基因扫描分析B-CLL的TCR Vβ亚家族T细胞的表达和克隆性

利用RT-PCR扩增12例B-CLL外周血单个核细胞的TCR Vβ基因24个亚家族的互补决定区3(CDR3),以了解T细胞的表达情况。PCR产物进一步经基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果显示:12例B-CLL共表达13个TCRVβ亚家族T细胞,每例病人仅表达3-9个Vβ亚家族,主要为Vβ2,Vβ3,Vβ6,Vβ7,Vβ17或Vβ19,9例病人的一个或两个Vβ3家族T细胞里克隆性生长。提示B-CLL选择性地表达TCR VβT细胞,大部分B-CLL出现克隆性增殖T细胞,这可能是对白血病细胞相关抗原的免疫反应。

慢性淋巴细胞白血病患者外周血调节性T细胞的百分率及与预后的关系

目的探讨慢性淋巴细胞性白血病(CLL)患者外周血中调节性T细胞(Treg)表达及其与预后的相关性。方法采用流式细胞术检测30例健康体检者和28例初诊的CLL患者治疗前后外周血的CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+Treg数量,并对19例患者进行了治疗随访。结果初诊CLL患者CD4+CD25+Treg高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);初诊CLL患者CD4+CD25+Foxp3+Treg分别高于治疗后组和健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),治疗后CD4+CD25+Foxp3+Treg高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。初诊CLL患者CD4+CD25+Foxp3+Treg与CD38表达率、β2微球蛋白表达量、Zeta相关蛋白70(ZAP-70)阳性表达、临床Binet分期和Rai分期均呈正相关。结论 CD4+CD25+Foxp3+Treg有可能作为评估CLL患者疾病进展、疗效及预后的指标之一。

T淋巴细胞性白血病病人CCR9的功能改变

目的 :探讨趋化性细胞因子受体 9(CCR9)在白血病病人中的功能改变。方法 :对 38例T淋巴细胞性白血病病人的血液标本进行分析。采用趋化试验和黏附试验检测胸腺表达的趋化性细胞因子TECK CCL2 5 (CCR9的配体 )对病人CD4+T细胞的趋化功能和黏附功能的改变。结果 :TECK CCL2 5可以诱导几乎所有的急性T淋巴细胞性白血病 (T ALL)患者的CD4 +T细胞产生强趋化移动 ,也可介导其发生较强的黏附作用 ,而对慢性T淋巴细胞性白血病 (T CLL)患者的CD4 +T细胞仅显示出中度的趋化和黏附作用。结论 :CCR9及其配体TECK可能与促进T ALLCD4 +T细胞的迁移和浸润有关。

滤泡辅助性T细胞与自身免疫性疾病的研究进展

滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells,Tfh细胞)是新近被命名的负责辅助B细胞产生抗体的新的CD4+T细胞亚群,其主要功能是帮助B细胞激活、增生和分化,以形成生发中心。趋化因子受体5(C-X-C chemokine receptor type 5,CXCR5)、诱导性共刺激分子(inducible co-stimulator,ICOS)、白介素21(interleukin 21,IL-21)、B细胞淋巴瘤因子6(B-cell CLL/lymphoma 6,Bcl-6)等主要功能分子参与了Tfh细胞的分化。Tfh细胞数量以及其效应功能分子异常与多种自身抗体介导的自身免疫性疾病相关。

三例伴有t(18;22)(q21;q11)慢性淋巴细胞白血病的细胞及分子遗传学研究

目的分析伴有t(18;22)(q21;q11)慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)的临床及实验室特征。方法应用DSP30+IL-2刺激剂对慢淋细胞进行72 h刺激培养,采用常规方法制备染色体并利用R显带技术进行核型分析,进一步通过荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)验证3例患者BCL-2基因重排,同时对例1患者进行全基因组测序分析,随访患者化疗疗效及生存情况。结果3例患者均伴有t(18;22)(q21;q11)异常核型,FISH检测均为BCL-2重排,全基因组测序证实例1患者涉及BCL-2与IGL易位。结论t(18;22)具有与t(14;18)不同的分子结构,且该异常核型发生率低,多见于CLL;伴有该异常核型的CLL可能具有难治性和易复发等特点。

慢性淋巴细胞白血病靶向治疗的研究进展

慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)是小B细胞淋巴瘤和白血病的一种,也是B细胞克隆增殖性肿瘤。该病具有明显的异质性,大多数患者的病程趋于惰性,但目前仍不可治愈。异常的信号转导机制是CLL发病机制中不可或缺的。在CLL中,常见的异常信号通路包括B细胞受体信号、细胞凋亡、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号以及Notch信号通路等。针对这些信号通路,研发了一系列的靶向药物,如布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂(伊布替尼、泽布替尼)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶抑制剂(杜韦利西布)、B细胞淋巴瘤2抑制剂(维奈克拉)等,在临床上显著改变了患者的预后。其他靶向药物如fenebrutinib、nemtabrutinib、厄布利塞等,还有免疫肿瘤学和T细胞工程领域发展的嵌合抗原受体T细胞疗法,目前尚在临床试验阶段。更加个体化的治疗方式正在探索,未来可能成为潜在的治疗选择。该文对CLL领域的相关文献进行梳理,就CLL分子机制及靶向治疗的最新研究进行综述。

