相关(r=-0.498,-0.513,-0.509,均P<0.05),miR-33a-5p与FBG,FINS,HOMA-IR呈正相关(r=0.517,0.494,0.507,均P<0.05)。LncRNA DANCR是影响GDM患者不良妊娠结局的保护因素(OR=0.804,95%CI:0.693~0.933,P=0.004),miR-33a-5p是影响GDM患者不良妊娠结局的危险因素(OR=2.747,95%CI:1.444~5.225,P=0.002)。结论 GDM不良妊娠结局患者LncRNADANCR降低,miR-33a-5p升高,二者均是不良妊娠结局的影响因素。

血清MyD88、IL-33、LCR水平与AECOPD合并呼吸衰竭患者预后的相关性分析

目的探讨血清髓样分化因子88(MyD88)、白细胞介素-33(IL-33)、乳酸清除率(LCR)水平在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并呼吸衰竭患者中的表达及与预后的相关性。方法本研究为回顾性队列研究。纳入2022年1月至2023年12月神木市医院呼吸与危重症医学科收治的AECOPD合并呼吸衰竭患者120例,根据入院治疗28 d后的预后情况分为预后良好组(生存)84例和预后不良组(死亡)36例。入院时收集患者的基本资料,包括年龄、性别、吸烟史、COPD病程等。患者入院后未治疗前测量急性生理学及慢性健康状况评分系统(APACHEⅡ)评分确定是否为急性加重期,同时测量入院后未治疗前的血小板计数(PLT)、中性粒细胞计数、血肌酐(Scr)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GCT)、MyD88、IL-33水平,测量入院后未治疗前及经过治疗、间隔24 h的乳酸水平。采用logistic回归分析探讨影响预后的独立因素,Spearman相关性分析用于评估血清生物标志物与患者预后之间的相关性。采用χ^(2)检验、t检验。结果预后良好组中男50例,女34例,年龄(70.68±3.36)岁,COPD病程(18.74±3.65)年;预后不良组中男21例,女15例,年龄(70.41±3.27)岁,COPD病程(18.59±3.78)年。多因素logistic回归分析表明,APACHEⅡ评分、中性粒细胞计数、MyD88、IL-33、LCR均是AECOPD合并呼吸衰竭患者预后不良的影响因素(均P<0.05)。Spearman相关性分析表明,血清MyD88、IL-33与不良预后呈正相关(r=0.641、0.640,均P<0.05),LCR与不良预后呈负相关(r=-0.695,P<0.05)。受试者操作特征曲线(ROC)表明,联合血清MyD88、IL-33、LCR预测AECOPD合并呼吸衰竭患者预后不良的曲线下面积为0.987(95%CI 0.972~1.000)、灵敏度为94.4%、特异度为97.6%、约登指数为0.920,诊断效能最高。结论在AECOPD合并呼吸衰竭预后不良患者中,血清MyD88、IL-33表达上调,LCR水平降低,三者联合应用具有良好的诊断效能。

类风湿因子亚型、抗CCP和抗RA33联合检测在早期类风湿关节炎诊断中的应用价值

目的探讨血清类风湿因子(RF)亚型(包括IgG-RF、IgA-RF、IgM-RF)、抗CCP、抗RA33联合检测在早期类风湿关节炎(RA)诊断中的意义。方法收集2021年6月至2022年5月医院收治的可疑RA患者作为研究对象,根据临床诊断结果将患者分为RA组(135例)和非RA组(1556例),测定两组血清IgG-RF、IgA-RF、IgM-RF、抗CCP、抗RA33水平,比较各项指标阳性表达情况,分析联合检测的诊断效能。结果RA组IgG-RF、IgA-RF、IgM-RF、抗CCP、抗RA33水平均高于非RA组(P<0.05);单项指标中,灵敏度和正确指数最高的是抗CCP,特异性最高的是IgG-RF;抗RA33灵敏度最低但特异性比较高。联合检测中以只要有阳性为判断标准,灵敏度和正确指数增加,灵敏度最高的是RF亚型/抗CCP/抗RA33(为99.26%),其次是RF亚型/抗CCP(95.56%);正确指数最高的是RF亚型/抗CCP/抗RA33(78.57%),其次是RF亚型/抗CCP(78.52%)。如果以联合检测中所有项目均阳性为判断标准,特异性明显升高,特异性最高的是RF亚型+抗CCP+抗RA33(99.55%),其次是RF亚型+抗RA33(98.78%)。结论RF亚型、抗CCP和抗RA33等指标对RA诊断具有一定价值,这些指标联合检测可以提高诊断灵敏度、特异性,提高早期诊断效能。

