血清TIM-4、HBD2表达水平与肺炎支原体肺炎儿童病情的相关性研究

目的探讨血清T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域分子-4(TIM-4)和人β-防御素2(HBD2)表达水平与肺炎支原体肺炎(MPP)儿童病情的相关性。方法选取本院于2020年7月至2023年1月收治的142例MPP患儿为研究对象,根据病情严重程度分为普通MPP组(n=99)和难治性MPP组(n=43),另选取同期140例健康体检儿童为对照组。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TIM-4和HBD2水平;收集患儿临床资料,并采用多因素Logistic回归分析发生难治性MPP的影响因素;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TIM-4和HBD2水平对难治性MPP的诊断价值。结果普通MPP组和难治性MPP组在发热时间、住院时间、阿奇霉素治疗时间、中性粒细胞百分比、白细胞计数、反复呼吸道感染、肺外并发症方面比较差异具有统计学意义(t/χ^(2)值介于2.195~21.265,P<0.05);与对照组相比,研究组血清TIM-4和HBD2表达水平均明显升高(t=34.527、40.646,P<0.001);与普通MPP组相比,难治性MPP组血清TIM-4和HBD2表达水平均明显升高(t=12.410、15.316,P<0.001);多因素Logistic回归分析结果显示,血清TIM-4水平(OR=1.423,95%CI:1.140~1.776)、HBD2水平(OR=1.436,95%CI:1.162~1.775)、发热时间(OR=1.349,95%CI:1.056~1.724)、中性粒细胞百分比(OR=1.334,95%CI:1.032~1.725)、反复呼吸道感染(OR=1.521,95%CI:1.245~1.858)和肺外并发症(OR=1.432,95%CI:1.152~1.780)均是发生难治性MPP的独立危险因素(P<0.05)。ROC结果显示,血清TIM-4水平单独诊断难治性MPP发生的曲线下面积(AUC)为0.845(95%CI:0.774~0.900),灵敏度、特异度分别为69.77%、85.86%;血清HBD2水平单独诊断难治性MPP发生的AUC为0.815(95%CI:0.742~0.875),灵敏度、特异度分别为74.42%、82.83%;二者联合诊断难治性MPP发生的AUC为0.908(95%CI:0.848~0.950),灵敏度、特异度分别为90.70%、81.82%,显著高于血清TIM-4水平单独诊断(Z=2.047,P=0.040)和血清HBD2水平单独诊断(Z=2.443,P=0.015)。结论血清TIM-4及HBD2水平在肺炎支原体肺炎儿童中表达升高,且二者水平对难治性肺炎支原体肺炎具有一定诊断价值。

重症肺炎患者血清ANXA1、TIM-4表达水平及临床意义

目的 探讨血清膜联蛋白A1(ANXA1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)在重症肺炎患者血清中表达水平及临床意义。方法 选取2019年5月至2021年12月本院收治的90例重症肺炎患者纳入重症肺炎组和90例普通肺炎患者为普通肺炎组为研究对象,另选90例健康体检者为对照组。ELISA法检测血清ANXA1、TIM-4表达水平;多分类Logistic回归分析影响重症肺炎患者预后的因素。ROC曲线分析血清ANXA1、TIM-4对预后的预测价值。Kaplan-Meier曲线分析ANXA1、TIM-4表达与预后的关系。结果 对照组、普通肺炎组、重症肺炎组患者血清ANXA1、TIM-4水平依次上调(P<0.05)。Pearson分析表明,重症肺炎患者血清ANXA1和TIM-4表达水平呈正相关(P<0.05)。与生存组相比,死亡组ANXA1、TIM-4水平明显升高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,ANXA1、TIM-4是影响重症肺炎患者预后的危险因素(P<0.05)。ANXA1、TIM-4联合预测重症肺炎预后的AUC显著大于单独预测。Kaplan Meier生存分析显示ANXA1、TIM-4低表达组生存率显著高于高表达组。结论 重症肺炎患者血清ANXA1、TIM-4表达水平升高,两者是影响重症肺炎患者预后的危险因素,两者联合预测重症肺炎患者预后具有较高的价值。

