盐酸青藤碱抑制急性T淋巴细胞白血病CEM细胞株的作用及转录组学分析

背景:盐酸青藤碱有抗多种肿瘤的作用,但目前尚不清楚盐酸青藤碱对急性T淋巴细胞白血病的作用。目的:探讨盐酸青藤碱对急性T淋巴细胞白血病CEM细胞的抑制作用。方法:应用不同浓度(0.5,1,2,4 mmol/L)盐酸青藤碱处理CEM细胞,CCK-8检测细胞增殖抑制率并计算IC50;倒置显微镜和吉姆萨染色观察CEM细胞形态变化;利用RNA-Seq测序分析差异基因表达并进行生物信息学分析。结合转录组测序结果,流式细胞术检测不同浓度(1,2,4 mmol/L)盐酸青藤碱作用后CEM细胞凋亡率;Western blot检测不同浓度(1,2,4 mmol/L)盐酸青藤碱作用后CEM细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-9蛋白的表达。结果与结论:①盐酸青藤碱呈剂量和时间依赖性地抑制CEM细胞生长;②盐酸青藤碱干预后CEM细胞数量下降,核固缩;③RNA-seq测序筛出53个异常表达基因,基因本体分析主要富集在细胞过程、细胞解剖实体与粘连关系等,信号通路分析与肿瘤相关的是细胞凋亡;④盐酸青藤碱呈剂量依赖性地促进CEM细胞凋亡;⑤盐酸青藤碱上调CEM细胞中Bax、Caspase-9蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。由此可见,盐酸青藤碱可诱导CEM细胞凋亡从而抑制细胞增殖,可能与其上调Bax和Caspase-9蛋白表达,以及下调Bcl-2蛋白表达有关。

血清Tim-3、Galectin-9对重度创伤性脑损伤患者并发急性呼吸窘迫综合征的预测价值

目的探讨血清T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)、半乳糖凝集素-9(Galectin-9)对重度创伤性脑损伤(TBI)患者并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的预测价值。方法选取2020年1月至2023年12月郑州大学第一附属医院收治的180例重度TBI患者作为研究对象,根据受伤后1周内是否发生ARDS分为ARDS组(n=62)和非ARDS组(n=118)。比较两组患者血清Tim-3、Galectin-9水平;采用受试者工作特性(ROC)曲线评估血清Tim-3、Galectin-9对重度TBI患者并发ARDS的预测价值;采用二分类Logistic逐步回归分析探讨重度TBI患者并发ARDS的影响因素。结果ARDS组血清Tim-3、Galectin-9水平高于非ARDS组(P<0.05)。血清Tim-3、Galectin-9及二者联合预测重度TBI患者并发ARDS的曲线下面积(AUC)(95%CI)分别为0.786(0.716-0.855)、0.735(0.652-0.818)、0.835(0.775-0.895),截断值分别为264.24 ng/mL、8.06 ng/mL,特异度分别为0.831、0.788、0.763,灵敏度分别为0.613、0.626、0.742。ARDS组年龄≥60岁、合并休克、机械通气时间≥5d、ICU住院时间≥14d所占的比例均大于非ARDS组,入院时格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、氧合指数(OI)低于非ARDS组,降钙素原(PCT)水平高于非ARDS组(P<0.05)。入院时GCS评分低(OR=0.727,95%CI:0.543-0.973)、OI低(OR=0.957,95%CI:0.932-0.983)、合并休克(OR=9.259,95%CI:3.183-26.937)、Tim-3水平升高(OR=7.110,95%CI:2.738-18.468)、Galectin-9水平升高(OR=7.063,95%CI:2.736-18.230)是重度TBI患者并发ARDS的独立危险因素(P<0.05)。结论血清Tim-3、Galectin-9水平升高与重度TBI患者并发ARDS密切相关,两指标可作为预测重度TBI患者并发ARDS的生物标记物。

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤临床特征及预后分析

目的:探讨血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)患者的临床特征及预后影响因素。方法:回顾性分析2011至2021年在新疆医科大学第一附属医院血液病中心诊治的42例AITL患者临床资料,使用Kaplan-Meier方法计算患者生存率及无进展生存率,log-rank方法进行组间比较。结果:42例患者以老年人为主,中位发病年龄66(22-80)岁,其中25例为男性。38例Ann Arbor分期III-IV期,23例伴有B组症状,34例IPI中高危及高危。起病临床表现以无痛性淋巴结肿大为主(31例),可伴多浆膜腔积液(24例)、发热(17例)、皮疹(11例)和贫血(15例)。18例病理组织活检显示EBV阳性,28例Ki-67≥40%,6例伴发EBV血症。42例患者中位生存时间为12(1-121)个月,3年预估生存率为37.6%,无进展生存率为26.1%。单因素分析结果显示,白介素-6升高、合并多浆膜腔积液的患者生存率更低。结论:AITL起病时临床表现多样,侵袭性高,预后差,常规化疗远期预后不佳。高白介素-6水平、伴有多浆膜腔积液是影响患者预后的不良因素。