氯吡格雷联合阿司匹林对急性脑梗死IL-18、IL-33、NT-pro BNP的影响

目的:分析氯吡格雷联合阿司匹林对急性脑梗死患者血清白细胞介素(IL)-18、IL-33及N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平及疗效的影响。方法:选取萍乡市人民医院2020年7月—2021年8月收治的急性脑梗死患者72例,以随机数字表法分组,对照组(n=36)在常规治疗基础上使用氯吡格雷治疗,试验组(n=36)在对照组基础上使用阿司匹林治疗,两组均连续服药4周,比较两组炎症因子、NT-proBNP水平,并比较临床疗效及用药不良反应。结果:两组治疗7 d后IL-6、IL-18、IL-33、NT-pro BNP水平均低于治疗前,且试验组均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。试验组临床总有效率为97.22%,高于对照组的77.78%,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组总用药不良反应发生率为11.11%,与对照组的8.33%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:氯吡格雷联合阿司匹林治疗急性脑梗死,可更好地发挥药效,提高临床效果,降低IL-6、IL-18、IL-33、NT-pro BNP水平,安全有效。

加味宣白承气汤对慢性阻塞性肺疾病患者血清IL-21、CTRP-9和IL-33的影响

目的 观察加味宣白承气汤对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血清白细胞介素-21(IL-21)、肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP-9)和白细胞介素-33(IL-33)的影响。方法 120例患者随机分为研究组与对照组各60例。对照组患者给予常规治疗,研究组在此基础上予加味宣白承气汤治疗。检查两组患者治疗前后肺功能指标[用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、第1秒用力呼气容积占用力肺活量的百分比(FEV1/FVC)]、中医证候积分、6 min步行试验(6MWT)和血清指标(IL-21、CTRP-9、IL-33),并统计两组患者临床疗效。结果 研究组总有效率为91.67%,显著高于对照组的78.33%(P<0.05);治疗后,研究组FVC、FEV1、FEV1/FVC、中医证候积分和6MWT改善较对照组明显(P<0.05),IL-21、CTRP-9、IL-33均显著低于对照组(P<0.05)。结论 采用加味宣白承气汤治疗急性加重期慢性阻塞性肺疾病患者可抑制IL-21、CTRP-9和IL-33的表达,从而促进肺功能和临床症状康复。

MsWRKY33转录调控MsACS2影响紫花苜蓿耐盐性的研究

乙烯作为重要的植物激素之一,在植物逆境胁迫应答中发挥重要作用。ACS基因是乙烯合成过程中的关键限速酶(ACC合成酶)基因,本研究通过探究紫花苜蓿MsWRKY33转录因子对ACS基因的调控关系,为MsWRKY33参与紫花苜蓿耐盐胁迫响应的具体调控机制奠定理论基础。利用同源克隆、载体构建、酵母单杂交、酵母双杂交、qRT-PCR等技术,验证MsWRKY33对AtACS2和MsACS2的转录调控,并对盐胁迫下转基因株系中MsACS2表达模式进行分析。结果显示:MsWRKY33转录因子可以与W-box元件特异性结合,且对AtACS2和MsACS2具有转录调控作用;MsWRKY33转基因株系中MsWRKY33基因的表达量显著高于对照,转基因株系中MsACS2的表达是在MsWRKY33基因大量表达后呈上升趋势,进一步说明紫花苜蓿MsACS2基因的表达可能受MsWRKY33转录因子的正向调控。因此,紫花苜蓿受到盐胁迫时可诱导MsWRKY33的表达,MsWRKY33转录因子通过正向调控MsACS2表达,可能影响乙烯合成,从而影响紫花苜蓿的盐胁迫响应。

