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转VEGF和转Tβ4基因陕北白绒山羊粪便中菌群分析 被引量:1
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作者 李陇平 白彩霞 +3 位作者 朱海鲸 黄帅 刘锦旺 屈雷 《江苏农业科学》 2019年第2期162-164,共3页
以转VEGF基因和转Tβ4基因陕北白绒山羊与野生型陕北白绒山羊为研究对象,采集其新鲜粪便样品,用灭菌生理盐水进行梯度稀释后,分别接种LB固体培养基、TPY琼脂、胆硫乳琼脂、肠球菌琼脂、伊红美蓝琼脂和甘露醇盐琼脂培养基,37℃恒温过夜培... 以转VEGF基因和转Tβ4基因陕北白绒山羊与野生型陕北白绒山羊为研究对象,采集其新鲜粪便样品,用灭菌生理盐水进行梯度稀释后,分别接种LB固体培养基、TPY琼脂、胆硫乳琼脂、肠球菌琼脂、伊红美蓝琼脂和甘露醇盐琼脂培养基,37℃恒温过夜培养,再分别对平板上生长的所有需氧菌、双歧杆菌、沙门氏菌、肠球菌、大肠菌群和金黄色葡萄球菌进行菌落计数,并做显著性检验分析。结果表明,转VEGF基因和转Tβ4基因陕北白绒山羊与野生型陕北白绒山羊粪便中的需氧菌菌群结构之间不存在显著性差异。研究结果为转VEGF基因和转Tβ4基因陕北白绒山羊安全性评价研究提供了试验数据和研究基础。 展开更多
关键词 VEGF基因 tβ4基因 转基因陕北白绒山羊 粪便菌群结构 生物安全
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Exendin-4-Tβ4融合蛋白在毕赤酵母中的表达研究
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作者 张怡 周庆峰 +2 位作者 贾孟 张红绪 李成伟 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期74-78,共5页
为实现Exendin-4-Tβ4(以下简称Ex4-Tβ4)融合蛋白在毕赤酵母中的表达,采用重叠PCR法扩增出Ex4-Tβ4融合基因,将其克隆入表达质粒pPIC9KH,采用毕赤酵母GS115作为宿主菌,利用电转化法将重组载体pPIC9KH-Ex4-Tβ4转入GS115中,利用甲醇作... 为实现Exendin-4-Tβ4(以下简称Ex4-Tβ4)融合蛋白在毕赤酵母中的表达,采用重叠PCR法扩增出Ex4-Tβ4融合基因,将其克隆入表达质粒pPIC9KH,采用毕赤酵母GS115作为宿主菌,利用电转化法将重组载体pPIC9KH-Ex4-Tβ4转入GS115中,利用甲醇作为诱导物,对重组载体进行诱导表达,成功构建重组质粒pPIC9KH-Ex4-Tβ4,SDS-PAGE证明Ex4-Tβ4在毕赤酵母中能高效表达,成功地在毕赤酵母中表达了Ex4-Tβ4融合蛋白. 展开更多
关键词 EXENDIN-4 tβ4 毕赤酵母 糖尿病 皮肤溃疡
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调控民猪Tβ4基因转录因子的筛选与分析
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作者 张冬杰 汪亮 +1 位作者 刘洋 刘娣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2535-2542,共8页
为了筛选调控民猪胸腺β4(Tβ4)基因转录的增强子,探究该基因的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tβ4基因启动子区系列截短片段,与pMD18-T载体连接构建克隆质粒;通过双酶切和连接反应将系列截短片段定向连入pGL3-b... 为了筛选调控民猪胸腺β4(Tβ4)基因转录的增强子,探究该基因的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tβ4基因启动子区系列截短片段,与pMD18-T载体连接构建克隆质粒;通过双酶切和连接反应将系列截短片段定向连入pGL3-basic载体构建双荧光素酶重组质粒;将重组质粒转染PK15细胞系,利用双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;根据相对荧光素酶活性的高低进一步筛选Tβ4基因的启动子核心区域;利用3个在线软件预测核心区域内的转录因子结合位点,根据预测结果,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点构建突变载体,在PK15细胞中以野生型载体为对照检测突变载体的相对荧光素酶活性。结果表明,试验成功构建了6个Tβ4基因系列截短的启动子片段,其中5个片段具有明显的活性。经过两轮的双荧光素酶活性检测发现,-155^-105 bp区域为民猪Tβ4基因的启动子核心区域,经生物信息学分析发现,该区域存在E2F-1、MYBAS1和ELK-1转录因子的结合位点。利用定点缺失构建了3个转录因子缺失的突变载体,经双荧光素酶检测发现仅有ELK-1结合位点的缺失,会造成启动子活性的显著下降(P<0.05)。据此推测ELK-1是民猪Tβ4基因转录的正调控元件。 展开更多