基于TRM细胞探讨刺络放血对咪喹莫特诱导的复发型银屑病小鼠的影响及作用机制

目的:基于组织常驻记忆性T细胞(tissue resident memory T cells,T_(RM))探讨刺络放血对咪喹莫特诱导的复发型银屑病小鼠的影响及作用机制。方法:采用背部涂抹咪喹莫特乳膏(Imiquimod,IMQ)二次诱导的方法建立复发型银屑病模型。将实验随机分为分为正常对照组、模型组、刺络放血组、阳性对照组4组,每组6只C57BL/6小鼠,造模后刺络放血组小鼠在背部皮损夹脊穴区域进行刺络放血,阳性对照组小鼠在背部皮损区域均匀涂抹卡泊三醇软膏,正常对照组、模型组小鼠只抓取,不治疗,共治疗6 d。记录各组小鼠背部皮肤表现并进行银屑病面积与严重程度指数(PASI)评分;取各组小鼠背部皮肤HE染色法观察皮肤组织形态表现并行表皮厚度测量,免疫组化及流式细胞术检测各组小鼠背部皮肤组织CD_(8)^(+)T_(RM)与CD_(69)表达。结果:与正常对照组相比,模型组小鼠明显可见红斑、鳞屑、皮肤增厚等表现,PASI评分显著升高,病理切片可见角化过度、炎性细胞浸润、局部出血及表皮层明显增厚(P<0.01);与模型组相比,刺络放血组小鼠红斑、鳞屑、皮肤增厚等表现均减轻,PASI评分降低,病理切片角化过度、炎性细胞浸润、局部出血程度减轻,表皮层增厚减轻(P<0.05);刺络放血组与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组相比,模型组小鼠背部皮肤组织CD_(8)^(+)T_(RM)及CD_(69)阳性细胞数显著增多(P<0.01);与模型组相比,刺络放血组小鼠背部皮肤组织CD_(8)^(+)T_(RM)及CD_(69)阳性细胞数有所减少(P<0.05);刺络放血组与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:刺络放血可能通过抑制机体T_(RM)细胞的表达起到改善银屑病的作用。

养阴润肺汤对肺阴亏虚型肺结核患者的疗效及对外周血调节性T细胞、树突状细胞亚群的影响

目的:探讨养阴润肺汤对肺阴亏虚型肺结核患者的疗效及对外周血调节性T(Treg)细胞及树突状(DC)细胞亚群的影响。方法:选取84例肺阴亏虚型肺结核患者随机分为2组,对照组采取常规西药治疗,研究组在此基础上给予养阴润肺汤治疗,2组均治疗6个月。对比2组治疗前后的症状评分、临床疗效,治疗前后外周血Treg细胞、DC细胞亚群变化及治疗期间的不良反应发生率。结果:治疗后2组症状评分均降低(P<0.05),治疗后研究组咳嗽、咽干、盗汗、潮热症状评分分别为(1.55±0.28)分、(1.46±0.27)分、(1.09±0.22)分、(0.88±0.16)分,均低于对照组的(1.73±0.34)分、(1.59±0.29)分、(1.27±0.26)分、(1.02±0.20)分,差异有统计学意义(P<0.05);研究组总有效率为92.86%,高于对照组的71.43%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后2组外周血Treg细胞水平均降低(P<0.05),且研究组为(2.16±0.42)%,低于对照组的(2.47±0.45)%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后2组DC1、DC2细胞水平均升高(P<0.05),且研究组分别为(0.66±0.13)%、(0.49±0.09)%,高于对照组的(0.59±0.11)%、(0.43±0.08)%,差异有统计学意义(P<0.05);2组治疗期间不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:养阴润肺汤能改善肺阴亏虚型肺结核患者的临床症状、调节外周血Treg细胞、DC细胞亚群水平,高效且安全。