妊娠期糖尿病患者血清miR-33 ABCA1表达与病情及妊娠结局的关系

目的:探讨妊娠期糖尿病患者血清miR-33,ABCA1表达与病情及妊娠结局的关系。方法:回顾性分析2022年4月至2023年4月于本院产科产检并诊断为妊娠期糖尿病的75例孕妇(糖尿病组),并以64例正常妊娠的孕妇为对照组,抽取空腹血样,计算胰岛素抵抗;逆转录-定量实时PCR法测定血清miR-33表达水平;酶联免疫吸附法测定血清ABCA1水平;比较两组及不同Priscilla WHITE分级患者中血清miR-33、ABCA1水平;以Pearson法分析血清miR-33、ABCA1水平相关性以及二者与胰岛素抵抗的相关性;比较两组受试人员及新生儿不良结局;分析根据是否发生不良妊娠结局,将妊娠期糖尿病分为妊娠良好组(42例)、妊娠不良组(33例),比较两组血清ABCA1、miR-33水平;Logistics回归分析影响妊娠期糖尿病患者结局的因素。结果:糖尿病组血清中ABCA1水平较对照组显著降低(t=9.839,P=0.000),miR-33表达、胰岛素抵抗显著增加(t=9.256,P=0.000),在分娩孕周、初次妊娠、体质量以及年龄方面无统计学差异(P>0.05),随着病情加重,miR-33表达水平随之增加(t=5.231,P=0.000),ABCA1水平随之降低(t=9.421,P=0.000)。妊娠期糖尿病患者血清ABCA1与miR-33、胰岛素抵抗具有负相关性(r=-0.685,-0.510,P=0.000),但miR-33与胰岛素抵抗具有正相关性(r=0.535,P=0.000);糖尿病组巨大儿、新生儿低血糖、胎膜早破的发生率显著高于对照组(P<0.05);妊娠不良组血清中miR-33较妊娠良好组显著增加(P<0.05),但ABCA1水平显著降低(P<0.05);血清miR-33、ABCA1水平、胰岛素抵抗为妊娠期糖尿病患者发生不良妊娠的独立影响因素(P<0.05)。结论:妊娠期糖尿病患者血清miR-33显著增加,ABCA1表达降低,均与胰岛素抵抗相关,妊娠结局受血清miR-33、ABCA1水平、胰岛素抵抗等影响。

IL-33介导巨噬细胞极化影响非小细胞肺癌患者Tre g/Th17失衡

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中白细胞介素(IL)-33介导巨噬细胞极化对调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)失衡的影响。方法 选择2020年9月至2021年8月新疆医科大学第四附属医院收治的42例NSCLC住院患者(NSCLC组)及40例健康体检者(对照组)作为研究对象。采用流式细胞术检测两组研究对象外周血中Th17、Treg及巨噬细胞/单核细胞的数量;使用磁珠法分选NSCLC组外周血单个核细胞和对照组外周血CD4^(+)T细胞,并使用IL-33诱导巨噬细胞极化,将NSCLC组IL-33极化后的巨噬细胞与对照组CD4^(+)T细胞共培养;RT-qPCR法检测IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、转化生长因子-β(TGF-β)mRNA水平及共培养后维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头蛋白P3(FOXP3)mRNA水平;CBA多因子试剂盒检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β的含量。结果 外周血中,NSCLC组CD14^(+)CD68^(+)CD86^(+)CD206-样M1、CD14^(+)CD68^(+)CD86-CD206^(+)样M2巨噬细胞比例及CD14^(+)CD68^(+)CD86-CD206^(+)样M2/CD14^(+)CD68^(+)CD86^(+)CD206-样M1均高于对照组(P均<0.05),NSCLC组Treg细胞水平及Treg/Th17比例均高于对照组(P均<0.05);IL-33诱导的巨噬细胞培养上清液中IL-10 mRNA、TGF-β mRNA相对表达水平均增加(P均<0.05);IL-33诱导的巨噬细胞与CD4^(+)T细胞共培养后,FOXP3 mRNA水平高于与M0、M1共培养组(P<0.05)。结论 IL-33能够促进NSCLC中巨噬细胞M2极化,M2巨噬细胞促进Treg/Th17比例增加,上调Treg特异性转录因子FOXP3,可能与其促进IL-10、TGF-β分泌增多有关。