宫颈鳞状细胞癌中SMC4、CTLA4表达情况及其早期诊断价值

目的分析宫颈鳞状细胞癌中染色体结构维持蛋白4(SMC4)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)表达情况及其对预后分析、早期诊断的价值。方法选择2016年1月至2017年1月于中国人民解放军空军军医大学唐都医院(以下简称该院)收治的早期宫颈鳞状细胞癌(国际妇产科联盟分期为ⅠA~ⅡB期)患者112例为观察组,选择同期140例怀疑宫颈疾病,并于该院进行病理检查排除宫颈癌的女性为对照组。采集两组受检者清晨空腹静脉血,采用罗氏Cobas 6000化学发光分析仪检测糖类抗原(CA)125、CA199、癌胚抗原(CEA)、人附睾蛋白-4(HE4)水平。采用免疫组化法检测两组病理组织SMC4、CTLA4表达情况,比较两组受检者临床资料及各项检测指标。采用多因素Logistic回归分析影响宫颈鳞状细胞癌发生的危险因素,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同SMC4、CTLA4表达情况宫颈鳞状细胞癌患者的预后。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析SMC4、CTLA4诊断宫颈鳞状细胞癌的效能。结果与对照组比较,观察组宫颈组织SMC4及CTLA4表达评分、CA125、HE4、CA199、CEA水平明显升高,同时观察组有流产史、已绝经女性、首次性交年龄<20岁、首次生育年龄<20岁、孕次>5次、有妇科疾病史患者比例均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析发现,SMC4高表达、CTLA4高表达、有流产史、已绝经、首次性交年龄<20岁、首次生育年龄<20岁、孕次>5次、有妇科疾病史,以及CA125、HE4、CA199、CEA水平升高均为宫颈鳞状细胞癌发生的危险因素(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,SMC4高表达患者(61.54%)和CTLA4高表达患者(60.71%)的总生存率分别明显低于SMC4低表达患者(80.00%)和CTLA4低表达患者(82.14%),差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,SMC4、CTLA4诊断宫颈鳞状细胞癌的曲线下面积(AUC)分别为0.715、0.752,SMC4+CTLA4诊断宫颈鳞状细胞癌的AUC为0.875,二者联合诊断宫颈鳞状细胞癌的AUC大于单独检测(Z=5.714、3.075,P<0.05)。结论SMC4、CTLA4在宫颈鳞状细胞癌中表达明显上调,可能参与宫颈鳞状细胞癌的发生及发展过程,可作为宫颈鳞状细胞癌的早期诊断生物学标志物,二者水平升高可能预示着预后不良。

宫颈鳞状细胞癌中染色体结构维持蛋白4细胞毒性T细胞相关抗原4表达变化及与临床预后的关系

目的分析染色体结构维持蛋白4(SMC4)、细胞毒性T细胞相关抗原4(CTLA4)表达变化与宫颈鳞状细胞癌临床病理参数及预后的相关性。方法选择2016年8月至2017年8月于我院收治宫颈鳞状细胞癌患者56例为观察组,同期选择于我院检查的健康人群35名为对照组,免疫组织化学检测2组病理组织SMC4、CTLA4表达情况,采集并比较2组患者临床资料。采用多因素Logisitic回归分析影响宫颈鳞状细胞癌病发患者的危险因素,Kaplan-Meier生存曲线分析SMC4、CTLA4表达在宫颈鳞状细胞癌预后的关系。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析SMC4、CTLA4指标的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度。结果相较于对照组,观察组宫颈组织SMC4、CTLA4表达评分明显升高,同时观察组流产、绝经、首次性交年龄小、首次生育年龄小、孕次多比例明显升高(P<0.05)。多因素Logisitic回归分析发现,SMC4高表达、CTLA4高表达、流产、绝经、首次性交年龄小、首次生育年龄小、孕次多均为影响宫颈鳞状细胞癌病发危险因素(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,56例宫颈鳞状细胞癌患者平均随访时间为34个月,高表达SMC4(≥2.45,26例)患者总生存期明显低于低表达SMC4(30例)患者,高表达CTLA4(≥2.39,28例)患者总生存期明显低于低表达CTLA4(28例)患者(P<0.05)。ROC曲线分析发现,SMC4、CTLA4诊断宫颈鳞状细胞癌的AUC为0.723、0.725,两者联合诊断宫颈鳞状细胞癌的AUC为0.854。结论SMC4、CTLA4对预测宫颈鳞状细胞癌治疗预后具有一定的价值,患者SMC4、CTLA4水平升高提示预后不良风险较高,有望作为宫颈鳞状细胞癌的早期诊断生物学标志物。