Th17细胞对MPTP诱导的帕金森病模型小鼠神经退变和神经炎症的影响

目的探究辅助性T细胞17(Th17)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)模型小鼠神经退变及神经炎症的影响。方法选取C57BL/6小鼠48只,随机分为三组,腹腔注射生理盐水制备对照组,腹腔注射MPTP制备PD模型组,尾静脉注射Th17细胞的PD模型小鼠作为Th17组,每组16只。分别检测各组小鼠的行为学变化;免疫组织化学法检测小鼠中脑黑质的渗漏情况;免疫组织化学法和Western Blot法检测小鼠中脑黑质部位酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目变化及TH蛋白表达情况。结果PD模型组小鼠中脑黑质部位的荧光渗漏表现最明显;进一步观察发现,PD模型组小鼠纹状体部位有少量的荧光渗漏,皮质部位没有明显的荧光渗漏;对照组与PD模型组荧光渗漏区域相对荧光强度比较,差异有统计学意义(P<0.01)。在旷场实验中,与对照组相比,PD模型组小鼠移动距离、跨格数目减少,平均速度降低;Th17组小鼠移动距离、跨格数目更少,平均速度更低。在转棒实验中,与对照组相比,PD模型组小鼠在转棒上的潜伏时间缩短,Th17组小鼠的潜伏时间进一步缩短。与对照组相比,PD模型组小鼠中脑黑质部位TH阳性神经元数目、TH蛋白表达减少,Th17组小鼠减少更明显。结论Th17细胞及其炎症因子可以加重PD小鼠的神经炎症反应。

DA大鼠骨髓来源PD-L1^(hi)tol-DC构建及其免疫学功能鉴定

目的构建DA大鼠骨髓来源程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-LI)hi耐受性树突状细胞(tol-DC)并鉴定其免疫学功能。方法提取DA大鼠骨髓细胞,联合应用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和重组小鼠白细胞介素(IL)-4,体外培养6 d诱导骨髓细胞分化为未成熟树突状细胞(imDC);应用脂多糖刺激细胞成熟,继续培养2 d收集成熟树突状细胞(mDC);加入PD-L1慢病毒载体病毒原液或同等剂量慢病毒病毒原液,培养2 d后收集PD-L1^(hi)tol-DC和Lv-imDC。应用倒置相差显微镜及透射电镜观察PD-L1^(hi)tol-DC形态;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法及流式细胞术检测细胞表面特异性标志物表达水平。将imDC、mDC、Lv-imDC及PD-L1^(hi)tol-DC分别与Lewis大鼠脾脏来源CD8^(+)T细胞共培养,酶联免疫吸附试验检测各组上清液炎症因子水平,流式细胞术分析各组T细胞凋亡及调节性T细胞(Treg)分化情况。结果经PD-L1基因修饰构建的PD-L1^(hi)tol-DC形态符合tol-DC特征,表面CD80、CD86、主要组织相容性复合体(MHC)表达水平较低。与CD8^(+)T细胞混合培养后,PD-L1^(hi)tol-DC组上清液IL-10、转化生长因子(TGF)-β1水平较高,肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-17A水平较低,T细胞凋亡及Treg分化增多。结论通过慢病毒载体过表达PD-L1可成功诱导构建DA大鼠骨髓来源PD-L1^(hi)tol-DC,促进抑炎因子分泌及T细胞凋亡,诱导Treg分化,抑制同种异体CD8^(+)T细胞免疫反应,这为下一步器官移植免疫耐受研究提供了实验依据。

综合scRNA-Seq和Bulk RNA-Seq技术建立与肝癌CD8^(+)T细胞相关的预后模型

目的 通过单细胞测序(scRNA-Seq)和Bulk转录组测序(Bulk RNA-Seq)技术鉴定出与肝癌CD8^(+)T细胞相关的生物标志物并建立预后模型。方法 从GEO数据库中下载肝癌的单细胞数据集,通过scRNA-Seq技术提取患者与对照组间CD8^(+)T细胞的差异表达基因。从TCGA数据库中下载肝癌的基因表达谱数据及临床数据,使用CIBERSORT算法、WGCNA技术筛选出与CD8^(+)T细胞具有相关性的模块基因。将差异基因与模块基因取交集基因并进行GO、KEGG分析,应用单因素COX回归分析和LASSO算法建立预后模型。通过K-M曲线和ROC曲线对模型在内、外部数据集中的预测效果进行验证。根据风险评分的中位值划分高低风险组,对高低风险组间的浸润性免疫细胞分布情况和肿瘤突变情况进行分析。结果 构建出具有9个基因的预后模型,K-M曲线及ROC曲线表明模型在内、外部数据集中均具有良好的预测能力,在高低风险组中,浸润性免疫细胞的分布情况和基因突变情况均存在显著差异。结论 本研究结合scRNA-Seq和Bulk RNA-Seq技术利用生物信息学方法开发出了一种基于CD8^(+)T细胞的新型预后模型,为肝癌患者的预后改善和生存预测提供了可靠的理论依据。