慢性淋巴细胞性白血病骨髓基质细胞和正常骨髓基质细胞的比较性分析

本研究旨在对慢性淋巴细胞性白血病原代骨髓基质细胞(CLL-human bone marrow stromal cells,CLL-hBMSC)和正常原代骨髓基质细胞(normal hBMSC,N-hBMSC)进行比较性分析,为建立CLL-CLL-hBMSC相互作用模型,从而更好地模拟CLL体内环境提供理论依据。从CLL患者和正常供者骨髓中分离单个核细胞,进行原代骨髓基质细胞(hBMSC)培养;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测CLL-hBMSC和N-hBMSC表面粘附分子如血管细胞粘附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)和细胞间粘附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)的mRNA水平;采用real-time PCR和Western blot法分别检测两类不同来源的hBMSC中淋巴毒素β受体(lymphotoxin beta receptor,LTβR)的mRNA和蛋白质表达水平;采用Western blot法检测NF-κB家族成员的表达并分析细胞因子LTα1β2对NF-κB家族成员表达的影响;建立hBMSC和CLL细胞共培养体系,利用碘化丙啶(PI)染色检测细胞死亡情况。结果表明:从CLL患者骨髓中能成功地培养出贴壁的成纤维样hBMSC。与N-hBMSC相似,表面粘附分子VCAM-1和ICAM-1在两类hBMSC中的mRNA表达一致;两类hBMSC中LTβR的mRNA和蛋白表达水平相似;各NF-κB家族成员在两类hBMSC中都有表达,且蛋白水平无显著性差异;细胞因子LTα1β2可诱导hBMSC中经典性和非经典性NF-κB信号通路的活化;体外实验表明,两类hBMSC都能够有效地支持CLL细胞的体外存活。结论:两类hBMSC培养效率以及细胞形态上无明显差异。LTβR-NF-κB信号分子在两类hBMSC的表达以及活化情况相似。

PD-L1过表达对CLL-1 CAR-T细胞抗急性髓系白血病作用的影响

目的:探讨程序性死亡受体配体1(PD-L1)对CLL-1 CAR-T细胞抗急性髓系白血病(AML)作用的影响。方法:通过构建PD-L1表达载体、制备慢病毒、转导、单克隆筛选技术获得稳定表达PD-L1的THP-1单克隆细胞株(THP1-PDL1),然后以前期制备的CLL-1 CAR-T细胞为效应细胞,以THP-1、THP1-PDL1单克隆细胞株作为靶细胞,分别通过LDH检测、CBA法、CFSE法评价PD-L1过表达对CLL-1 CAR-T细胞裂解功能、炎性因子释放、细胞增殖等功能的影响。结果:①成功制备了PD-L1慢病毒,并筛选获得了稳定表达PD-L1的THP1-PDL1单克隆细胞株,流式细胞术及PCR验证成功。②PD-L1过表达抑制了CLL-1 CAR-T细胞裂解THP-1细胞的能力;效靶比为10∶1时,CLL-1 CAR-T细胞对THP1-PDL1细胞的杀伤效率明显低于对THP-1细胞的杀伤效率[(15.70±9.90)%对(51.95±2.52)%,P<0.05]。③PD-L1过表达减弱了CLL-1 CAR-T细胞释放细胞因子的能力[与THP1-PDL1细胞共培养时对与THP-1细胞共培养时:IFN-γ(115.66±3.13)pg/ml对(1708.16±26.76)pg/ml,P<0.05;IL-6(17.37±0.72)pg/ml对(124.92±4.26)pg/ml,P<0.05;IL-10(5.69±0.13)pg/ml对(124.12±3.02)pg/ml,P<0.05];同时抑制了CLL-1 CAR-T细胞的增殖能力。结论:成功构建了表达PD-L1的THP1-PDL1单克隆细胞株,同时证实了PD-L1过表达对CLL-1 CAR-T细胞抗AML的不利的影响,为通过PD-1/PD-L1通路调控CLL-1 CAR-T细胞功能提供了一定的理论基础。

auto-HSCT桥接CAR-T治疗滤泡淋巴瘤转化B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤1例并文献复习

目的探讨自体造血干细胞移植(auto-HSCT)桥接嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法治疗滤泡淋巴瘤(FL)转化的B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤(B-LBL)的效果。方法回顾性分析2020年8月苏州大学附属第一医院收治的1例FL转化的B-LBL患者诊治经过,并进行文献复习。结果患者为65岁男性,2020年8月确诊FL(Ⅳ期A组,FL国际预后指数-1评分3分,高危组),予以RB(利妥昔单抗联合苯达莫司汀)方案治疗6个疗程,中期及末期PET-CT评估均完全缓解(CR);后予以利妥昔单抗每2个月1次定期维持治疗,4个疗程维持治疗后疾病进展。2021年12月经过组织病理学及骨髓穿刺明确诊断为B-LBL累及骨髓,经过泽布替尼联合hyper CVAD(环磷酰胺、多柔比星、长春地辛、地塞米松)方案诱导治疗后达到部分缓解,后行auto-HSCT桥接靶标为CD19、CD22的CAR-T治疗,治疗过程顺利,细胞因子释放综合征0级,免疫效应细胞相关神经毒性综合征0级,造血重建顺利。出院后口服泽布替尼,移植后2个月PET-CT复查示CR,仍处于无病生存状态。结论FL转化的B-LBL预后差,对于不能行异基因造血干细胞移植的患者,auto-HSCT桥接CAR-T可改善患者预后,延长患者生存期。