肺结核患者血清中可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(sTim-3)和IL-4水平升高但IFN-γ水平降低

目的检测肺结核患者血清中可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(sTim-3)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平。方法收集48例肺结核患者和20例健康体检者外周血,ELISA检测血清中sTim-3水平;流式细胞微球捕获芯片技术(CBA)检测血清中IFN-γ、IL-4水平。Pearson法分析肺结核患者血清中sTim-3、IFN-γ及IL-4水平的相关性。结果与对照组相比,肺结核患者血清中sTim-3和IL-4水平显著升高,IFN-γ水平显著降低;Pearson分析显示:sTim-3与IFN-γ、IFN-γ与IL-4呈负相关;而sTim-3与IL-4呈正相关。结论肺结核患者血清中sTim-3和IL-4水平升高、但IFN-γ水平降低。

阻断Kupffer细胞的TIM-4蛋白功能对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的探讨阻断Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)的TIM-4蛋白功能对小鼠肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的影响。方法建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型,术后Western blot检测KCs和树突状细胞(dendritic cells,DCs) TIM-4表达,免疫组化检测肝组织TIM-4表达;IR小鼠模型采用随机数字表法分为Sham组(PBS处理)、Ctr Ig组(TIM-4同型对照抗体处理)以及TIM-4 m Ab组(TIM-4抗体处理),术后检测血清肝功、炎症指标、肝组织病理变化、肝细胞凋亡以及NF-κB通路相关蛋白的表达。结果 KCs表达TIM-4蛋白随再灌注时间逐渐增加,然而DCs表达TIM-4不随时间变化;组化结果提示TIM-4主要表达于肝血窦巨噬细胞;与Ctr Ig组比较,TIM-4 m Ab组血清肝功、促炎因子产物水平明显减低,而抗炎因子IL-10以及抗氧化应激产物CAT、SOD逐渐增高,且差异具有统计学意义(P <0. 05);肝组织病理学结果示Ctr Ig组部分炎症细胞浸润,肝血窦轻度充血,TIM-4m Ab组无明显变化;TUNEL结果示,TIM-4 m Ab组凋亡程度明显低于Ctr Ig组,Ctr Ig组和TIM-4 m Ab组细胞早期凋亡程度分别为(25. 56±1. 26)%、(5. 35±0. 33)%,且两组差异具有统计学意义(P <0. 05);阻断KCs TIM-4功能后,KCs TLR4以及下游p-IKKα、p-IκBα、p-p65蛋白表达水平逐渐减低;另外,TPCA-1(IKK-2阻断剂)进行预处理小鼠,进一步验证了阻断KCs TIM-4可通过抑制NF-κB信号通路减轻IRI程度。结论阻断KCs TIM-4的功能能够抑制NF-κB炎症通路的激活,改善IR炎症反应以及肝细胞凋亡,从而对HIRI起到一定的保护作用。