凉血解毒透邪法调节皮肤常驻记忆性T细胞缓解寻常型银屑病复发的作用及机制研究

目的:观察凉血解毒透邪法(银屑灵方)对寻常型银屑病复发症状的影响及其对皮肤常驻记忆性T细胞(TRM)的影响。方法:选择72只SPF级Balb/C小鼠,体质量18~22 g,雄性,随机分为正常对照组、单发模型组,复发模型组、阳性药组(甲氨蝶呤,0.3 mg·kg-1·d-1)、银屑灵方低、高剂量组(生药23.5 g·kg-1·d-1,47.0 g·kg-1·d-1),共6组,每组12只。除正常对照组外,其它小鼠裸背处涂抹5%咪喹莫特乳膏(IMQ)50 mg,每天1次,连续7 d。放置不作处理,为银屑病缓解期模型。4周后进行2次造模(复发造模),除了正常对照组和单发模型组以外,其余小鼠背部涂抹5%IMQ 50 mg,每天1次,连续5 d。给药:给药时间为首次造模期间和造模后2周。在2次造模的第3天,对各组小鼠皮损进行了第1次银屑病面积与严重性指数(PASI)评分;在2次造模的第5天,再次对各组小鼠皮损进行了PASI评分;并处死动物,对小鼠体质量丢失量、脾脏指数进行分析。采用HE染色,在显微镜下评价黏膜病理损伤指数;采用免疫组织化学检测小鼠皮损的PCNA蛋白的表达;采用荧光定量qPCR检测银屑病相关炎症因子mRNA的表达;采用流式细胞术检测皮损区TRM细胞数量的变化,并用荧光定量qPCR检测TRM细胞产生与存活相关因子的表达水平,采用免疫组织化学和蛋白免疫印迹法检测TRM细胞表型和存活相关蛋白的表达。结果:与复发模型组比较,银屑灵方能够缓解银屑病复发模型小鼠皮损外观症状,抑制体质量丢失和表皮增厚;减低皮损处白细胞介素(IL)17、IL23、肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA的表达和皮肤PCNA蛋白的表达。银屑灵方能够减少银屑病小鼠缓解期皮损区表型为CD3+TCRγδ+CD8+CD103+的TRM细胞数量;并能抑制皮损区IL7、IL15、BCL6和PRDM1 mRNA的表达水平及STAT5磷酸化水平。结论:银屑灵方有效减缓银屑病复发小鼠的皮损,其机制可能是通过抑制TRM形成的转录因子水平、调控TRM存活与增殖的信号STAT5通路及下游信号分子IL7、IL15的表达,减少缓解期原皮损区TRM细胞数量,达到改善银屑病复发的效果。

基于随机生存森林算法的NK/T细胞淋巴瘤患者预后模型的构建与验证

目的探讨NK/T细胞淋巴瘤(natural killer T-cell lymphoma,NKTL)患者的生存预后影响因素。基于随机生存森林(random survival forest,RSF)算法,构建预测NKTL患者总生存期(overall survival,OS)的预后模型。方法从SEER数据库收集2000-2020年的NKTL患者的人口统计学和临床病理资料。按照7∶3的比例将患者划分为训练队列(n=471)和验证队列(n=203)。通过Cox回归分析确定影响患者OS的预后因素,并基于分析结果构建列线图模型。同时,使用RSF算法确定影响患者OS的预后因素,并构建RSF模型。采用ROC曲线、校准曲线和决策曲线、净重新分类指数(net reclassification improvement,NRI)和综合判别改善指数(integrated discrimination improvement,IDI)对模型的预测能力进行评估,并比较2种模型的预测效果。通过2种模型计算每位患者的风险得分,根据风险得分的中位数,将患者分为高风险组和低风险组,并绘制生存曲线进行比较。结果Ann Arbor分期、年龄、放疗、联合治疗和疾病类型是与生存显著相关的预后变量。在验证队列中,列线图模型的1、3和5年ROC曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.745、0.771和0.748,而RSF模型的AUC为0.764、0.792和0.761。ROC曲线显示2种模型在预测OS方面具有良好的准确性和区分性。校准曲线显示2种模型预测的生存与实际生存之间具有良好的一致性。两种模型均能有效地将患者分为预后差组和预后好组,并且预后差组患者的OS显著低于预后好组(P<0.0001)。决策曲线显示RSF模型的净获益优于列线图模型。与列线图模型相比,RSF模型的NRI为0.184(95%CI:0.098~0.267,P<0.01),IDI为0.300(95%CI:0.241~0.359,P<0.01),RSF模型的预测能力优于列线图模型。结论Ann Arbor分期、年龄、放疗、联合治疗和疾病类型是NKTL患者预后的影响因素,本研究据此建立的RSF模型对NKTL患者预后具有很好的预测能力,可有效评估患者预后。