关键词 民猪 tβ4基因 启动子 荧光素酶活性 增强子
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黔北麻羊Tβ4基因多态性及生物信息学分析 被引量:4
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作者 罗铮 翁吉梅 +3 位作者 艾锦新 龙安炬 罗卫星 蔡惠芬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第8期2406-2414,共9页
本研究旨在对黔北麻羊胸腺素β4(thymosin beta 4,Tβ4)基因的多态位点进行筛选及生物信息学分析。根据GenBank中山羊Tβ4基因序列(登录号:NC_030810和NW_017189516),应用Primer Premier 5.0软件设计引物,运用混合DNA池结合PCR产物直接... 本研究旨在对黔北麻羊胸腺素β4(thymosin beta 4,Tβ4)基因的多态位点进行筛选及生物信息学分析。根据GenBank中山羊Tβ4基因序列(登录号:NC_030810和NW_017189516),应用Primer Premier 5.0软件设计引物,运用混合DNA池结合PCR产物直接测序获得黔北麻羊Tβ4基因X染色体第1、2、3外显子和3号染色体第1外显子序列进行多态性分析,利用生物信息学分析软件对黔北麻羊Tβ4基因进行同源性、系统进化树、理化性质、疏水性、卷曲螺旋、跨膜结构、信号肽、亚细胞定位、结构域、磷酸化位点、糖基化位点、二级结构和三级结构分析。结果显示,共筛选出10个SNPs,分别为:G55C、C82T、G112A、C129T、G216A、G431A、G551T、T579A、A609G和A619G。同源性比对分析结果显示,黔北麻羊与黄牛、马、野猪、人、裸滨鼠、褐家鼠、小家鼠和原鸡Tβ4基因核苷酸序列同源性分别为97.8%、96.3%、95.6%、94.1%、94.8%、91.1%、92.6%和86.7%。蛋白理化性质分析显示,黔北麻羊Tβ4蛋白理论等电点为5.02,亲水值最小为-3.011,无疏水性氨基酸,无卷曲螺旋,不是跨膜蛋白,无信号肽存在,分布在细胞核(60.9%)、线粒体(4.3%)、细胞骨架(17.4%)和细胞质(17.4%),有1个THY结构域,有1个苏氨酸磷酸化位点,无N糖基化位点,有4个O糖基化位点。二级结构分析显示,C129T突变使其蛋白质二级结构中α-螺旋增加,无规则卷曲减少。本研究成功筛选出黔北麻羊Tβ4基因多态位点,为研究黔北麻羊育种的分子遗传标记辅助选择提供了参考依据。 展开更多
关键词 黔北麻羊 tβ4基因 生物信息学
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胸腺肽Tβ_4 被引量:2
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作者 陈妍珂 苟兴春 李仁德 《生命的化学》 CAS CSCD 2003年第1期17-20,共4页
胸腺肽Tβ4是具有多重生物功能的小肽 ,是肌动蛋白的结合蛋白之一 ,该多肽的基因差异性表达与肿瘤恶变和转移、胚胎发育等关系密切 ,本文综述了胸腺肽Tβ4的研究进展。
关键词 胸腺肽tβ4 功能 基因表达 研究进展
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重组融合肽Tβ4-BP5基因的克隆、表达及其免疫佐剂特性 被引量:1
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作者 王臣 郭香玲 +2 位作者 李小康 李德元 陈溥言 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1476-1482,共7页
胸腺肽Tβ4和法氏囊活性五肽BP5均能够调节机体的免疫反应,为探讨重组融合肽Tβ4-BP5是否也与免疫功能相关,本试验按照大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成重组融合肽Tβ4-BP5基因,将其克隆至pET-32α表达载体中,重组表达载体在大肠杆菌BL21... 胸腺肽Tβ4和法氏囊活性五肽BP5均能够调节机体的免疫反应,为探讨重组融合肽Tβ4-BP5是否也与免疫功能相关,本试验按照大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成重组融合肽Tβ4-BP5基因,将其克隆至pET-32α表达载体中,重组表达载体在大肠杆菌BL21中诱导表达。