CTLA-4Ig与ICAM-1单抗促进供者来源的未成熟树突状细胞诱导移植受体免疫耐受

目的:研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA-4 Ig)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)单抗体内注射促进供者未成熟树突状细胞(imDC)诱导受者免疫耐受的可能机制。方法:实验分对照组(仅输注imDC)、CTLA-4 Ig组、ICAM-1单抗组和CTLA-4 Ig+ICAM-1单抗联合组,每组均以2×106C57BL/6供者imDC经尾静脉输注受鼠(雄性),自imDC输注之日起连续2周向受鼠腹腔内注射CTLA-4 Ig或(和)ICAM-1单抗(0.1 mg/d),DC输注1周后4组均行异位心脏移植,于心脏移植后7 d和21 d,进行免疫学分析。结果:CTLA-4 Ig或联合ICAM-1单抗治疗后均明显抑制同种imDC免疫的移植受体脾脏T细胞对同种抗原刺激的增殖反应,降低淋巴细胞毒活性,明显抑制血清和MLR反应中Th1细胞因子IL-2、IFN-γ的产生,显著提高Th2细胞因子IL-10的水平;明显降低心脏移植受体同种抗体IgG的产生。ICAM-1单抗治疗组的受体T细胞对同种抗原刺激的增殖反应虽有减弱,但与对照组相比没有显著的差异;对MLR反应上清和血清中IL-2的产生有明显的抑制,而对其他细胞因子的产生没有明显的作用。结论:CTLA-4 Ig联合ICAM-1单抗治疗可通过诱导受体T细胞对同种抗原特异性的低反应性,抑制淋巴细胞毒活性和B细胞的体液免疫反应,并促进Th2细胞的极化来促进imDC诱导的同种抗原特异性的免疫耐受。

阻断Kupffer细胞TIM-4诱导iTreg细胞的产生影响小鼠肝移植免疫耐受

目的探讨阻断Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)T细胞免疫球蛋白黏蛋白4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)诱导小鼠原位肝移植术后i Treg细胞的产生及其相关机制。方法建立小鼠原位肝移植急性排斥反应模型,分为sham组、control m Ab组、TIM-4 m Ab组。流式细胞仪检测KCs活化,Western blot检测肝脏TIM-4表达,TUNEL检测肝细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)。提取KCs,激光共聚焦检测KCs TIM-4表达,将KCs和提取的初始CD4+T细胞进行共培养,激光共聚焦检测Kupffer细胞TIM-4表达,分为control组、control m Ab组以及TIM-4 m Ab组;CFSE检测CD4+T细胞增殖,流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+T细胞,ELISA检测IL-4、IL-6、IL-13水平,Western blot检测STAT6表达。建立小鼠移植模型,分为3组:i Treg组移植模型注入i Treg细胞(预先用TIM-4 m Ab处理的TIM-4+KCs与初始CD4+T细胞共培养所诱导),sham组和单纯肝移植组(LT)注入相应的PBS作为对照,检测各组AST、ALT、TBIL水平,HE染色评价肝组织排斥活动指数(rejective activity index,RAI),观察小鼠生存率。结果肝移植术后24、48、72 h KCs的活化分别为15.9%、21.6%、28.3%,术后1、3、7 d TIM-4蛋白表达水平明显高于sham组(P<0.05);control m Ab组AI值(29.23±2.56)明显高于sham组和TIM-4 m Ab组[(0.40±0.49),(11.04±2.28),P<0.05]。KCs与CD4+T细胞共培养后,control、control m Ab以及TIM-4 m Ab组CD4+T细胞的增殖率分别为32.5%、31.6%、17.2%,CD4+CD25+Foxp3+T细胞分化分别为12.4%、13.9%、28.1%,共培养上清液TIM-4 m Ab组IL-4、IL-6、IL-13分泌水平明显低于control m Ab(P<0.05),且加入TIM-4 m Ab明显降低了与TIM-4+KCs共培养的CD4+T细胞p-STAT6蛋白表达(P<0.05),外源性加入IL-4可明显增高CD4+T细胞p-STAT6蛋白的表达(P<0.05)。移植模型注入i Treg细胞,i Tregz组肝功指标明显好转,与LT组比较差异有统计学意义(P<0.05)。肝组织病理学检查,i Treg组RAI平均得分为(3.97±0.67),明显低于LT组[(8.47±0.90),P<0.05],且i Treg组小鼠平均存活时间延长。结论阻断KCs TIM-4能够抑制初始CD4+T细胞IL-4/STAT6信号通路的激活,从而诱导更多i Treg细胞的生成,致使宿主对移植物产生免疫耐受。