丹益活血汤加减对产科抗磷脂综合征相关复发性流产患者血清Tim-3、Gal-9、RAGE水平的影响

目的:探讨丹益活血汤对产科抗磷脂综合征相关复发性流产(OAPS-RSA)患者血清黏蛋白域分子3(Tim-3)、半乳糖凝集素9(Gal-9)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)水平的影响。方法:选取128例OAPS-RSA患者,随机分为两组,对照组给予小剂量阿司匹林(LDA)联合低分子量肝素(LMWH)治疗,试验组加服丹益活血汤治疗,每组64例。比较两组疗效、治疗前后的子宫内膜容受性(ER)、血栓前状态(PTS)、血清Tim-3、Gal-9、RAGE水平及妊娠结局。结果:试验组总有效率更高(90.63%与76.56%)(P<0.05)。治疗后,与对照组比较,试验组EMT、Tim-3、Gal-9、RAGE均显著升高(P<0.05),PI、RI、FDP、D-D均显著降低(P<0.05)。试验组活产率高于对照组(P<0.05)。结论:丹益活血汤能够提升OAPS-RSA患者疗效,改善ER和PTS,升高血清Tim-3、Gal-9、RAGE水平,改善妊娠结局。

Stattic通过调控记忆性CD4^(+)T细胞介导的急性排斥反应对小鼠同种异体心脏移植物存活的影响

目的探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)抑制剂Stattic对小鼠同种异体心脏移植排斥反应的影响及机制。方法将BALB/c小鼠(供体)皮肤移植至C57BL/6小鼠(受体),4周后取受体小鼠脾脏分离获得记忆性CD4^(+)T细胞(CD4^(+)Tm)。将C57BL/6小鼠脾脏淋巴细胞与CD4^(+)Tm进行混合淋巴细胞反应实验,EdU法检测Stattic对CD4^(+)Tm细胞增殖的影响。构建C57BL/6小鼠心脏移植(HTx)模型,实验分为:Non-HTx组、HTx组、Tm/HTx组和Tm/HTx+Stattic组。每日观察小鼠移植心脏存活情况;苏木素-伊红染色观察移植心脏组织病理情况;实时荧光定量聚合酶链反应检测心脏移植组织中干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2、IL-10和转化生长因子-β1(TGF-β1)信使RNA(mRNA)表达水平;酶联免疫吸附试验检测血清IFN-γ、IL-2、IL-10和TGF-β1含量;流式细胞术检测脾脏淋巴细胞中CD4^(+)Tm(CD4^(+)CD44^(+)CD62L^(+))水平;蛋白质印迹法检测移植心脏组织中STAT3和p-STAT3蛋白表达水平。结果当Stattic浓度超过2.5μmol/L时,可抑制CD4^(+)Tm细胞增殖。与HTx组比较,Tm/HTx组小鼠心脏移植物存活时间缩短,心脏移植组织病理损伤加重,血清IFN-γ和IL-2含量升高,IL-10和TGF-β1含量降低,移植心脏组织IFN-γ、IL-2 mRNA相对表达量升高,IL-10和TGF-β1 mRNA相对表达量降低,脾脏淋巴细胞中CD4^(+)Tm比例升高,移植心脏组织p-STAT3/STAT3比值升高(均为P<0.05)。与Tm/HTx组比较,Tm/HTx+Stattic组小鼠心脏移植物存活时间延长,心脏移植组织病理损伤减轻,血清中IFN-γ、IL-2含量降低,IL-10和TGF-β1含量升高,移植心脏组织中IFN-γ、IL-2 mRNA相对表达量降低,IL-10、TGF-β1 mRNA相对表达量升高,脾脏淋巴细胞中CD4^(+)Tm比例降低,移植心脏组织p-STAT3/STAT3比值降低(均为P<0.05)。结论Stattic可延长小鼠同种异体心脏移植物的存活时间,其机制可能与抑制CD4^(+)Tm介导的急性排斥反应有关。

线粒体调节的Tregs:中枢神经系统自身免疫性疾病潜在治疗靶点的研究进展

调节性T细胞(Tregs)具有清除自身反应性淋巴细胞、诱导自身耐受和抑制炎症反应的功能。线粒体作为细胞的能量工厂,对Tregs的功能、分化和存活至关重要。研究表明中枢神经系统自身免疫性疾病如多发性硬化、视神经脊髓炎谱系疾病、自身免疫性脑炎等均存在Tregs异常和线粒体损伤,但线粒体调节的Tregs在中枢神经系统自身免疫性疾病中的作用尚无定论。因此,本文综述了中枢神经系统自身免疫背景下线粒体损伤对Tregs的调节以及未来可能的线粒体治疗靶点。