为进一步评价重组融合肽Tβ4-BP5的免疫佐剂特性,以Tβ4-BP5联合灭活H9N2型AIV疫苗免疫鸡,检测免疫后鸡的HI抗体效价、抗原特异性IgG抗体、AIV中和抗体效价及Th1型(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的分泌水平,并通过动物免疫保护试验来评价其对鸡的免疫保护作用。结果显示,重组融合肽Tβ4-BP5在大肠杆菌中获得表达;Tβ4-BP5能够增强机体免疫后HI抗体、特异性IgG抗体水平、促进AIV中和抗体的产生、提高Th1型(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的分泌水平,表明Tβ4-BP5既能增强机体体液免疫应答,又能增强细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示Tβ4-BP5有助于鸡肺脏中H9N2型AIV病毒的清除。以上结果提示,重组融合肽Tβ4-BP5具有良好的免疫佐剂的潜能。本研究为新型疫苗佐剂的研究开发奠定了基础。 展开更多
关键词 胸腺肽tβ4 法氏囊活性五肽BP5 融合基因 克隆 表达 免疫佐剂特性
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siRNA沉默胸腺素β_4对鹿茸间充质干细胞增殖的影响 被引量:2
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作者 谢红梅 孟祥宇 +3 位作者 孙天霞 张丽轩 赵雨 曲毅 《长春中医药大学学报》 2016年第3期462-464,共3页
目的利用siRNA干扰技术研究胸腺素β_4(Tβ_4)基因沉默对鹿茸间充质干细胞(MSC)增殖的影响。方法鹿茸MCS分为阴性对照组、siRNA-Tβ_4转染组2组。MTT检测MSC增殖的变化,Real-time PCR检测ILK、AKT及Cyclin D1 mRNA表达量差异变化,Wester... 目的利用siRNA干扰技术研究胸腺素β_4(Tβ_4)基因沉默对鹿茸间充质干细胞(MSC)增殖的影响。方法鹿茸MCS分为阴性对照组、siRNA-Tβ_4转染组2组。MTT检测MSC增殖的变化,Real-time PCR检测ILK、AKT及Cyclin D1 mRNA表达量差异变化,Western blot检测AKT及P-AKT蛋白含量变化。结果 siRNA-Tβ_4转染组MSC增殖受到显著抑制(P<0.01);siRNA-Tβ_4转染组ILK、Cyclin D1 mRNA表达量下调,AKT mRNA表达量不变;siRNA-Tβ_4转染组总AKT蛋白含量无变化,P-AKT蛋白含量减少。结论 Tβ_4基因沉默能显著抑制MSC增殖,并可能通过下调ILK、P-AKT及细胞周期相关蛋白CyclinD1从而抑制MSC细胞增殖。 展开更多
关键词 RNA干扰 tβ4 间充质干细胞 ILK/AKt信号通路
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重组Tβ4②分离纯化条件的优化及实验室研究工艺的确定
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作者 张雨婷 柳佳欣 +5 位作者 何磊 张阔 王舒宁 郝强 李萌 张旺倩 《药物生物技术》 2021年第3期239-244,共6页
优化重组蛋白Tβ4②的纯化条件,最终获得纯度大于98%的具有生物活性的Tβ4②,为后续研究奠定基础。采用单因素试验,研究裂解液体积、裂菌方法、超声功率、硫酸铵饱和度等对重组蛋白纯化的影响,确定最佳的裂解方法和硫酸铵饱和度;通过对T... 优化重组蛋白Tβ4②的纯化条件,最终获得纯度大于98%的具有生物活性的Tβ4②,为后续研究奠定基础。采用单因素试验,研究裂解液体积、裂菌方法、超声功率、硫酸铵饱和度等对重组蛋白纯化的影响,确定最佳的裂解方法和硫酸铵饱和度;通过对Tβ4②蛋白理化性质的预测,确定最佳的层析方案。采用1∶7的菌体与裂解液体积比,45%的超声功率或高压匀浆技术,50%的硫酸铵饱和度作为粗提纯的最佳条件,并通过疏水作用层析分离获得了纯度大于98%的重组蛋白。该研究优化了重组蛋白Tβ4②的纯化条件,最终获得了纯度大于98%的重组蛋白,蛋白回收率为(0.26±0.02)%,且与Tβ4单体相比,Tβ4②可以明显促进内皮细胞的迁移。 展开更多
关键词 胸腺肽β4 二串体 大肠杆菌 细胞破碎 盐析 疏水层析
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克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4基因并稳定转染胎儿成纤维细胞 被引量:4
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作者 王彦凤 梁燕 +6 位作者 金永 王晓晶 郭旭东 王玮 王潇 王志钢 刘东军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第21期4497-4504,共8页