Tim4基因定量检测方法的建立及在消化道肿瘤中的初步应用

目的:建立T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4(T cells immunoglobu lin-and muc in-dom ain-contain ing mole-cu le 4,Tim4)基因表达的实时荧光定量PCR(实时RT-PCR)的检测方法,探讨Tim4基因在消化道肿瘤中的表达差异。方法:构建包含Tim4基因片段的标准质粒,通过RT-PCR,实时RT-PCR等检测并比较Tim4基因在37例胃癌组织、19例结直肠癌组织与对应癌旁组织中的表达水平。结果:建立的Tim4基因定量检测方法准确可靠;在37例胃癌组织中,26例癌旁组织Tim4基因表达量高于对应癌组织(26/37),且在26例癌旁组织高表达的样本中,18例(69.2%)胃癌癌旁组织与癌组织表达比率大于2;在19例结直肠癌中12例癌旁组织表达高于对应的癌组织(12/19),其中癌旁组织高表达率(大于2)为75.0%(9/12)。结论:成功建立了检测Tim4基因的实时RT-PCR方法,Tim4基因在结直肠癌和胃癌的癌组织中表达呈低趋势,这为深入探讨Tim4基因与肿瘤的关系提供了实验基础。

IL-4通过促进CD30分子表达抑制类风湿关节炎患者T细胞功能的研究

目的观察IL-4和CD30在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的潜在关联,并探讨其对T细胞促炎细胞因子分泌的影响。方法选取46例活动期RA患者(RA组)及41例健康人(对照组)为研究对象,其中RA患者DAS28评分3.89~7.41分,平均(4.23±1.42)分。ELISA法测定RA血清中IL-4和sCD30含量并分析二者相关性;流式细胞术分析重组人TIL-4蛋白对PBMC来源的T细胞表面CD30表达的影响,观察IL-4刺激后CD30+T及CD30-细胞内IFN-γ、IL-17的水平变化。结果与健康对照组相比,RA患者血清中sCD30水平显著升高(P<0.0001),IL-4水平也有升高(P<0.01),Pearson相关性分析显示二者存在正相关。在抗CD3、抗CD28活化培养条件下,重组IL-4蛋白可促进RA患者外周血中T细胞表达CD30分子增加,增加程度与IL-4浓度呈正比。细胞内荧光染色显示,RA患者CD30+T细胞内IL-17较对照组明显升高(P<0.05)。重组IL-4蛋白能降低RA及对照组外周血中CD30+T细胞分泌IFN-γ、IL-17,而对CD30-T细胞内细胞因子的分泌无明显影响。结论IL-4可能通过促进T细胞上CD30分子表达降低促炎细胞因子产生,在RA中发挥免疫调节作用。

宫颈癌患者血清SCC-Ag、Tim-4、PD-L1水平与预后的相关性分析

目的分析宫颈癌患者血清鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、分泌型T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子4(Tim-4)、可溶程序性死亡分子1(PD-L1)水平与肿瘤预后的相关性.方法选取2012年1月~2015年1月我院收治的60例宫颈癌患者作为宫颈癌组,50例宫颈上皮内瘤病变(CIN)患者作为CIN组,同时选取同期于我院进行体检的40例健康者作为对照组,检测三组血清SCC-Ag、Tim-4、PD-L1水平,分析其与病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法分析不同临床病理特征患者生存率,并采用COX回归分析宫颈癌患者预后的影响因素.结果宫颈癌组血清SCC-Ag、Tim-4、PD-L1水平均显著高于CIN组和对照组(P<0.05),CIN组血清PD-L1水平高于对照组,两组血清SCC-Ag、Tim-4水平比较差异无统计学意义(P>0.05);血清SCC-Ag、Tim-4、PD-L1水平与临床分期、病理分级、浸润深度、淋巴结转移及脉管浸润相关(P<0.05);与年龄、病理类型和肿瘤直径无关(P>0.05);COX回归分析显示,临床分期[OR=1.508,95%CI(1.192,1.908)]、病理分级[OR=1.490,95%CI(1.185,1.874)]、浸润深度[OR=1.464,95%CI(1.182,1.812)]、淋巴结转移[OR=1.514,95%CI(1.204,1.905)]、SCC-Ag[OR=1.501,95%CI(1.203,1.873)]、Tim-4[OR=1.496,95%CI(1.218,1.838)]及PD-L1[OR=1.508,95%CI(1.211,1.879)]为宫颈癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05).结论宫颈癌患者血清SCC-Ag、Tim-4、PD-L1水平明显升高,是患者预后不良的危险因素.