大连地区健康成年人群外周血T淋巴细胞15种免疫表型分析研究

目的 分析大连地区健康成年人外周血T淋巴细胞15种免疫表型特征与年龄及性别之间的关系。方法 选取2022年10月~2023年6月在大连医科大学附属第二医院体检中心诊疗的277例健康成年人作为研究对象,其中男性154例,女性123例。按不同年龄将研究对象分为三组:青年组(18~44岁,n=103)、中年组(45~60岁,n=114)和老年组(>60岁,n=60)。通过流式细胞术检测外周血T淋巴细胞免疫表型,包括初始(N)、中央记忆(CM)、效应记忆(EM)、终末分化(TEM)、活化(HLA-DR^(+))及衰老(CD28^(-))CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞绝对计数和百分比,比较不同性别和不同年龄段T淋巴细胞免疫表型绝对计数和百分比的差异性;同时采用Spearman相关性分析评估年龄与T淋巴细胞免疫表型绝对计数和百分比的相关性。结果 与青年组比较,中年组和老年组中CD8^(+)TEM,CD4^(+)HLA-DR^(+),CD8^(+)HLA-DR^(+)和CD8^(+)CD28^(-)T淋巴细胞绝对计数和百分比升高(Z=2.009~6.607),CD8^(+)N T淋巴细胞绝对计数和百分比降低(Z=5.574~7.999),差异具有统计学意义(均P<0.05)。与女性组比较,男性组中CD8^(+)CM,CD8^(+)HLA-DR^(+),CD8^(+)CD28^(-)0000000T淋巴细胞绝对计数和百分比升高(Z=2.945~6.131),CD3^(+),CD4^(+)和CD8^(+)N T淋巴细胞绝对计数和百分比降低(Z=2.075~4.225),差异具有统计学意义(均P<0.05)。Spearman相关性分析表明,年龄与CD4^(+)CM,CD4^(+)HLA-DR^(+),CD4^(+)CD28^(-),CD8^(+)TEM,CD8^(+)HLA-DR^(+)和CD8^(+)CD28^(-)T淋巴细胞绝对计数和百分比呈正相关(r=0.125~0.479,均P<0.05),与CD4^(+)N和CD8^(+)N T淋巴细胞绝对计数和百分比呈负相关(r=-0.538~-0.148,均P<0.05)。结论 大连地区健康成年人外周血T淋巴细胞15种免疫表型受年龄和性别影响,有必要建立适宜当地的参考区间,为机体免疫功能评估提供更精准的参考依据。

结直肠癌外泌体诱导肿瘤相关巨噬细胞极化抑制CD8^(+)T细胞抗肿瘤活性

目的探讨结直肠癌外泌体诱导巨噬细胞极化对CD8^(+)T细胞抗肿瘤活性的影响。方法M0型巨噬细胞与PBS及HT-29和LoVo细胞外泌体(HT-29 exo和LoVo exo)共孵育48 h(PBS组、HT-29 exo组、LoVo exo组),实时定量PCR检测细胞中M2型巨噬细胞标志物CD206、Arginase-1、IL-10、CD163以及M1型巨噬细胞标志物iNOS和IL-1βmRNA表达量。CD8^(+)T细胞与PBS组、HT-29 exo组和LoVo exo组M0巨噬细胞共孵育48 h(PBS+M0组、HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组),流式细胞术检测CD8^(+)T细胞中PD-1的表达。将PBS+M0组、HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组CD8^(+)T细胞分别与HT-29及LoVo细胞共孵育24 h(PBS+M0/CD8^(+)T组,HT-29 exo+M0/CD8^(+)T组和LoVo exo+M0/CD8^(+)T组),ELISA检测细胞上清γ干扰素(IFN-γ)、穿孔素(perforin)和颗粒酶B(granzyme B)浓度,细胞毒性实验检测HT-29和LoVo细胞裂解率。结果与PBS组相比,HT-29 exo组、LoVo exo组细胞中CD206、Arginase-1、IL-10、CD163 mRNA表达显著上调(P<0.05),iNOS和IL-1βmRNA表达显著下调(P<0.05)。与PBS+M0组相比,HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组CD8^(+)T细胞PD-1表达上调(P<0.001)。与PBS+M0/CD8^(+)T组相比,HT-29 exo+M0/CD8^(+)T组和LoVo exo+M0/CD8^(+)T组细胞培养上清中IFN-γ、perforin、granzyme B浓度以及HT-29和LoVo细胞裂解率均显著降低(P<0.001)。结论HT-29 exo和LoVo exo诱导的M2型巨噬细胞可抑制CD8^(+)T细胞抗肿瘤活性。