【目的】克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4(thymosinbeta4,Tβ4)基因,构建皮肤特异性表达载体,转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达红色荧光蛋白并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】通过RT-PCR克隆Tβ4基因cDNA序列,然后... 【目的】克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4(thymosinbeta4,Tβ4)基因,构建皮肤特异性表达载体,转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达红色荧光蛋白并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】通过RT-PCR克隆Tβ4基因cDNA序列,然后与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成Tβ皮肤特异性表达载体pCDsRed-KT。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】克隆了内蒙古白绒山羊Tβ4基因,cDNA全长142bp,其中包含135bp的完整ORF,编码44个氨基酸残基,氨基酸序列与已报道的牛胸腺素β4(NM_001002885)同源性为100%。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KT中,Tβ4基因正确连接在皮肤特异性启动子KAP6-1下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和Tβ4基因整合到细胞基因组中,筛选出的转基因细胞高效表达红色荧光蛋白。【结论】克隆得到内蒙古白绒山羊Tβ4基因并构建成功其真核表达载体,可稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过核移植方法获得转胸腺素β4基因绒山羊提供了条件。 展开更多
关键词 内蒙古白绒山羊 胸腺素β4 皮肤特异性表达载体 稳定转染
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胸腺肽β4对乳腺癌化疗相关心脏毒性的诊断价值 被引量:2
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作者 薛剑 袁芳 +1 位作者 于农 张孝忠 《标记免疫分析与临床》 CAS 2014年第5期516-519,共4页
目的探讨胸腺肽β4(Tβ4)在化疗相关心脏毒性中的诊断价值。方法采用双抗体夹心ELISA法测定129例乳腺癌化疗患者血清Tβ4浓度,分析其化疗前后浓度变化与心脏毒性发生的相关性,分析其诊断心脏毒性的敏感性与特异性。结果共18例(13.95%)... 目的探讨胸腺肽β4(Tβ4)在化疗相关心脏毒性中的诊断价值。方法采用双抗体夹心ELISA法测定129例乳腺癌化疗患者血清Tβ4浓度,分析其化疗前后浓度变化与心脏毒性发生的相关性,分析其诊断心脏毒性的敏感性与特异性。结果共18例(13.95%)患者出现心脏毒性,心脏毒性组患者血清中Tβ4水平显著高于无毒性组(P<0.01);根据ROC曲线,Tβ诊断乳腺癌化疗后心脏毒性的曲线下面积为0.829(95%CI:0.709-0.937),综合考虑ROC曲线,设血清Tβ4水平6000pg/mL为诊断心脏毒性的临界点,其诊断乳腺癌心脏毒性的敏感性和特异性分别为72.22%、85.60%。结论本研究证实Tβ4在早期诊断心脏毒性的应用价值,提示其可能成为较理想的心脏毒性诊断的血清标志物。 展开更多
关键词 乳腺癌 胸腺肽β4 心脏毒性
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表达红色荧光及转胸腺素β4基因绵羊胎儿成纤维细胞系的制备 被引量:1
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作者 王彦凤 梁燕 +7 位作者 王玮 史偈君 金永 王晓晶 郭旭东 王潇 王志钢 刘东军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期158-162,共5页