结直肠腺癌组织中tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的表达及临床意义

目的:研究结直肠腺癌(colorectal adenocarcinoma,CAC)组织中tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的表达及对细胞增殖的影响。方法:通过tRF&tiRNA芯片分析5对CAC组织中tRFs&tiRNAs差异性表达谱并用qRT-PCR实验在82对CAC组织中对tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的表达水平进行验证。采用RNA原位杂交技术(RISH)检测CAC组织中tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的阳性表达,并分析与患者临床特征和患者预后的关系。CCK-8实验检测tiRNA-1_33-Gly-GCC-1对细胞增殖活性的影响。生物信息学预测并应用双荧光素酶报告实验验证tiRNA-1_33-Gly-GCC-1如何调控TP53I11。回复实验验证tiRNA-1_33-Gly-GCC-1/TP53I11信号轴对CAC细胞增殖的影响。裸鼠荷瘤实验验证tiRNA-1_33-Gly-GCC-1对移植瘤生长和增殖的影响。结果:tiRNA-1_33-Gly-GCC-1在结直肠腺癌组织中表达水平升高并呈阳性表达,阳性例数54/82(65.85%)明显高于邻近正常组织11/82(13.41%),两组间有统计学差异(χ^(2)=5.475,P=0.019<0.05)。tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的阳性表达与CAC患者肿瘤直径(χ^(2)=11.699)、分化程度(χ^(2)=13.081)和患者生存预后(χ^(2)=15.621)密切相关(均P<0.05)。CCK-8实验结果显示tiRNA-1_33-Gly-GCC-1促进CAC细胞的增殖活性(P<0.05)。生物信息学预测TP53I11是tiRNA-1_33-Gly-GCC-1的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验提示tiRNA-1_33-Gly-GCC-1与TP53I113'UTR结合从而抑制其蛋白质合成。Rescue回复实验进一步验证了tiRNA-1_33-Gly-GCC-1抑制TP53I11 mRNA和蛋白的表达及对大肠癌细胞增殖的促进作用。裸鼠皮下移植瘤实验也提示tiRNA-1_33-Gly-GCC-1促进了生长和增殖。结论:tiRNA-1_33-Gly-GCC-1在结直肠腺癌组织中表达水平上调,可能是一个新的促癌基因;机制上tiRNA-1_33-Gly-GCC-1能抑制TP53I11的表达而促进CAC细胞的增殖生长。本研究为今后结直肠腺癌诊治和预后判断提供新的理论基础。

丹参SmWRKY33基因的克隆与表达分析

为了研究WRKY33基因在丹参非生物胁迫中的作用机制,以白花丹参为试验材料,对丹参转录组数据进行分析,挖掘出丹参WRKY33基因参考序列并设计特异性引物,利用基因克隆技术从丹参中克隆出WRKY33基因的全长cDNA,命名为SmWRKY33。对SmWRKY33基因进行生物信息学分析,同时利用荧光定量方法探究SmWRKY33基因在逆境胁迫下的表达模式。结果表明,SmWRKY33基因核苷酸长度为1 635 bp,编码544个氨基酸。生物信息学分析显示,SmWRKY33基因的理论相对分子量为60 835.66,等电点为7.00,定位于细胞核,不存在跨膜区及信号肽,SmWRKY33蛋白为不稳定亲水蛋白。亲缘关系显示,SmWRKY33与紫苏、芝麻、白花泡桐的WRKY33亲缘关系较近。密码子偏好性分析得出拟南芥真核表达最适应丹参SmWRKY33基因的外源表达。qRT-PCR结果表明,SmWRKY33基因在低温、高温、PEG、NaCl等逆境胁迫诱导下具有不同的表达模式,其中低温、NaCl能显著诱导SmWRKY33基因的高表达,说明该基因对温度调节、盐胁迫较为敏感,猜测其参与温度、盐胁迫调控反应机制。本试验首次从丹参中克隆出SmWRKY33基因,探讨了该基因在丹参逆境胁迫下的作用机制,旨在为培育丹参的抗逆新品种提供参考基因。