Th1/Th2漂移与新生儿呼吸窘迫综合征疾病严重程度的关系

目的探究辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)漂移与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)疾病严重程度关系。方法选取2018年1月至2021年3月收治的117例NRDS患儿,分为轻度组62例与重度组55例。比较两组治疗前Th1细胞及Th2细胞表达率、Th1/Th2值、病情危重情况、呼吸功能参数[动脉氧分压(PaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2))、氧合指数(OI)、动脉-肺泡氧分压比例(PaO_(2)/PAO_(2))];采用Pearson相关分析法评价Th1/Th2值与NCIS得分、呼吸功能参数相关性。根据患儿接受规范诊治后预后情况分为预后良好组、预后不良组,观察预后良好组、预后不良组治疗不同时间点Th1/Th2值变化;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价Th1/Th2值对患儿预后预测价值。结果(1)重度组治疗前外周血Th1、Th1/Th2值均较轻度组升高(P<0.05);(2)重度组NCIS得分低于轻度组,呼吸功能参数中PaO_(2)、PaO_(2)/PAO_(2)较轻度组下降,PaCO_(2)、OI较轻度组升高(P<0.05);(3)Pearson相关性分析显示,Th1/Th2值与NCIS得分、PaO_(2)均呈负相关(r=-0.312,-0.404,P<0.05),与PaCO_(2)、OI均呈正相关(r=0.228,0.276,P<0.05),与PaO_(2)/PAO_(2)无明显相关性(P>0.05);(4)117例患儿中25例出现预后不良,且重度组预后不良率高于轻度组(P<0.05);(5)预后良好组治疗前和治疗后1、3 d外周血Th1/Th2值均低于预后不良组,但预后不良组末次检测时外周血Th1/Th2值低于预后良好组;(6)治疗前Th1/Th2值预测患儿预后不良的ROC曲线下面积(AUC)为0.835。结论Th1/Th2漂移与NRDS患儿病情严重程度、呼吸功能具有相关性,且对患儿预后有一定预测价值。

不同结核感染人群CD4+记忆T细胞亚群及炎症因子表达的差异

目的:研究CD4^(+)记忆T细胞亚群、炎症因子在不同结核感染人群[结核潜伏感染组(LTBI组)、健康对照组(对照组)以及活动性肺结核组(PTB组)]的表达水平差异及临床意义。方法:采用流式细胞术检测外周血CD4^(+)T细胞亚群,ELISA法检测炎症因子[白细胞介素17(IL-17)、干扰素-γ(IFN-γ)]水平。结果:(1)CD4^(+)T淋巴细胞:对照组以CD4^(+)Tn为主,占比(44.65±8.23)%,其CD4^(+)Tcm的占比要低于PTB组和LTBI组,CD4^(+)Tem的占比低于PTB组(均P<0.05),CD4^(+)Tcm在三组间表达水平均有显著差异(均P<0.05),而LTBI组和对照组间的CD4^(+)Tem表达水平无统计学差异(P>0.05)。(2)血浆IFN-γ在三组间的表达水平均有显著差异(均P<0.05),LTBI组和对照组间的IL-17表达水平无统计学差异(P>0.05)。(3)PTB组在有效抗结核后CD4^(+)Tcm比例增高,CD4^(+)Tem降低,炎症因子(IL-17、IFN-γ)表达水平减少(均P<0.05)。结论:结核分枝杆菌(MTB)感染人体后不同阶段的外周血CD4^(+)记忆T细胞亚群的平衡状态不同;检测CD4^(+)Tcm、CD4^(+)Tem、IL-17和IFN-γ不仅可作为MTB感染人群初步筛查的实验指标,还有助于活动性PTB抗结核疗效的评估,CD4^(+)Tcm和IFN-γ有望作为PTB、LTBI患者鉴别诊断的标志物。