B7家族共刺激分子VSIG4在巨噬细胞/T细胞共培养模型中的作用

目的探讨巨噬细胞表达共刺激因子VSIG4(V-set and immunoglobulin domain-containing protein 4)对T细胞增殖与活化的影响。方法分别从VSIG4基因敲除型(VSIG4-/-)小鼠和同窝的野生型(VSIG4+/+)小鼠(遗传背景为C57BL/6)腹腔收集巨噬细胞,在CD3单抗的刺激下与T细胞共培养,设为VSIG4-/-/T组及VSIG4+/+/T组,经CD3单抗刺激的T细胞单独培养设为对照组,未经CD3单抗刺激的T细胞单独培养设为空白组。3H-TdR掺入法检测细胞增殖;FACS测T细胞的活化标志CD69;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测共培养上清中IL-2、IFN-γ蛋白表达变化,RT-PCR法检测IL-2、IFN-γ基因水平表达变化。结果两共培养组中T细胞3 H掺入量均低于对照组(P<0.01);CD69阳性率、IL-2、IFN-γ的蛋白及基因表达同样均低于对照组(P<0.05);且VSIG4+/+/T组中T细胞以上指标相对于VSIG4-/-/T组下降更加明显,且两组间比较差异显著(P<0.05)。结论巨噬细胞特异表达的共刺激因子VSIG4在巨噬细胞与T细胞共培养抑制T细胞增殖活化的过程中发挥了作用。

针灸联合西药对中重度间歇性过敏性鼻炎患者T淋巴细胞亚群、IL-4、IL-10、VACM-1水平的影响

目的观察针灸联合西药对中重度间歇性过敏性鼻炎患者血清T淋巴细胞亚群、炎性因子及血管细胞黏附分子-1(VACM-1)的影响。方法将120例中重度间歇性过敏性鼻炎患者随机分为对照组和治疗组,每组60例。对照组予丙酸氟替卡松鼻喷雾剂、盐酸氮卓斯汀片治疗,治疗组在对照组治疗措施的基础上加用针灸疗法。两组疗程均为28天,观察临床疗效,比较中医证候积分、血清T淋巴细胞亚群、炎性因子[白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)]及VACM-1水平的变化情况。结果①治疗组、对照组总有效率分别为95.0%、81.7%,治疗组临床疗效优于对照组(P<0.05)。②治疗前与疗程结束后7天组内比较,两组中医证候(鼻塞不通、鼻痒难耐、鼻流清涕、喷嚏频作)较治疗前改善(P<0.05);组间疗程结束后7天比较,治疗组中医证候改善情况优于对照组(P<0.05)。③治疗前与疗程结束后7天组内比较,两组血清CD3^+、CD4^+水平和CD4^+/CD8^+较治疗前升高(P<0.05),血清CD8^+、IL-4、IL-10、VCAM-1水平较治疗前降低(P<0.05);组间疗程结束后7天比较,上述指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论针灸联合西医治疗中重度间歇性过敏性鼻炎疗效满意,可有效缓解患者的临床症状,改善机体免疫状态,减轻炎症反应。