血清TLR4、IL-25、IL-33与小儿肺炎支原体肺炎病情的相关性及预测价值分析

目的分析血清Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素-25(IL-25)、白细胞介素-33(IL-33)与小儿肺炎支原体肺炎(MPP)病情的相关性及预测价值。方法回顾性选取2022年6月—2023年6月苏州大学附属第二医院收治的150例MPP患儿作为研究对象。根据MPP患儿病情,分为难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)组、轻症肺炎支原体肺炎(MMPP)组;根据患儿预后情况,分为预后不良组、预后良好组。患儿入院时均接受血清TLR4、IL-25、IL-33检测,统计患儿基线资料。采用二元logistic回归分析血清TLR4、IL-25、IL-33水平与MPP患儿病情严重程度及预后的关系;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清TLR4、IL-25、IL-33水平对MPP患儿病情严重程度的预测价值。结果RMPP组、预后不良组病变范围≥2个肺叶、病变类型为大片状阴影患儿占比分别高于MMPP组、预后良好组,TLR4相对表达量、IL-25、IL-33水平分别高于MMPP组、预后良好组(P<0.05);二元logistic回归分析结果显示,病变类型为大片状阴影,血清TLR4相对表达量、IL-25、IL-33高表达是MPP患儿病情为MMPP、预后不良的危险因素(OR>1,P<0.05);ROC曲线显示,血清TLR4相对表达量、IL-25、IL-33水平及联合检测预测MPP患儿病情为RMPP的曲线下面积(AUC)均>0.70,有一定的预测价值,其中联合检测最高。结论血清TLR4、IL-25、IL-33水平与MPP患儿病情严重程度及预后密切相关,三者水平能够有效预测MPP患儿病情发展。

miR-33a-5p靶基因分析验证及对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的研究miR-33a-5p过表达对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及探索其可能的机制。方法在A549细胞中瞬时转染miR-33a-5p mimics,CCK-8和BrdU实验检测细胞增殖能力,转录组测序(RNA-seq)检测mRNA表达水平,targetscan(8.0)、miRDB(2020)、miRWalk(release_2022_01)和ENCORI(starbase,v2.0)联合筛选miR-33a-5p的潜在靶基因,并与RNA-seq的下调表达的基因取交集,RT-qPCR进行基因表达验证。结果RT-qPCR结果显示,miR-33a-5p在A549细胞中高表达(P<0.05);CCK-8实验和BrdU实验结果显示,细胞增殖能力受到抑制(P均<0.05);RNA-seq结果显示,差异基因共494个,其中上调266个,下调228个;GO功能富集主要在细胞外区组成、质膜的组成、受体复合物、细胞外泌体、细胞外基质结构组成、钙离子结合等,KEGG富集主要在补体和凝血途径、胰岛素抵抗、ABC转运途径、IL-17途径、NOD样受体途径和NF-κB信号通路等;靶基因预测分析和RT-qPCR表达验证显示,MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR是miR-33a-5p的潜在靶基因(P均<0.05)。结论miR-33a-5p可能通过调控MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR基因转录后表达水平来抑制A549细胞的增殖。

Gly33的缺失和突变对hTrx-1抗氧化活性的影响

为探讨人硫氧还蛋白hTrx-1活性位点保守序列中Gly33残基在还原氧化性蛋白过程中是否必不可少,通过合成突变基因对hTrx-1的Gly33残基进行缺失和替换(G→A)。合成的突变基因随后在原核细胞中表达并进一步纯化及检测抗氧化活性,结果表明,无论是Gly33残基的缺失还是突变为Ala,突变的hTrx-1均能在原核细胞中高效表达,暗示2种突变型hTrx-1均能形成“Trx折叠”结构。抗氧化活性检测表明Gly33残基缺失的情况下,其抗氧化能力有所下降,当Gly33突变为Ala时,其抗氧化能力大幅下降到接近失去抗氧化能力。推测Trx-1活性中心保守氨基酸残基的改变影响了活性中心区域的几何构象,从而导致底物蛋白难以从空间上靠近。参与形成二硫键巯基的含量检测结果表明,突变型hTrx-1中形成二硫键巯基的含量明显低于野生型hTrx-1中形成二硫键巯基的含量,推测突变型hTrx-1的Cys32与Cys35形成二硫键的能力受到影响。