儿童原发性免疫性血小板减少症Th17/Treg平衡及其临床意义

目的探讨儿童原发性免疫性血小板减少症(ITP)辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡及其临床意义。方法回顾性选取2020年1月至2022年12月本院收治的96例ITP患儿(ITP组)和125例健康儿童(对照组)为研究对象。96例患儿有2例失访,根据预后将剩余94例患儿分为预后良好组(n=74)和预后不良组(n=20)。使用流式细胞仪检测外周血Th17和Treg。收集ITP患儿临床资料,并采用多因素Logistic回归模型分析ITP患儿预后的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血Th17、Treg和Th17/Treg对ITP患儿预后的预测效能。结果与对照组比较,ITP组Th17、Th17/Treg和白细胞计数(WBC)明显较高(t=8.663、30.730、3.888,P<0.001),而Treg和淋巴细胞计数(ALC)明显较低(t=25.496、16.237,P<0.001)。预后不良组Th17、Th17/Treg明显高于预后良好组(t=5.423、11.174,P<0.001),Treg、血小板计数(PLT)和ALC明显低于预后良好组(t=4.059、7.289、5.347,P<0.001),且两组患者年龄存在显著差异(χ^(2)=8.520,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,Th17(OR=1.517,95%CI:1.139~2.020)、Th17/Treg(OR=1.765,95%CI:1.285~2.425)均为ITP患儿预后良好的危险因素(P<0.05),Treg(OR=0.932,95%CI:0.877~0.990)、PLT(OR=0.936,95%CI:0.889~0.985)及ALC(OR=0.819,95%CI:0.700~0.958)为其保护因素(P<0.05)。ROC结果显示,Th17、Treg和Th17/Treg单独预测ITP患儿预后的曲线下面积(AUC)分别为0.682(95%CI:0.578~0.775)、0.778(95%CI:0.681~0.857)、0.721(95%CI:0.619~0.809),Th17、Treg和Th17/Treg联合预测ITP患儿预后的敏感度为85.00%、特异度为87.84%,AUC为0.913(95%CI:0.837~0.961),优于Th17(Z=2.481,P=0.013)、Treg(Z=2.549,P=0.011)和Th17/Treg(Z=2.042,P=0.041)单独预测的AUC。结论儿童原发性免疫性血小板减少症的患儿Th17/Treg比例失衡,联合检测Th17、Treg及Th17/Treg可以提高对患儿预后的预测效能,为临床提供重要的参考依据。

基于生物信息学分析PTTG1和UBE2C与肝癌预后的相关性

目的利用GEO和TCGA数据库中的单细胞数据、基因表达数据和临床信息,挖掘与肝癌预后T/NK细胞相关的差异表达基因(T/NK cell-related differentially expressed genes,T/NK-DEGs),并构建肝癌预后模型。方法从GEO数据库中获得肝癌单细胞数据以及肝癌的基因表达矩阵。从TCGA数据库中获得肝癌基因组图谱(TCGA-LIHC)队列,其中包括mRNA表达数据、临床信息、生存信息、体细胞突变数据。基于以上数据集,通过生物信息学方法构建肝癌患者的预后模型,并预测该模型的性能。结果共鉴定出2个与肝癌预后相关的T/NK-DEGs,分别为PTTG1和UBE2C,并基于此构建了肝癌预后模型。根据风险评分,将患者分为高风险评分组和低风险评分组,其中高风险评分组患者预后明显较差。构建的肝癌预后模型在1年、3年和5年时间点的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))分别为0.685、0.647和0.594,且较高的风险评分伴随较晚的临床分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期)和T分期(T1、T2、T3),差异有统计学意义(P<0.05)。该预后模型能够预测肝癌患者的免疫细胞比例、免疫治疗和化疗药物的敏感性。结论构建的预后模型对肝癌患者的个体化生存预测和临床治疗反应具有重要的临床价值。

黏膜相关恒定T细胞在结核病合并糖尿病患者中的数量和功能变化

目的探讨初治涂阳肺结核合并糖尿病患者外周血黏膜相关恒定T(MAIT)细胞的数量和功能变化。方法本研究为横断面研究。选取2022年10月至2023年10月在中山大学附属第五医院就诊的61例结核病患者为研究对象,根据结核病患者是否合并糖尿病分为肺结核合并糖尿病(PTB+DM)组及单纯肺结核(PTB)组。PTB组患者30例中男25例,女5例,年龄(33.14±8.76)岁。PTB+DM组患者31例中男22例,女9例,年龄(31.57±9.56)岁。检测两组患者的外周血MAIT细胞比例、MAIT细胞经牛分枝杆菌(BCG)感染后的活化标志CD69和细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)表达变化。统计学方法采用t检验。结果PTB+DM组患者外周血MAIT细胞比例低于PTB组[(1.04±0.13)%比(1.79±0.25)%],差异有统计学意义(t=2.727,P=0.008);PTB+DM组CD4+、CD8+T细胞比例分别为(22.91±1.77)%、(7.91±1.05)%,PTB组分别为(27.30±1.34)%、(10.47±1.41)%,差异均无统计学意义(t=1.971、1.469,均P>0.05)。PTB+DM组MAIT细胞经BCG感染后CD69表达和IFN-γ分泌水平均低于PTB组[(5.88±0.71)%比(9.04±1.08)%、(13.82±1.66)%比(26.06±3.77)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肺结核合并糖尿病患者外周血MAIT细胞数量减少,且活化和分泌细胞因子的能力明显下降。