阻断Kupffer细胞TIM-4功能对小鼠肝移植排斥反应的影响

目的探讨阻断Kupffer细胞(KCs)TIM-4功能对诱导小鼠原位肝移植术后免疫耐受的产生以及相关机制的研究。方法建立小鼠原位肝移植急性排斥反应模型,随机分为Sham组、Control mAb组、TIM-4 mAb组,术后组化检测KCs活化,提取KCs,Western blot和PCR检测肝脏TIM-4表达,检测血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总胆红素,ELISA检测肝组织匀浆肿瘤坏死因子α、干扰素γ、CC族趋化因子2,激光共聚焦检测KCs TIM-4表达,苏木精伊红染色(HE)染色观察肝组织排斥反应,Western blot检测肿瘤坏死因子α、干扰素γ、CC族趋化因子2、p-P65、p-P38表达,流式检测CD25+Foxp3+T细胞的产生。氯膦酸二钠脂质体(CL)可耗竭肝脏KCs,用CL处理移植模型,HE染色观察肝组织排斥反应。结果肝移植术后KCs的活化随着时间变化逐渐增加,术后1、3、7 d TIM-4蛋白以及m RNA表达水平明显高于Sham组(P<0.05),术后7 d谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总胆红素、肿瘤坏死因子α、干扰素γ、CC族趋化因子2水平高于Sham组(P<0.05),HE染色TIM-4 mAb组小鼠肝病理改变排斥活动指数平均得分为2.67±0.75,集中于轻度排斥反应,明显低于Control mAb组病理改变排斥活动指数得分8.17±0.69(P<0.05),且TIM-4mAb组小鼠平均存活时间53.8±6.4 d明显长于Control mAb组平均存活时间14.5±2.9 d(P<0.05)。CL处理供体小鼠,HE染色CL+TIM-4 mAb组和CL+Control mAb组病理改变排斥活动指数平均得分分别为8.01±0.64、7.93±0.56,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot检测TIM-4 mAb组KCs p-P65以及p-P38蛋白,明显低于Control mAb组(P<0.05)。流式示TIM-4 mAb组肝脏i Treg细胞明显增多。结论阻断KCs TIM-4可能通过核转录因子κB以及分裂原激活的蛋白激酶通路减少移植后排斥反应发生,诱导i Treg细胞的生成,致使宿主对移植物产生免疫耐受。

PD-1和CTLA-4 3′UTR基因交互作用在HBV感染中的作用

目的探讨慢性HBV感染者PD-1和CTLA-43′UTR的基因多态性分布,以及二者之间的交互作用。方法通过病例对照研究方法,PCR-RFLP技术检测慢性HBV感染者433例,健康对照者208例,PD-1 rs10204525和CTLA-4 rs3087243的基因型分布频率,采用χ^(2)检验分析HBV感染组与健康对照组的基因型频率、等位基因频率、基因间的交互作用、与疾病严重程度的关系。结果PD-1 rs10204525:与GG基因型相比,慢性HBV感染组的AA基因型频率明显高于健康对照组(P=0.019,OR=2.231,95%CI=1.127~4.418),A等位基因频率明显高于健康对照组(P=0.033,OR=1.334,95%CI=1.024~1.739)。CTLA-4 rs3087243:与AA基因型相比,慢性HBV感染组的GG基因型频率明显高于健康对照组(P=0.016,OR=2.196,95%CI=1.145~4.214),G等位基因频率明显高于健康对照组(P=0.040,OR=1.320,95%CI=1.012~1.723)。PD-1和CTLA-4的基因型交互后,在HBV感染组和健康对照组中的差异、与疾病严重程度、与肝癌的关系均有统计学意义。结论PD-1 rs10204525的AA基因型和A等位基因可能是慢性HBV感染的危险因素,CTLA-4 rs3087243的GG基因型和G等位基因可能是慢性HBV感染的危险因素。联合基因型可增加慢性HBV感染的危险因素。CTLA-4 rs3087243的GG基因型和G等位基因可能与HCC感染相关。

人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4在恶性肿瘤中的研究进展

人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(Tim-4)是新近发现的免疫调节分子,主要表达于抗原呈递细胞表面,发挥免疫调控作用。Tim-4在非小细胞肺癌、脑胶质瘤、结直肠癌、宫颈癌等肿瘤细胞上过表达,促进肿瘤的发生、发展、预后以及肿瘤的侵袭转移。而在肝癌组织中,Tim-4低表达并抑制肿瘤进展,提示Tim-4可能具有多重生物学功能。此外,Tim-4单克隆抗体可有效增强癌症疫苗对黑色素瘤的治疗效果,因此应深入研究Tim-4在抗肿瘤中的作用,可为肿瘤的免疫治疗提供新靶点。