2型糖尿病患者血清微小RNA-33a表达及其与微血管并发症的关系探讨

目的探讨2型糖尿病(T2DM)血清微小RNA(miR)-33a表达及其与微血管并发症的关系。方法选取本院2019年5月~2022年2月收治的T2DM患者120例,根据糖化血红蛋白(HbA1c)水平将其分为低水平组(HbA1c≤7%)37例、中水平组(7%<HbA1c<9%)51例和高水平组(HbA1c≥9%)32例;根据是否合并微血管并发症将其分为并发症组(56例)和无并发症组(64例)。另选取109例同期健康体检者作为对照组。收集T2DM患者一般临床资料和实验室检查指标及所有受试者血清miR-33a水平并分组进行比较。采用多因素logistic回归分析探讨T2DM患者发生微血管并发症的影响因素;采用Pearson相关分析评估血清miR-33a表达水平与微血管并发症的相关性。结果高水平组、中水平组、低水平组和对照组受试者血清miR-33a表达水平均依次降低(P<0.05);120例T2DM患者中合并微血管并发症56例,发生率为46.67%;多因素logistic回归分析结果显示,校正因素前、后血清miR-33a高表达均是T2DM患者发生微血管并发症的独立危险因素(P<0.001);Pearson相关分析结果显示,血清miR-33a表达水平与微血管并发症的发生呈正相关(P<0.001)。结论血清miR-33a是T2DM患者发生微血管并发症的危险因素,且与微血管并发症的发生呈正相关。

MRI联合血清AFP和IL-33对原发性肝细胞癌的诊断价值

目的:探讨MRI参数联合血清AFP和IL-33对原发性肝细胞癌(HCC)的诊断价值。方法:纳入2020年1月1日至2024年4月1日广东省中医院收治的HCC、肝内胆管癌及良性肝病患者,其中HCC患者106例,肝内胆管癌患者58例,良性肝病患者179例(包括肝血管瘤患者59例、肝囊肿患者62例、肝局灶性结节样增生患者58例)。所有患者均行MRI检查及血清AFP、IL-33水平检测,比较各组患者MRI检查转运常数(K^(trans))、速率常数(K_(ep))、血管外细胞外间隙体积百分比(V_(e))及血清AFP、IL-33水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析上述指标单独或联合检测对HCC的诊断效能。结果:HCC组K^(trans)、K_(ep)、V_(e)水平均明显高于肝内胆管癌组和良性肝病组,差异具有统计学意义(P<0.001);HCC组血清AFP、IL-33水平均明显高于肝内胆管癌组和良性肝病组,差异具有统计学意义(P<0.001);ROC曲线分析结果显示,MRI参数K^(trans)、K_(ep)、V_(e)诊断HCC的最佳截断值分别为0.38 mL/min、1.32 mL/min和0.36%;AFP、IL-33诊断HCC的最佳截断值分别为44.52ng/mL和100.81 ng/mL;K^(trans)、K_(ep)、V_(e)、AFP和IL-33诊断HCC的灵敏度分别为74.58%、74.58%、71.19%、77.12%和77.97%,特异度分别为74.53%、77.36%、73.58%、74.53%和74.53%;K^(trans)、K_(ep)、V_(e)、AFP和IL-33联合检测诊断HCC的AUC为0.959(95%CI:0.936~0.982),预测灵敏度和特异度分别为91.53%和90.57%。结论:K^(trans)、K_(ep)、V_(e)、AFP和IL-33联合检测对HCC具有较好的诊断效能,能为HCC的诊断提供一定的临床参考价值。

敲低IL-33下调炎症因子和NLRP3表达抑制哮喘小鼠炎症反应

目的探讨白细胞介素33(IL-33)对哮喘小鼠炎症反应的调控机制。方法利用10μg/mL脂多糖(LPS)构建小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)的体外细胞炎症模型,根据是否转染IL-33的小干扰RNA(si-IL-33)质粒和过表达(IL-33-OE)质粒,将细胞分成si-IL-33组,IL-33-OE组和模型组。实时荧光定量PCR检测IL-33、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、IL-1β和IL-6的信使RNA(mRNA)表达水平。钙离子荧光探针检测试剂盒(Fluo-3 AM)检测钙离子含量,JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位变化。利用腹腔注射致敏剂和激发剂的方法建立小鼠哮喘模型,根据处理方案的不同,将哮喘小鼠分成si-IL-33组、IL-33-OE组和模型组,每组5只。ELISA试剂盒检测小鼠血清IL-1β、IL-6和NLRP3含量,HE染色和Masson染色检测肺组织的病变情况。结果与模型组相比,si-IL-33组的IL-33、NLRP3、IL-1β和IL-6的mRNA表达量均降低,IL-33-OE组的IL-33、NLRP3、IL-1β和IL-6的mRNA表达量增加。BMMSC中钙离子荧光降低,而IL-33-OE组中钙离子荧光升高。si-IL-33组细胞线粒体中JC-1以聚合物形式存在,呈明亮的红色荧光,细胞中的绿色荧光非常弱;说明si-IL-33组细胞线粒体稳定,线粒体功能尚在。使用IL-33-OE质粒处理使线粒体膜电位下降后,JC-1不能以聚合物形式存在于线粒体基质中,此时线粒体内红色荧光强度显著降低,而细胞质中的绿色荧光显著增强。si-IL-33组小鼠血清中IL-1β、IL-6、NLRP3的含量明显降低,而IL-33-OE组小鼠血清中IL-1β、IL-6、NLRP3的含量明显升高。si-IL-33组几乎未见炎细胞浸润,炎症缓解,上皮细胞正常。si-IL-33组肺组织的纤维增生部分趋于正常。与模型组相比,si-IL-33组的支气管壁总面积(WAt)/支气管基底膜周径(Pbm)和气管壁平滑肌面积(WAm)/Pbm降低,IL-33-OE组的WAt/Pbm和WAm/Pbm增加。结论敲低IL-33通过下调NLRP3、IL-1β、IL-6表达抑制哮喘小鼠的炎症反应。