旨在构建胸腺素β4(thymosin beta4,Tβ4)基因真核表达载体并转染绵羊胎儿成纤维细胞,获得稳定表达胸腺素β4及红色荧光蛋白的转基因细胞克隆。将克隆载体pMD19TT中的胸腺素β4基因亚克隆到表达载体pIRES2-DsRed2的多克隆位点,构建表达... 旨在构建胸腺素β4(thymosin beta4,Tβ4)基因真核表达载体并转染绵羊胎儿成纤维细胞,获得稳定表达胸腺素β4及红色荧光蛋白的转基因细胞克隆。将克隆载体pMD19TT中的胸腺素β4基因亚克隆到表达载体pIRES2-DsRed2的多克隆位点,构建表达载体pIRES2-DsRed2-Tβ4,脂质体介导转染绵羊胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。RT-PCR检测Tβ4基因在宿主细胞中的转录。测序结果显示,构建的表达载体pIRES2-DsRed2-Tβ4序列中,Tβ4基因正确连接在CMV启动子下游,顺序连接IRES2序列和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为15%,经G418筛选得到转基因细胞克隆并高效表达红色荧光蛋白。RT-PCR检测显示外源Tβ4基因在绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录。成功构建具有红色荧光蛋白和新霉素抗性双选择标记的胸腺素β4基因真核表达载体并稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞,筛选得到的超表达胸腺素β4绵羊胎儿成纤维细胞系为下一步通过核移植和克隆技术获得转基因绵羊提供了条件。 展开更多
关键词 胸腺素β4 绵羊胎儿成纤维细胞 转基因细胞系
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胸腺肽β4基因的克隆、表达及活性检测 被引量:1
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作者 赵晓民 张晓光 +1 位作者 吴淑华 童德文 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第9期17-21,共5页
【目的】在大肠杆菌中克隆和表达胸腺肽β4(thymosinβ4,Tβ4)基因,并进行分离纯化及免疫活性测定。【方法】将基因序列拆分成10个互补的小片段,互为模板,采用PCR两步法扩增得到Tβ4基因。将Tβ4基因片段克隆至pTXB1载体的NdeⅠ和XhoⅠ... 【目的】在大肠杆菌中克隆和表达胸腺肽β4(thymosinβ4,Tβ4)基因,并进行分离纯化及免疫活性测定。【方法】将基因序列拆分成10个互补的小片段,互为模板,采用PCR两步法扩增得到Tβ4基因。将Tβ4基因片段克隆至pTXB1载体的NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,将重组质粒转化至E.coliBL21 codon plus,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、几丁质(Chitin beads)亲和层析柱纯化Tβ4。然后用MTT法测定Tβ4的免疫活性。【结果】经测序表明获得了序列正确的人胸腺肽β4基因,构建重组质粒pTXB1-Tβ4,经SDS-PAGE电泳分析表明,重组质粒pTXB1-Tβ4在E.coliBL21 codon plus中高效表达,表达量为30%。将表达产物用几丁质亲和层析柱纯化,获得较纯的Tβ4。MTT检测表明,Tβ4有促进淋巴细胞增殖的活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/mL。【结论】获得高效表达的、高纯度的、有生物活性的重组Tβ4,它可促进淋巴细胞的分化、增殖,具有免疫活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/mL。 展开更多
关键词 人胸腺肽β4 基因表达 Mtt 活性检测
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胸腺素β4的生物活性研究进展与展望
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作者 彭良会 《中国科技期刊数据库 医药》 2022年第3期161-164,共4页
胸腺素β4介导了多种生物学反应,如诱导血管新生、炎症控制和抑制骨髓干细胞增殖作用等,得到研究者门的青睐,并针对胸腺素β4的生物活性进行了大量生理机制研究,对于开发相关药物具有重要的指导意义。本文对目前有关胸腺素β4生物活性... 胸腺素β4介导了多种生物学反应,如诱导血管新生、炎症控制和抑制骨髓干细胞增殖作用等,得到研究者门的青睐,并针对胸腺素β4的生物活性进行了大量生理机制研究,对于开发相关药物具有重要的指导意义。本文对目前有关胸腺素β4生物活性研究的进展情况进行综述,并且对其研究提出展望,以期对相关科研工作的开展提供理论基础。 展开更多
关键词 胸腺素β4(tβ4) 生物活性 药理作用 生物学功能
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