人4-1BB转基因细胞的构建及体外生物学功能的研究

目的构建人共刺激分子4-1BB转基因细胞并探讨4-1BB的体外生物学功能。方法利用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞总RNA中克隆出人4-1BB基因,经双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,重组逆转录病毒载体4-1BB/pGEZ-Term与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染重新铺板的293T细胞,加入Zeocin选择性培养基进行筛选。经RT-PCR、Western blot、流式细胞仪表型检测等方法鉴定转基因细胞;3H-TdR掺入法分析转基因细胞对T细胞的作用;DCs培养过程中,加入转基因细胞与激发型CD40单抗5C11,流式细胞仪分析DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达。结果成功构建了能稳定表达人4-1BB蛋白的转基因细胞4-1BB/293T,该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖,可协同5C11促进DCs的体外成熟,上调DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达。结论稳定表达4-1BB蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。

共刺激分子4-1BB信号途径研究进展

共刺激分子4-1BB属于肿瘤坏死因子受体超家族的重要成员,主要表达在活化的CD4+和CD8+T细胞上。4-1BB介导的共刺激信号可增强T细胞的功能,提高T细胞对肿瘤细胞的监视和病毒感染的免疫防御作用。4-1BB信号途径还可诱导体内CD4+T细胞介导的免疫耐受,阻止自身免疫性疾病的发生、发展。通过干预4-1BB信号途径的作用来调节淋巴细胞的免疫功能,有可能成为新的免疫治疗途径。

免疫检查点在特发性肺纤维化中的研究进展

特发性肺纤维化(IPF)是一种罕见的、进行性、致命的肺部疾病。尽管吡非尼酮和尼达尼布的应用能在一定程度上延缓疾病进展,但患者预后仍不容乐观。由于IPF与癌症有部分共同的致病途径,而尼达尼布被用于治疗肺纤维化的同时也是一种抗肿瘤药物,因此免疫检查点有望成为IPF治疗的新靶点。尽管近年对于免疫检查点在IPF中作用的研究结果之间存在矛盾,但抑制程序性细胞死亡受体1/程序性细胞死亡配体1、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4和T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3等免疫检查点显示出抑制肺纤维化发展的潜力。未来,需要进行更多实验明确不同免疫检查点在IPF中的作用机制及其是否对IPF有益。

CD4^＋T细胞及其相关前炎症细胞因子基因多态性与胃癌发生的关系

目的探讨CD4^＋T细胞及其前炎症细胞因子基因多态性与胃癌发生的关系。方法①采用PCR—RFLP法检测170例胃癌患者及110例健康对照者肿瘤坏死因子（TNF）．B＋252、白细胞介素（IL）-10启动子-1082和IL-4内含子3基因多态性。②流式细胞术检测63例胃癌患者和31例健康对照者T细胞亚群和共刺激分子CD28。结果①非贵门胃癌组TNF—β＋252^＊A等位基因频率和IL-10启动子-1082A等位基因频率高于健康对照组（P〈0．05或0．01）。IL-4内含子3基因多态性与非贲门癌患者无明显相关（P〉0.05）。贲门癌组IL-4内含子3RP2基因频率明显高于健康对照组,RP1基因频率低于健康对照组（均P〈0．01）。②胃癌组外周血总T细胞、CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞均较健康对照组显著减少（P〈0．001或0．05）；CD28表达率胃癌组较健康对照组显著增高（P〈0.001）。术后1周总T细胞和CD4^＋T细胞明显上升（P〈0．05）。CD28表达率明显下降（P〈0．05）。结论CD4^＋T细胞亚群异常与胃癌发生关系密切。TNF—β＋252^＊A等位基因和IL-10启动子-1082A等位基因可能是胃癌发生的易感基因，IL-4内含子3-RP2等位基因与贲门癌的发生有一定相关。