血清miR-33a-5p、SMAD7水平与视网膜静脉阻塞患者视力预后的关系

目的观察视网膜静脉阻塞患者血清微小核糖核酸-33a-5p(miR-33a-5p)、SMAD同源物7(SMAD7)水平变化,并探讨二者与视力预后的关系。方法选择视网膜静脉阻塞患者108例(观察组),同期体检健康的志愿者108例(对照组),采集所有研究对象清晨空腹外周静脉血,离心留取血清,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-33a-5p,采用ELISA法检测血清SMAD7。比较两组血清miR-33a-5p、SMAD7水平,分析视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p、SMAD7水平的关系。所有视网膜静脉阻塞患者予雷珠单抗玻璃体腔内注射治疗。治疗3个月,评估视力,其中预后不良57例、预后良好51例。采用多因素Logistic回归模型分析视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的预测价值。结果观察组血清miR-33a-5p水平低于对照组,血清SMAD7水平高于对照组(t分别为13.362、38.657,P均<0.01)。Pearson相关分析显示,视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平与血清SMAD7水平呈负相关(r=-0.649,P<0.05)。单因素分析显示,视网膜静脉阻塞患者视力预后不良者合并高血压、高血脂比例和有并发症比例以及血清SMAD7水平均高于其预后良好者(χ^(2)/t分别为13.412、7.342、10.095、6.394,P均<0.05),血清miR-33a-5p水平低于其预后良好者(t=7.373,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高和合并高血压、高血脂以及有并发症是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素(OR分别为0.683、3.843、2.146、1.463、2.773,P均<0.05)。血清miR-33a-5p、SMAD7水平预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.870、0.869,二者联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC为0.938。血清miR-33a-5p、SMAD7水平联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC高于二者单独(Z分别为2.419、2.422,P均<0.05)。结论视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高;血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素;血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良均有一定预测价值,二者联合预测价值更高。

支气管扩张合并感染患者血清PCT、CRP、iNOS、IL-33水平变化及其与预后的关系

目的:探讨支气管扩张合并感染患者血清降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素33(IL-33)水平的变化及其与预后的关系。方法:选取140例支气管扩张合并感染患者为观察组,根据感染程度分为轻度感染组(累及单个肺叶,n=48)、中度感染组(累及单侧肺叶,n=52)及重度感染组(累及双侧肺叶,n=40);根据预后分为存活组(n=95)和死亡组(n=45);另选80名体检健康者为对照组。比较各组对象血清PCT、CRP、iNOS、IL-33水平;多因素Logistic回归分析影响气管扩张合并感染预后的因素;ROC曲线分析血清各指标对患者预后的预测价值。结果:观察组患者血清PCT、CRP、iNOS、IL-33水平均高于对照组(P<0.05);各组感染血清PCT、CRP、iNOS、IL-33水平比较:重度感染组>中度感染组>轻度感染组(P<0.05);死亡组患者血清PCT、CRP、iNOS、IL-33水平高于生存组(P<0.05)。回归分析显示,PCT、CRP、iNOS、IL-33水平均是影响气管扩张合并感染预后的因素(P<0.05)。ROC分析显示,PCT、CRP、iNOS、IL-33水平联合预测支气管扩张合并感染预后的敏感度为91.12%,AUC为0.970。结论:支气管扩张合并感染患者血清PCT、CRP、iNOS、IL-33水平呈高表达,联合检测有利于评估患者病情和预后。